生物药物分析与检测抗生素药物分析精选PPT.ppt

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1、关于生物药物分析与检测抗生素药物分析第1页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）定义（一）定义 抗生素（抗生素（antibiotics）是指在低微浓度下即可对某些生物的生）是指在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。是由细菌、真菌或其它命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。是由细菌、真菌或其它微生物在生活过程中所产生的对各种病原微生物有强大的抑制或杀微生物在生活过程中所产生的对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用的一类重要药物。灭作用的一类重要药物。第一节第一节 概概 述述 一、抗生素药物的特点一、抗生素药物的特点 第2页，讲稿共37张，创作于星期二 （二）抗生素质量

2、的复杂性（二）抗生素质量的复杂性 1、化学纯度较低。同系物多；异构体多；降解物多。、化学纯度较低。同系物多；异构体多；降解物多。2、活性成分易发生变异。生产工艺复杂，发酵过程不易控、活性成分易发生变异。生产工艺复杂，发酵过程不易控制，易受污染。制，易受污染。3、产品稳定性差。分子结构大多不稳定，降解后疗效下降、失效或、产品稳定性差。分子结构大多不稳定，降解后疗效下降、失效或增加毒副作用。增加毒副作用。第一节第一节 概概 述述 一、抗生素药物的特点一、抗生素药物的特点 第3页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）鉴别试验（一）鉴别试验 1官能团的显色反应官能团的显色反应 如如内酰胺类的羟肟酸铁反应

3、、氨基糖苷内酰胺类的羟肟酸铁反应、氨基糖苷类的麦芽酚反应等。类的麦芽酚反应等。2光谱法光谱法 包括紫外吸收光谱和红外吸收光谱。包括紫外吸收光谱和红外吸收光谱。3色谱法色谱法 包括高效液相色谱和薄层色谱。包括高效液相色谱和薄层色谱。4生物学法生物学法 检查抗生素的抗菌能力。检查抗生素的抗菌能力。第一节第一节 概概 述述 二、抗生素药物的质量分析二、抗生素药物的质量分析 第4页，讲稿共37张，创作于星期二 （二）检查（二）检查 1影响产品稳定性的指标影响产品稳定性的指标 包括晶型、水分、包括晶型、水分、pH等。等。2控制有机和无机杂质的指标控制有机和无机杂质的指标 包括澄清度与颜色、有关物质、包括

4、澄清度与颜色、有关物质、残留溶剂、炽灼残渣、重金属等。残留溶剂、炽灼残渣、重金属等。3与临床安全性密切相关的指标与临床安全性密切相关的指标 包括异常毒性、热原、细菌或内毒包括异常毒性、热原、细菌或内毒素、降压物质、无菌等。素、降压物质、无菌等。4其他指标其他指标 对多组分抗生素进行组分分析等。对多组分抗生素进行组分分析等。第一节第一节 概概 述述 二、抗生素药物的质量分析二、抗生素药物的质量分析 第5页，讲稿共37张，创作于星期二 （三）含量测定或效价测定（三）含量测定或效价测定 1微生物检定法：以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来微生物检定法：以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来衡量

5、抗生素效价的一种方法。具有测定结果与临床效果一致、灵敏度高、衡量抗生素效价的一种方法。具有测定结果与临床效果一致、灵敏度高、干扰物质少等特点。但也存在操作繁琐、培养时间长、测定误差大等缺干扰物质少等特点。但也存在操作繁琐、培养时间长、测定误差大等缺点。点。2理化方法：根据抗生素的分子结构特点，利用其特有的理化方法：根据抗生素的分子结构特点，利用其特有的化学或物理化学及反应而进行的。理化方法优点是准确度高、化学或物理化学及反应而进行的。理化方法优点是准确度高、操作简便、快速，但其含量不一定代表生物效价，测定方法易操作简便、快速，但其含量不一定代表生物效价，测定方法易受杂质干扰等问题。受杂质干扰等

6、问题。第一节第一节 概概 述述 二、抗生素药物的质量分析二、抗生素药物的质量分析 第6页，讲稿共37张，创作于星期二 1-内酰胺类：主要包括青霉素类和头孢菌素类等。内酰胺类：主要包括青霉素类和头孢菌素类等。2氨基糖苷类：包括链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、氨基糖苷类：包括链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素等。丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素等。3四环素类：包括四环素、土霉素、金霉素等。四环素类：包括四环素、土霉素、金霉素等。4氯霉素类：包括氯霉素、甲砜霉素等。氯霉素类：包括氯霉素、甲砜霉素等。5大环内脂类：临床常用的有红霉素、白霉素、无味红霉素、乙大环内脂

7、类：临床常用的有红霉素、白霉素、无味红霉素、乙酰螺旋霉素、麦迪霉素、交沙霉素等。酰螺旋霉素、麦迪霉素、交沙霉素等。6其它：如作用于其它：如作用于G+细菌的其它抗生素：如林可霉素、氯林细菌的其它抗生素：如林可霉素、氯林可霉素、万古霉素、杆菌肽等；可霉素、万古霉素、杆菌肽等；第一节第一节 概概 述述 三、抗生素的分类三、抗生素的分类 第7页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）化学结构（一）化学结构 青霉素类的分子结构是由母核青霉素类的分子结构是由母核6-氨基青霉烷酸（氨基青霉烷酸（6-APA）和侧）和侧链链RCO-两部分结合而成。孢菌素类的分子结构是由母核两部分结合而成。孢菌素类的分子结构是由母核

8、6-氨基头孢氨基头孢烷酸（烷酸（7-ACA）和侧链）和侧链RCO-两部分结合而成。两部分结合而成。第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 第8页，讲稿共37张，创作于星期二 （二）性质（二）性质 1酸性酸性 青霉素类和头孢菌素类结构中有游离的羧基，具有较强的酸青霉素类和头孢菌素类结构中有游离的羧基，具有较强的酸性，性，pKa值在值在2.52.8之间，能与无机碱或某些有机碱成盐，如青之间，能与无机碱或某些有机碱成盐，如青霉素霉素G钠、青霉素钠、青霉素G钾等。钾等。2旋光性旋光性 青霉素类（青霉素类（3个手性碳原子）和头孢菌素类结构中都有手性碳个手性碳原

9、子）和头孢菌素类结构中都有手性碳原子（原子（2个），都具有旋光性。个），都具有旋光性。第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 第9页，讲稿共37张，创作于星期二 （二）性质（二）性质 3紫外吸收紫外吸收 青霉素类母核没有共轭系统，没有紫外吸收，但青霉素类药物青霉素类母核没有共轭系统，没有紫外吸收，但青霉素类药物在弱酸性下水解，可以产生具有共轭双键的青霉烯酸，在紫外光区在弱酸性下水解，可以产生具有共轭双键的青霉烯酸，在紫外光区有吸收。侧链中有苯环等取代基的药物，在紫外光区也有吸收。像有吸收。侧链中有苯环等取代基的药物，在紫外光区也有吸收。像苄青霉素。头

10、孢菌素类分子中有共轭体系（苄青霉素。头孢菌素类分子中有共轭体系（OCNCC）在）在波长波长260nm处有最大吸收。处有最大吸收。第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 第10页，讲稿共37张，创作于星期二 （二）性质（二）性质 4.-内酰胺环的不稳定性内酰胺环的不稳定性 干燥、纯净青霉素类抗生素稳定，其水溶液很不稳定不稳定的干燥、纯净青霉素类抗生素稳定，其水溶液很不稳定不稳定的部分是部分是-内酰胺环。内酰胺环。-内酰胺环在酸、碱、青霉素酶、某些金属离内酰胺环在酸、碱、青霉素酶、某些金属离子的作用下，可使子的作用下，可使-内酰胺环开环或发生分子重排，而

11、失去抗菌作内酰胺环开环或发生分子重排，而失去抗菌作用，形成一系列降解产物。用，形成一系列降解产物。第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 第11页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）呈色反应（一）呈色反应 1羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 青霉素和头孢菌素在碱性条件下与盐酸羟胺作用，青霉素和头孢菌素在碱性条件下与盐酸羟胺作用，-内酰内酰胺环破裂生成羟肟酸，在稀酸中与高铁离子显色。胺环破裂生成羟肟酸，在稀酸中与高铁离子显色。2类似肽键的反应类似肽键的反应 青霉素和头孢菌素均具有青霉素和头孢菌素均具有-CONH-结构，一些取代基有结构，一些取代基有-氨基氨基结

12、构，可显茚三酮反应和双缩脲反应。结构，可显茚三酮反应和双缩脲反应。第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 二、鉴别试验二、鉴别试验 第12页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）呈色反应（一）呈色反应 3其它呈色反应其它呈色反应 （1）与重氮苯磺酸反应）与重氮苯磺酸反应 头孢哌酮结构中含有酚羟基，可与重氮苯磺酸发生偶合反应头孢哌酮结构中含有酚羟基，可与重氮苯磺酸发生偶合反应而显色。而显色。（2）与变色酸）与变色酸-硫酸反应硫酸反应 青霉素类药物中，如阿莫西林、氨苄西林等结构中有活泼青霉素类药物中，如阿莫西林、氨苄西林等结构中有活泼“-CH2-”经硫酸加热分解生成的甲醛与变色酸反应而呈色。经

13、硫酸加热分解生成的甲醛与变色酸反应而呈色。第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 二、鉴别试验二、鉴别试验 第13页，讲稿共37张，创作于星期二 （二）各种盐的反应（二）各种盐的反应 K+、Na+的火焰反应的火焰反应 青霉素和头孢菌素类药物多制成钠盐青霉素和头孢菌素类药物多制成钠盐或钾盐使用，可利用火焰反应进行鉴别。或钾盐使用，可利用火焰反应进行鉴别。（三）光谱法（三）光谱法 1红外光谱法红外光谱法 内酰胺环上的羰基伸缩振动增强而向高波数方向位移，内酰胺环上的羰基伸缩振动增强而向高波数方向位移，仲酰胺的氨基、羰基伸缩振动，羧基离子伸缩振动是本类药物的仲酰胺的氨基、羰基伸缩振动，羧基离子伸

14、缩振动是本类药物的特征峰。特征峰。2紫外光谱法紫外光谱法 通常利用最大吸收波长进行鉴别。通常利用最大吸收波长进行鉴别。第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 二、鉴别试验二、鉴别试验 第14页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）聚合物（一）聚合物 聚合物的定量方法：聚合物的定量方法：一般用于一般用于SephadexG-10凝胶色谱凝胶色谱系统中系统中-内酰胺抗生素中高分子杂质的检查。在该分离系统中，除部分寡聚物外，内酰胺抗生素中高分子杂质的检查。在该分离系统中，除部分寡聚物外，-内酰胺抗生素中高分子杂质在色谱过程中均不保留，即所有的高内酰胺抗生素中高分子杂质在色谱过程中均不保留，即所有的

15、高分子杂质表现为单一的色谱峰，以药物自身为对照品，按外标法计分子杂质表现为单一的色谱峰，以药物自身为对照品，按外标法计算药品中高分子杂质的相对百分含量。算药品中高分子杂质的相对百分含量。第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查 第15页，讲稿共37张，创作于星期二垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断

16、地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。第16页，讲稿共37张，创作于星期二 （二）有关物质和异构体（二）有关物质和异构体 通常采用色谱法（通常采用色谱法（HPLC法等）检查法等）检查-内酰胺类抗生素中的有关内酰胺类抗生素中的有关物质和异构体。物质和异构体。（三）杂质吸光度（三）杂质吸光度 药典常采用测定杂质吸光度的方法来控制本类抗生素的杂质含药典常采用测定杂质吸光度的方法来控制本类抗生素的杂质含量。量。例如：将青霉素钠（钾）配成例如：将青霉素钠（钾）配成1.80mgml-1的溶液，在波长

17、的溶液，在波长280nm处的处的A0.10（控制杂质量）；在波长（控制杂质量）；在波长264nm处的处的A为为0.800.88（检查药物量）。（检查药物量）。第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查 第17页，讲稿共37张，创作于星期二 HPLC法具有快速、高效、灵敏、专属性强、重现性好等法具有快速、高效、灵敏、专属性强、重现性好等特点，在本类药的含量中应用越来广泛。特点，在本类药的含量中应用越来广泛。多数采用多数采用反向反向HPLC测定，以测定，以外标法外标法计算含量。计算含量。如氨苄西林原料药含量测定：取本品约如氨苄西林原料药含量测定：取本品约25

18、mg，精密称定，置，精密称定，置25ml容量瓶中，加稀释液适量，超声处理使溶解后，再用上述稀释液容量瓶中，加稀释液适量，超声处理使溶解后，再用上述稀释液稀释至刻度，摇匀，取稀释至刻度，摇匀，取20l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取注入液相色谱仪，记录色谱图；另取氨苄西林对照品氨苄西林对照品25mg，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中氨苄西林（中氨苄西林（C16H19N3O4S）的含量。）的含量。第二节第二节 -内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 四、含量测定四、含量测定 第18页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）化学结构（一）化学结构 链霉素的结构是由链霉

19、胍和链霉糖、链霉素的结构是由链霉胍和链霉糖、N-甲基甲基-L-葡萄糖胺结合而葡萄糖胺结合而成的碱性苷。成的碱性苷。第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 第19页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）化学结构（一）化学结构 庆大霉素是由紫素胺和脱氧链霉胺、庆大霉素是由紫素胺和脱氧链霉胺、N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺结合而成的苷。它是由三个类似结构的基戊糖胺结合而成的苷。它是由三个类似结构的C1、C2、C1a组成的组成的混合物混合物。第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 C1：R1=R2=

20、CH3;C2：R1=CH3,R2=H;C1a：R1=R2=H,R3=H 第20页，讲稿共37张，创作于星期二 （二）性质（二）性质 1碱性与溶解性：由于结构中含有多个羟基和碱性基团。碱性与溶解性：由于结构中含有多个羟基和碱性基团。2旋光性：本类药物结构中有多个氨基糖，具有旋光性。如硫酸庆旋光性：本类药物结构中有多个氨基糖，具有旋光性。如硫酸庆大霉素的比旋度为大霉素的比旋度为+107。+121。3稳定性：硫酸链霉素和硫酸庆大霉素干燥品比较稳定，硫酸稳定性：硫酸链霉素和硫酸庆大霉素干燥品比较稳定，硫酸链霉素水溶液在链霉素水溶液在pH57.5最稳定，硫酸庆大霉素在最稳定，硫酸庆大霉素在pH212比较

21、稳定。比较稳定。4UV：链霉素：链霉素max=230nm，庆大霉素无共轭双键，因此无，庆大霉素无共轭双键，因此无紫外吸收。紫外吸收。第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 第21页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）茚三酮反应（一）茚三酮反应 本类药物具有羟基胺结构和本类药物具有羟基胺结构和-氨基，可与茚三酮缩合，生成蓝紫氨基，可与茚三酮缩合，生成蓝紫色化合物。色化合物。取庆大霉素取庆大霉素5mg，加水，加水1ml，0.1%茚三酮的水饱和正丁醇溶液茚三酮的水饱和正丁醇溶液1ml，吡啶，吡啶0.5ml，水浴加热，水浴加热5min，显紫色。，显紫色。（

22、二）（二）Molisch试验试验 具有五碳糖或六碳糖结构的氨基糖苷类抗生素经酸水解后，在具有五碳糖或六碳糖结构的氨基糖苷类抗生素经酸水解后，在盐酸或硫酸作用下脱水，成糠醛（五碳）或羟甲基糠醛（六碳糖）盐酸或硫酸作用下脱水，成糠醛（五碳）或羟甲基糠醛（六碳糖）。这些产物遇。这些产物遇a-萘酚或蒽酮成色。萘酚或蒽酮成色。第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素 二、鉴别试验二、鉴别试验 第22页，讲稿共37张，创作于星期二 （三）（三）N-甲基葡萄糖胺反应（甲基葡萄糖胺反应（Elson-Morgan反应）反应）链霉素水解产物链霉素水解产物N-甲基葡萄糖胺在碱性溶液中与乙酰丙酮缩甲基葡萄糖胺在

23、碱性溶液中与乙酰丙酮缩合成吡咯衍生物，与二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反应，即生合成吡咯衍生物，与二甲氨基苯甲醛的酸性醇溶液反应，即生成红色化合物。成红色化合物。（四）麦芽酚（四）麦芽酚（Maltol）反应）反应 链霉素在碱性溶液中，链酶糖经分子重排，消除链霉素在碱性溶液中，链酶糖经分子重排，消除N甲基葡甲基葡萄糖胺及链酶胍，生成麦牙酚，麦牙酚可与铁离子在微酸性溶萄糖胺及链酶胍，生成麦牙酚，麦牙酚可与铁离子在微酸性溶液中形成紫红色配位化合物。液中形成紫红色配位化合物。第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素 二、鉴别试验二、鉴别试验 第23页，讲稿共37张，创作于星期二 （五）坂口反应（五）

24、坂口反应 本品水溶液，加氢氧化钠试液，水解为链酶胍，与本品水溶液，加氢氧化钠试液，水解为链酶胍，与8羟基喹羟基喹啉作用，再加次溴酸钠试液，生成橙红色化合物。啉作用，再加次溴酸钠试液，生成橙红色化合物。（六）硫酸盐反应（六）硫酸盐反应 本类药物多为硫酸盐，可利用硫酸盐与氯化钡试液生成白色硫酸钡沉本类药物多为硫酸盐，可利用硫酸盐与氯化钡试液生成白色硫酸钡沉淀进行鉴别。淀进行鉴别。第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素 二、鉴别试验二、鉴别试验 第24页，讲稿共37张，创作于星期二 （七）（七）TLC法法 中国药典中国药典2005版采用该法对硫酸庆大霉素进行鉴别。方法：取供试品版采用该法对硫

25、酸庆大霉素进行鉴别。方法：取供试品溶液和对照品溶液各溶液和对照品溶液各2l，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶G薄层板上，用氯仿薄层板上，用氯仿-甲醇甲醇-氨水（氨水（1:1:1）的下层混合液为展开剂，展开后，晾干，置碘蒸气中）的下层混合液为展开剂，展开后，晾干，置碘蒸气中显色，供试品溶液和对照品溶液所显斑点的颜色和位置应一致。显色，供试品溶液和对照品溶液所显斑点的颜色和位置应一致。（八）光谱法（八）光谱法 采用红外光谱法可鉴别庆大霉素。庆大霉素无紫外吸收，而链霉采用红外光谱法可鉴别庆大霉素。庆大霉素无紫外吸收，而链霉素可采用紫外法鉴别，素可采用紫外法鉴别，max=230nm。第三节第三节 氨

26、基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素 二、鉴别试验二、鉴别试验 第25页，讲稿共37张，创作于星期二 取本品适量，精密称定，加水制成含取本品适量，精密称定，加水制成含0.65mgml-1的溶液，取的溶液，取4ml置置10ml容量瓶中，加异丙醇容量瓶中，加异丙醇2ml与邻苯二醛试液与邻苯二醛试液1.6ml，用异丙，用异丙醇稀释至刻度，摇匀，置醇稀释至刻度，摇匀，置60水浴中加热水浴中加热15min，冷却，滤过，量，冷却，滤过，量取滤液取滤液10l注入高效液相色谱仪，记录色谱图。另取庆大霉素标注入高效液相色谱仪，记录色谱图。另取庆大霉素标准品，同法测定。准品，同法测定。C组分的保留时间依次为：组分的保留

27、时间依次为：C1、C1、C2、C2。量取量取C1、C1、C2、C2的峰高，按峰面积归一化法计算：的峰高，按峰面积归一化法计算：第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素 三、特殊杂质检查及组分分析三、特殊杂质检查及组分分析 规定：规定：C1 应为应为2550%，C1a应为应为1540%，C2a+C2应为应为2050%。第26页，讲稿共37张，创作于星期二 目前各国药典均采用微生物检定法测定本类药物的效价。本目前各国药典均采用微生物检定法测定本类药物的效价。本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两

28、者对接种的试验菌产生抑理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素 四、含量测定四、含量测定 第27页，讲稿共37张，创作于星期二（一）化学结构（一）化学结构 四环素类抗生素具有十二氢化并四苯基本结构，属于广谱抗菌药四环素类抗生素具有十二氢化并四苯基本结构，属于广谱抗菌药物。物。第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 药药物名称物名称RR1R2R3四四环环素素金霉素金霉素HClOHOHCH3CH3HH第28页，讲稿共37

29、张，创作于星期二 （二）性质（二）性质 1酸碱性与溶解度酸碱性与溶解度 本类抗生素结构中含有酚羟基、烯醇型羟基，显弱酸性，本类抗生素结构中含有酚羟基、烯醇型羟基，显弱酸性，而二甲胺基又显弱碱性，故四环素类抗生素是两性化合物。而二甲胺基又显弱碱性，故四环素类抗生素是两性化合物。与酸、碱均能成盐。与酸、碱均能成盐。2旋光性旋光性 四环素类抗生素分子结构中具有不对称碳原子，有旋光性，四环素类抗生素分子结构中具有不对称碳原子，有旋光性，可用于定性、定量分析。可用于定性、定量分析。第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 第29页，讲稿共37张，创作于星期二 （二

30、）性质（二）性质 3紫外吸收和荧光性质紫外吸收和荧光性质 四环素类抗生素分子结构中具有共轭双键系统，在紫外区四环素类抗生素分子结构中具有共轭双键系统，在紫外区有吸收，在紫外照射下可产生荧光，它们的降解产物也具有有吸收，在紫外照射下可产生荧光，它们的降解产物也具有荧光。荧光。4与金属离子络合与金属离子络合 与金属离子与金属离子Ca2+、Mg2+、Fe3+、Al3+生成有色配位化合物，并在生成有色配位化合物，并在pH3 7.5产生荧光。产生荧光。第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 第30页，讲稿共37张，创作于星期二（二）性质（二）性质 5不稳定性不稳

31、定性 （1）差向异构化）差向异构化 弱酸性（弱酸性（pH2.06.0）溶液中，）溶液中，A环上手性环上手性C4构型的改变，发生构型的改变，发生差向异构化，形成差向四环素。差向异构化，形成差向四环素。四环素和金霉素很易差向异构化，形成四环素和金霉素很易差向异构化，形成4-差向四环素、差向四环素、4-差差向金霉素，他们的抗菌性极弱或完全消失。土霉素和强力霉素由于向金霉素，他们的抗菌性极弱或完全消失。土霉素和强力霉素由于C5上的羟基和二甲胺基形成氢键，不易发生差向异构化。上的羟基和二甲胺基形成氢键，不易发生差向异构化。第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质

32、第31页，讲稿共37张，创作于星期二（二）性质（二）性质 5不稳定性不稳定性 （2）酸性降解反应）酸性降解反应 在酸性（在酸性（pH2）时，）时，C环上环上C6上羟基易脱落与上羟基易脱落与C5a上的氢生成水，上的氢生成水，在在C6-C5a间形成双键。经重排使间形成双键。经重排使C环芳构化，生成脱水四环素类。环芳构化，生成脱水四环素类。（3）碱性降解反应：）碱性降解反应：在碱性下，在碱性下，C环打开，生成无活性的具有内酯结构的异四环素；若环打开，生成无活性的具有内酯结构的异四环素；若强碱性下加热，可定量地转化为异四环素，后者具有强烈荧光，可荧强碱性下加热，可定量地转化为异四环素，后者具有强烈荧光

33、，可荧光法测定。光法测定。第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素 一、化学结构与性质一、化学结构与性质 第32页，讲稿共37张，创作于星期二（一）呈色反应（一）呈色反应 四环素类抗生素遇四环素类抗生素遇H2SO4、FeCl3均产生不同的颜色。均产生不同的颜色。第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素 二、鉴别试验二、鉴别试验 （二）色谱法（二）色谱法 HPLC、TLC法可用于四环素类抗生素鉴别，中国药典（法可用于四环素类抗生素鉴别，中国药典（2005版）版）均有收载。均有收载。（三）光谱法（三）光谱法 IR光谱法、光谱法、UV光谱法也可四环素类抗生素鉴别，中国药典光谱法也可四环素类抗生素

34、鉴别，中国药典（2005版）均有收载。版）均有收载。第33页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）有关物质（一）有关物质 引起毒性反应的主要物质为差向异构体、脱水物、差向脱引起毒性反应的主要物质为差向异构体、脱水物、差向脱水物质，统称为有关物质。主要有水物质，统称为有关物质。主要有4-差向四环素、脱水四环素、差向四环素、脱水四环素、差向脱水四环素、盐酸金霉素等。差向脱水四环素、盐酸金霉素等。第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素 三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查 第34页，讲稿共37张，创作于星期二 （一）有关物质（一）有关物质 中国药典中国药典2005版采用版采用HPLC法检查盐酸四环

35、素的有关物质：取法检查盐酸四环素的有关物质：取本品适量，加本品适量，加0.01molL-1盐酸溶液溶解并分别制成含盐酸溶液溶解并分别制成含2.0mgml-1和和0.04mgml-1溶液，作为供试品溶液和对照溶液。照溶液，作为供试品溶液和对照溶液。照含量测定项下方法试验，取对照溶液含量测定项下方法试验，取对照溶液20l注入液相色谱仪，调节检注入液相色谱仪，调节检测灵敏度使主成分峰高约为记录仪满量程的测灵敏度使主成分峰高约为记录仪满量程的10；再取供试品溶液和；再取供试品溶液和对照溶液各对照溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的的

36、4倍，供试品溶液如显杂质峰，与对照溶液主峰面积比较，计倍，供试品溶液如显杂质峰，与对照溶液主峰面积比较，计算，含算，含4-差向四环素、盐酸金霉素、脱水四环素、差向脱水四环差向四环素、盐酸金霉素、脱水四环素、差向脱水四环素分别不得过素分别不得过4.0、1.0、0.5、0.5 第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素 三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查 第35页，讲稿共37张，创作于星期二 （二）杂质吸光度（二）杂质吸光度 脱水物和差向脱水物含量越高，其吸光度越大，因此，中国药脱水物和差向脱水物含量越高，其吸光度越大，因此，中国药典典2005版还规定杂质的吸光度的限量。如盐酸四环素的杂质吸光度版还规定杂质的吸光度的限量。如盐酸四环素的杂质吸光度检查方法如下：检查方法如下：取本品，在取本品，在2025时加时加0.8氢氧化钠溶液制成含氢氧化钠溶液制成含10mgml-1的的溶液，照分光光度法，置溶液，照分光光度法，置4cm 的吸收池中，在波长的吸收池中，在波长530nm处测定，处测定，自加自加0.8 氢氧化钠溶液起氢氧化钠溶液起5 min时，其吸光度不得过时，其吸光度不得过0.12（供注射（供注射用）。用）。第四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素 三、特殊杂质的检查三、特殊杂质的检查 第36页，讲稿共37张，创作于星期二感谢大家观看第37页，讲稿共37张，创作于星期二