流式细胞术的原理和临床精选PPT.ppt

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1、关于流式细胞术的原理和临床第1页，讲稿共58张，创作于星期二 概概 述述 流式细胞术（流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）是一种自动是一种自动分析细胞的高技术，其原理是悬浮在液体中的分分析细胞的高技术，其原理是悬浮在液体中的分散细胞一个个地依次通过测量区，当每一个细胞散细胞一个个地依次通过测量区，当每一个细胞通过测量区时产生电信号，这些信号可以代表荧通过测量区时产生电信号，这些信号可以代表荧光、光散射，光吸收或细胞的阻抗等。这些信号光、光散射，光吸收或细胞的阻抗等。这些信号可以被测量、存贮、显示，于是细胞的一系列重可以被测量、存贮、显示，于是细胞的一系列重要的物理特性和生化特性就

2、被快速地、大量地测要的物理特性和生化特性就被快速地、大量地测定。定。第2页，讲稿共58张，创作于星期二 上述特性可以是细胞的大小、活性，核上述特性可以是细胞的大小、活性，核酸的数量、酶、抗原等等。仪器还可以酸的数量、酶、抗原等等。仪器还可以根据所规定的参量把指定的细胞亚群从根据所规定的参量把指定的细胞亚群从整个细胞群体中分选出来。整个细胞群体中分选出来。流式细胞术在当前的细胞生物学、免疫流式细胞术在当前的细胞生物学、免疫学、肿瘤学、血液学、遗传学、病理学、学、肿瘤学、血液学、遗传学、病理学、临床检验学等各领域有着十分广泛的用临床检验学等各领域有着十分广泛的用途。途。第3页，讲稿共58张，创作于

3、星期二 流流式式细细胞胞术术是是对对悬悬液液中中的的细细胞胞或或细细胞胞器器进进行行快快速速可可达达每每秒秒钟钟数数千千个个乃乃至至上上万万个个细细胞胞。这这样样，它它就就可可与与显显微微镜镜相相互互补补充充。显显微微镜镜术术可可以以研研究究组组织织的的结结构构、细细胞胞定定位位和和荧荧光光在在细细胞胞中中的的分分布布；而而多多数数流流式式细细胞胞术术是是一一种种零零分分辨辨率率的的仪仪器器，它它只只能能测测量量一一个个细细胞胞的的总总核核酸酸，总总蛋蛋白白等等而而不不能能测测量量细细胞胞中中某某一一特特定定部部位位的的核核酸酸或或蛋蛋白白，这是它的不足之处。这是它的不足之处。第4页，讲稿共5

4、8张，创作于星期二 由由于于现现代代荧荧光光技技术术和和多多参参数数相相关关测测量量技技术术的的发发展展，流流式式细细胞胞术术在在细细胞胞群群体体或或组组成成群群体体的的亚亚群群进进行行定定量量分分析析时时，又又具具有有其他手段无法比拟的优越性。其他手段无法比拟的优越性。用飞点扫描技术或缝隙扫描技术得到了用飞点扫描技术或缝隙扫描技术得到了细胞形态学方面低分辨率的信息，从而细胞形态学方面低分辨率的信息，从而改变了流式细胞仪零分辨率的传统观点。改变了流式细胞仪零分辨率的传统观点。第5页，讲稿共58张，创作于星期二流式细胞仪的结构nFCM是由细胞流动室、光源、聚光装置、信号检测器、电子计算机及高级别

5、仪器具有的细胞分选装置构成。第6页，讲稿共58张，创作于星期二细胞流动室n细胞流动室是FCM的心脏，它是根据流体力学中的层流鞘液原理设计而成，其结构包括石英小室形成的鞘液腔及插入其中的样品管。细胞呈单个排列通过流动室。第7页，讲稿共58张，创作于星期二光源n常用激光器：常用激光器：n氢离子激光器氢离子激光器 488nm兰色激光兰色激光n氩离子激光器氩离子激光器n氪离子激光器氪离子激光器第8页，讲稿共58张，创作于星期二聚光系统和检测系统n透镜、小孔、多种滤片透镜、小孔、多种滤片n检测器、放大器将光信号变成电脉冲检测器、放大器将光信号变成电脉冲信号信号第9页，讲稿共58张，创作于星期二计算机n信

6、号变成数据文件存储、分析信号变成数据文件存储、分析。第10页，讲稿共58张，创作于星期二流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的工作原理 待测细胞被制备成单个细胞的悬液，经待测细胞被制备成单个细胞的悬液，经特异性荧光染料染色后放入样品管中，特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入流动室。流动室内在气体的压力下进入流动室。流动室内充满鞘液，在鞘液的约束下，细胞排成充满鞘液，在鞘液的约束下，细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，成为细胞液单列由流动室的喷嘴喷出，成为细胞液柱。液柱与入射的激光束垂直相交，相柱。液柱与入射的激光束垂直相交，相交点称为测量区。交点称为测量区。第11页，讲稿共58张，创作于

7、星期二流式细胞仪的工作原理流式细胞仪的工作原理 通过测量区的细胞被激发产生荧光。在通过测量区的细胞被激发产生荧光。在与入射光束和液柱垂直的方向放置光学与入射光束和液柱垂直的方向放置光学系统（透镜、光阑、滤片和检测器等）系统（透镜、光阑、滤片和检测器等）用以收集荧光信号。图中的阻断滤片用用以收集荧光信号。图中的阻断滤片用于阻挡激发光，二色性反射镜用于选择于阻挡激发光，二色性反射镜用于选择被测荧光波长，荧光检测器是光电倍增被测荧光波长，荧光检测器是光电倍增管（管（PMT），），散射光检测器是光电二极散射光检测器是光电二极管，用来收集前向角散射光（管，用来收集前向角散射光（FSC）。）。第12页，讲

8、稿共58张，创作于星期二细胞分选（细胞分选（cell sorting）的工作原理的工作原理 液滴形成信号的频率约液滴形成信号的频率约30KHz，此信号此信号加在压电晶体上使之产生同频的机械振加在压电晶体上使之产生同频的机械振动，流动室也就随之振动。于是液柱断动，流动室也就随之振动。于是液柱断裂成一连串均匀的液滴，其形成的速度裂成一连串均匀的液滴，其形成的速度为每秒为每秒3万个。细胞通过喷嘴的速度大约万个。细胞通过喷嘴的速度大约每秒每秒2000个以下，如以个以下，如以2000个计算则个计算则平均每平均每15个液滴中有一个液滴包有细胞，个液滴中有一个液滴包有细胞，而其他液滴无细胞。细胞的性质是在进

9、而其他液滴无细胞。细胞的性质是在进入液滴以前已经被测定了的。入液滴以前已经被测定了的。第13页，讲稿共58张，创作于星期二细胞分选（细胞分选（cell sorting）的工作原理的工作原理 如果其特性与被选定要进行分选的细胞如果其特性与被选定要进行分选的细胞特性相符，则仪器在这个被选定的细胞特性相符，则仪器在这个被选定的细胞刚形成液滴时给整个液柱充以指定的电刚形成液滴时给整个液柱充以指定的电荷。这样，当被选定的细胞形成液滴时荷。这样，当被选定的细胞形成液滴时就带有特定的电荷，未被选定的细胞形就带有特定的电荷，未被选定的细胞形成的细胞液滴及不包含细胞的空白液滴成的细胞液滴及不包含细胞的空白液滴不

10、被充电，也不带电荷。带有电荷的液不被充电，也不带电荷。带有电荷的液滴向下落入指定的收集器内，从而完成滴向下落入指定的收集器内，从而完成了细胞分类收集的目的。了细胞分类收集的目的。第14页，讲稿共58张，创作于星期二流式细胞仪的流式细胞仪的 分选原理分选原理第15页，讲稿共58张，创作于星期二 流式细胞仪原理示意图流式细胞仪原理示意图第16页，讲稿共58张，创作于星期二散射光的测量散射光的测量n在在流流式式细细胞胞术术中中，从从光光的的散散射射信信号号可可以以得得到到非非常常有有价价值值的的信信息息。因因为为细细胞胞对对光光的的散散射射是是细细胞胞在在未未遭遭受受任任何何破破坏坏情情况况下下固固

11、有有的的特特性性，所所以以可可以以用用散散射射光光的的信信号号对对未未染染色色的的活活细细胞胞进行分析和分选。进行分析和分选。第17页，讲稿共58张，创作于星期二 细胞在液流中通过测量区时，经激光照细胞在液流中通过测量区时，经激光照射，细胞向空间射，细胞向空间360立体角的所有方向立体角的所有方向散射光线，散射的信号与细胞的大小、散射光线，散射的信号与细胞的大小、形状，质膜和细胞内部的折射率有关。形状，质膜和细胞内部的折射率有关。经过固定和染色的细胞，因折射率有了经过固定和染色的细胞，因折射率有了变化，故其散射状况与未固定或未染色变化，故其散射状况与未固定或未染色的不同。的不同。第18页，讲稿

12、共58张，创作于星期二 散射光与细胞参量间的关系与散射角、散射光与细胞参量间的关系与散射角、照射光束的形状、收集散射光立体角的照射光束的形状、收集散射光立体角的大小等都有关。在流式细胞术中常被利大小等都有关。在流式细胞术中常被利用的有前向角散射（用的有前向角散射（FSC）和侧向散射和侧向散射（SSC），），前者亦称前者亦称0散射，后者亦称散射，后者亦称90散射。散射。第19页，讲稿共58张，创作于星期二荧光测量荧光测量n荧荧光光信信号号是是由由对对细细胞胞进进行行染染色色的的特特异异性性荧荧光光染染料料受受激激后后发发射射的的。荧荧光光波波长长与与激激发发光光波波长长不不同同且且强强度度较较弱

13、弱，为为此此就就要要使使用用滤滤片片以以滤滤除除非非荧荧光光信信号号并并使使用用灵灵敏敏的的探测器。下面我们将分别进行讨论。探测器。下面我们将分别进行讨论。第20页，讲稿共58张，创作于星期二荧光测量荧光测量n激激光光与与普普通通光光线线不不同同；激激光光是是受受激激辐辐射射，普普通通光光线线是是自自发发辐辐射射。激激光光基基本本是是沿沿着着直直线线传传播播，发发散散角角很很小小，通通常常在在10-6球球面面度度量量级级的的立立体体角角内内，必必要要时时很很容容易易聚聚焦焦到到与与细细胞胞同同一一数数量量级级。激激光光的的亮亮度度高高，即即在在单单位位面面积积、单单位位立立体体角角内内输输出出

14、功功率率特特别别大大。激激光光还还具具有有良良好好的的单单色色性性，这这些特点都是贡灯所不具备的。些特点都是贡灯所不具备的。第21页，讲稿共58张，创作于星期二荧光测量荧光测量n流流式式细细胞胞术术中中使使用用的的多多为为氩氩离离子子激激光光器器，亦亦有有用用氪氪离离子子激激光光器器或或染染料料激激光光器器以以获获得得不不同同的的谱谱线线者者。氩氩离离子子激激光光器器是是一一种种气气体体激激光光器器，其其频频率率稳稳定定性性高高、相相干干性性好、寿命长。好、寿命长。第22页，讲稿共58张，创作于星期二荧光测量荧光测量n氩氩离离子子激激光光器器是是通通过过气气体体放放电电使使氩氩离离子子电电离离

15、并并激激发发，实实现现粒粒子子数数反反转转而而产产生生激激光光，谱谱线线共共十十余余条条，其其中中绿绿光光514nm和和蓝蓝光光488nm两两条条谱谱线线最最强强，几几乎乎占占总总输输出出功功率率的的80%。由由于于这这种种激激光光在在气气体体放放电电过过程程中中要要使使氩氩离离子子一一次次电电离离必必须须供供给给相相当当大大的的能能量量，所所以以要要求求有有几几百百伏伏和和每每平平方方毫米几个安培的稳定电源。毫米几个安培的稳定电源。第23页，讲稿共58张，创作于星期二检测器检测器光电倍增管和硅光电二极管光电倍增管和硅光电二极管n对从紫外到可见光的探测，有二类光电对从紫外到可见光的探测，有二类

16、光电器件可供选择：一类是真空光电器件；器件可供选择：一类是真空光电器件；另一类是半导体器件。后者在某些方面另一类是半导体器件。后者在某些方面有一定优点，如在强光照射时过载特性有一定优点，如在强光照射时过载特性较好，但在某些方面则明显地不及真空较好，但在某些方面则明显地不及真空光电器件。下面对光电倍增管和硅光电光电器件。下面对光电倍增管和硅光电二极管作一简单的比较二极管作一简单的比较。第24页，讲稿共58张，创作于星期二n在在200900nm谱区光电倍增管有很好谱区光电倍增管有很好的响应，量子效率高，而硅光电管则相的响应，量子效率高，而硅光电管则相当差。光电倍增的时间响应比半导体器当差。光电倍增

17、的时间响应比半导体器件快得多，特殊的光电倍增管上升时间件快得多，特殊的光电倍增管上升时间可仅为可仅为ns数量级，而硅光电管在考虑到数量级，而硅光电管在考虑到分布电容和负载时，实际上升时间可能分布电容和负载时，实际上升时间可能达数达数10US。第25页，讲稿共58张，创作于星期二n至于探测器的灵敏阈即探测极限，则与至于探测器的灵敏阈即探测极限，则与信噪比有关。假定信噪比等于信噪比有关。假定信噪比等于1，用光电，用光电倍增管在探测波长为倍增管在探测波长为400nm的谱线时，的谱线时，能测得的最小信号功率约为能测得的最小信号功率约为210-17w，而硅光电管在波长而硅光电管在波长1060nm处能探测

18、到处能探测到的最小功率大于的最小功率大于210-13W，两者相差两者相差四个数量级。四个数量级。第26页，讲稿共58张，创作于星期二n光电倍增管的增益可从光电倍增管的增益可从10 3到到10 8连续可连续可调，而一般硅光电管没有增益。在光线调，而一般硅光电管没有增益。在光线较弱时光电倍增管有很好的稳定性，但较弱时光电倍增管有很好的稳定性，但是当光线很强时硅光电管就比光电倍增是当光线很强时硅光电管就比光电倍增管稳定多了，所以在探测管稳定多了，所以在探测FSC时用硅光电时用硅光电管是合适的。由于荧光比管是合适的。由于荧光比SSC较较FSC弱得弱得多，这时探测器灵敏度是主要问题，因多，这时探测器灵敏

19、度是主要问题，因而应采用光电倍增管。而应采用光电倍增管。第27页，讲稿共58张，创作于星期二自发荧光n未染色的细胞受到光照射后所发出的荧未染色的细胞受到光照射后所发出的荧光称自发荧光。用流式细胞计测定细胞光称自发荧光。用流式细胞计测定细胞的特异性荧光染料的荧光时，这种自发的特异性荧光染料的荧光时，这种自发荧光对所欲测定的特异性荧光是一种本荧光对所欲测定的特异性荧光是一种本底信号，自发荧光在多种情况下都会干底信号，自发荧光在多种情况下都会干扰特异性荧光信号，尤其是对低水平结扰特异性荧光信号，尤其是对低水平结合的荧光抗体它能减低染色的和未染色合的荧光抗体它能减低染色的和未染色的细胞间的区别，使我们

20、难以确定细胞的细胞间的区别，使我们难以确定细胞中荧光信号的水平。中荧光信号的水平。第28页，讲稿共58张，创作于星期二n自发荧光的强弱与细胞的大小、细胞的自发荧光的强弱与细胞的大小、细胞的类型、激发光的波长、发射光的检测范类型、激发光的波长、发射光的检测范围等都有关系。产生自发荧光的分子可围等都有关系。产生自发荧光的分子可能是正常细胞的组成成分如核黄素、细能是正常细胞的组成成分如核黄素、细胞色素等。这些成分在较大的细胞中含胞色素等。这些成分在较大的细胞中含量较多，相应的自发荧光也就强一些量较多，相应的自发荧光也就强一些。第29页，讲稿共58张，创作于星期二n培养的细胞中死细胞比活细胞的自发荧培

21、养的细胞中死细胞比活细胞的自发荧光要强，在某些细胞样品如脾和骨髓中，光要强，在某些细胞样品如脾和骨髓中，除了含有淋巴细胞和其他低自发荧光的除了含有淋巴细胞和其他低自发荧光的细胞外还可能会有一些占不同比例的亮细胞外还可能会有一些占不同比例的亮细胞，它们会干扰用免疫荧光方法本应细胞，它们会干扰用免疫荧光方法本应能检测出来的稀有的、细胞数目较少的能检测出来的稀有的、细胞数目较少的亚群。亚群。第30页，讲稿共58张，创作于星期二n为为减减少少自自发发荧荧光光，应应选选用用较较亮亮的的荧荧光光染染料料，还还应应使使用用与与荧荧光光发发射射光光谱谱相相匹匹配配的的光光学学品品质质优优良良的的滤滤片片系系统

22、统。利利用用较较长长波波长长的的光光线线，如如染染料料激激光光器器的的激激光光做做为为激激发发光光源源，也也可可减减弱弱自自发发荧荧光光。最最后后，对对自自发发荧荧光光还还可可用用电电子子线线路路补补偿偿的的方方法法将将自发荧光补偿掉。自发荧光补偿掉。第31页，讲稿共58张，创作于星期二细胞群体的细胞群体的DNA直方图直方图n流式细胞计测量的结果可为一数字矩阵，流式细胞计测量的结果可为一数字矩阵，此矩阵可用一个或数个图形来表示。下此矩阵可用一个或数个图形来表示。下面我们讨论一下，一个细胞群体的面我们讨论一下，一个细胞群体的DNA直方图的图形。直方图的图形。第32页，讲稿共58张，创作于星期二n

23、设一个指数生长的细胞群体全部细胞都设一个指数生长的细胞群体全部细胞都处于增殖状态，用细胞动力学的语言说，处于增殖状态，用细胞动力学的语言说，就是增殖比是就是增殖比是1。细胞群体经染色后。细胞群体经染色后,由由于每个细胞结合的染料与于每个细胞结合的染料与DNA含量成正含量成正比。由于比。由于G1期细胞的期细胞的DNA含量为含量为2C，G2和和M期细胞期细胞DNA含量为含量为4C，S期细胞期细胞的的DNA含量在含量在2C4C之间。之间。第33页，讲稿共58张，创作于星期二n于是，从理论上说，这样一个群体的于是，从理论上说，这样一个群体的DNA直方图应该是：即直方图应该是：即G1期细胞全体都在同一期

24、细胞全体都在同一荧光道上荧光道上63道，道，G2和和M期细胞则位于期细胞则位于2*63=126道处，道处，S期细胞位于期细胞位于63126道之间，由于道之间，由于DNA合成速率不是均一的，合成速率不是均一的，因而在这一段范围内不会是均匀分布。因而在这一段范围内不会是均匀分布。第34页，讲稿共58张，创作于星期二第35页，讲稿共58张，创作于星期二细胞周期和DNA分布直方图A细胞周期BDNA直方图的理论分布C实际的DNA直方图第36页，讲稿共58张，创作于星期二第37页，讲稿共58张，创作于星期二流式细胞仪的技术指标流式细胞仪的技术指标1.荧荧光光分分辨辨率率 是是表表明明仪仪器器测测量量所所能

25、能达达到到的的最最大大精精度度，通通常常用用变变异异系系数数表表示示。显显然它与被其测定的标准样品有关。然它与被其测定的标准样品有关。2.荧光灵敏度荧光灵敏度 以能检测到最少的以能检测到最少的FITC分分子来表示，即微球上最少标有多少个子来表示，即微球上最少标有多少个FITC分子时刚好能被检测到，即定义为分子时刚好能被检测到，即定义为荧光灵敏度。荧光灵敏度。第38页，讲稿共58张，创作于星期二n3前前向向角角散散射射光光灵灵敏敏度度 以以前前向向角角散散射射光光最最小小能能检检测测到到的的颗颗粒粒直直径径表表示示。一一般般仪仪器器能能检检测测到到的的最最小小的的直直径径在在0.3um左左右。右

26、。n4前前向向角角散散射射光光分分辨辨率率 以以变变异异系系数数表表示。一般约在示。一般约在2.0%。第39页，讲稿共58张，创作于星期二5分分析析/分分选选速速度度 分分析析速速度度可可达达每每秒秒5000-10000个个细细胞胞，分分选选速速度度为为每每秒秒5000个细胞通过测量区。个细胞通过测量区。6.分选纯度分选纯度 分选纯度是个比较复杂的分选纯度是个比较复杂的问题，它不但与仪器精度有关，而且与问题，它不但与仪器精度有关，而且与被分选的细胞亚群在整个群体中的相对被分选的细胞亚群在整个群体中的相对位置也有关系。如果被分选的亚群在直位置也有关系。如果被分选的亚群在直方图或二维点图上可清晰地

27、分辨出来且方图或二维点图上可清晰地分辨出来且与其他亚群无重叠，则分选结果的纯度与其他亚群无重叠，则分选结果的纯度就高，反之就低。就高，反之就低。第40页，讲稿共58张，创作于星期二n7.分分选选收收获获率率 定定义义为为通通过过测测量量区区应应被被分分选选的的细细胞胞如如果果有有100个个，实实际际落落到到指指定定收收集集器器中中的的数数目目为为95个个，此此称称为为收收获获率率95%。一一般般应应在在90%以以上上。收收获获率率与与分选纯度是呈负相关。分选纯度是呈负相关。除除以以上上7个个参参数数外外，还还有有样样品品浓浓度度，同同时时可可测测参参数数、光光源源、喷喷孔孔尺尺寸寸、计计算算机

28、机配配置等参数或指标。置等参数或指标。第41页，讲稿共58张，创作于星期二细胞的参量和荧光探针细胞的参量和荧光探针 流流式式细细胞胞术术能能够够测测量量细细胞胞的的很很多多参参量量。可可分分为为两两类类：一一类类是是内内部部参参量量，指指不不用用任任何何荧荧光光探探针针标标记记就就可可测测量量的的细细胞胞参参量量；另另一一类类是是外外部部参参量量，指指需需要要外外加加荧荧光光探探针针标标记记的的细细胞胞参参量量。同同时时又又可可将将细细胞胞参参量量分分为为结结构构参参量量和和功功能能参参量量，结结构构参参量量描描述述细细胞胞的的形形态态特特征征和和化化学学组组成成，功功能能参参量量描描述述细细

29、胞胞的的理理化化特特征征。这这被被称称为为细细胞参量的二维分类。胞参量的二维分类。第42页，讲稿共58张，创作于星期二n测量细胞的外部参量必须用荧光探针进测量细胞的外部参量必须用荧光探针进行标记。荧光探针（荧光染料）是探测行标记。荧光探针（荧光染料）是探测细胞内结构的非常灵敏的工具。细胞内结构的非常灵敏的工具。第43页，讲稿共58张，创作于星期二常用的荧光素nFITC 异硫氰酸基荧光素异硫氰酸基荧光素 488nPE 藻红蛋白藻红蛋白 545nPI 碘化丙啶碘化丙啶 490nEB 溴化乙啶溴化乙啶 480nAO 丫啶橙丫啶橙 490nTRITC 四甲基若丹明四甲基若丹明 554nTexas Re

30、d 德州红德州红 355第44页，讲稿共58张，创作于星期二参数参数结构结构功能功能内部细胞大小、形状，细胞质的颗粒氧化还原状态性，色素量，蛋白荧光外部DNA量、碱基比例，染色体结构 膜的完整性，通透性，酶RNA量，总蛋白，碱性蛋白活性，内吞性，表面电荷，表面糖类。细胞内受体，DNA合成，膜的流动性或微粘度，细胞质/线粒体膜电位，膜结合的钙离子，细胞内PH第45页，讲稿共58张，创作于星期二数据分析数据分析一、数据的显示一、数据的显示 通通常常可可分分一一维维单单参参数数直直方方图图、二二维维点点图图二二维维等等高高图图和和假假三三维维图图等等几几种种，以以下下分分别讲述。别讲述。第46页，讲

31、稿共58张，创作于星期二二维点阵图第47页，讲稿共58张，创作于星期二二维点阵图分析外周淋巴细胞亚群二维点阵图分析外周淋巴细胞亚群第48页，讲稿共58张，创作于星期二二维点阵图分析外周二维点阵图分析外周T细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤第49页，讲稿共58张，创作于星期二n1单参数直方图单参数直方图 是用得最多的图形，是用得最多的图形，可用来定性及定量分析。图中的横坐标可用来定性及定量分析。图中的横坐标表示荧光信号或散射光信号强度的相对表示荧光信号或散射光信号强度的相对值，单位为值，单位为“道数道数”。直方图的纵坐标。直方图的纵坐标通常代表细胞出现的频率或相对细胞数，通常代表细胞出现的频率或相对细胞数，绝

32、对细胞数较少使用。绝对细胞数较少使用。第50页，讲稿共58张，创作于星期二DNA直方图第51页，讲稿共58张，创作于星期二双参数点阵图与直方图2二维点图当需要研究两个或更多的测量定量关系时，可采用二维点图的显示方式。第52页，讲稿共58张，创作于星期二 二维等高图二维等高图 由类似地图上的等高线组成由类似地图上的等高线组成第53页，讲稿共58张，创作于星期二假三维图假三维图 实际上与二维点图相等，只是用计算机技术将它画成假实际上与二维点图相等，只是用计算机技术将它画成假三维图。三维图。第54页，讲稿共58张，创作于星期二多维数据的显示目前我们只能依次显示为，如果数据关系较复杂，可用“一调二”或“二调一”的技术。第55页，讲稿共58张，创作于星期二非参数分析常用于单参数直方图的定量分析。不使用任何数学模型，也没有引入任何变量。也可称为直观分析法。第56页，讲稿共58张，创作于星期二DNA直方图的比较分析第57页，讲稿共58张，创作于星期二感谢大家观看第58页，讲稿共58张，创作于星期二