植物组织培养园艺精选PPT.ppt

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1、关于植物组织培养园艺第1页，讲稿共51张，创作于星期二22.1.1.2 2.1.1.2 无菌操作室无菌操作室功能功能组成组成缓冲室（间）：缓冲室（间）：接种室（间）：接种室（间）：无菌操作室的消毒无菌操作室的消毒主要设备主要设备超净工作台超净工作台金属器械消毒器金属器械消毒器第2页，讲稿共51张，创作于星期二32.1.1.3 2.1.1.3 培养室培养室功能功能主要设备主要设备环境条件环境条件 第3页，讲稿共51张，创作于星期二42.1.1.4 2.1.1.4 温室温室功能功能第4页，讲稿共51张，创作于星期二52.1.2 2.1.2 组培实验室的布局组培实验室的布局 2.1.2.1 2.1.

2、2.1 布局基本要求布局基本要求便于隔离，便于操作，便于灭菌和便于观察。便于隔离，便于操作，便于灭菌和便于观察。2.1.2.2 2.1.2.2 基本布局规律基本布局规律根据实验操作程序排列实验室；根据实验操作程序排列实验室；接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区域；接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区域；灭菌室与接种室相邻；灭菌室与接种室相邻；其他实验室的布局可根据条件，以方便使用为宜其他实验室的布局可根据条件，以方便使用为宜。第5页，讲稿共51张，创作于星期二6培培 养养 室室准准 备备 室室灭菌室灭菌室储藏室储藏室接接种种室室缓缓冲冲室室植物组织培养实验室布局示意图植物组织培养实验室

3、布局示意图第6页，讲稿共51张，创作于星期二72.1.2.3 2.1.2.3 设计组培实验室时的注意事项设计组培实验室时的注意事项为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊上为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊上方最好安装紫外灯；方最好安装紫外灯；培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层玻培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧，璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗；其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗；培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最好装培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最好装移门；移门；无菌操作室要小，要设缓冲间

4、，也最好装移门，无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移门，且门要稍大一些。且门要稍大一些。第7页，讲稿共51张，创作于星期二82.1.3 2.1.3 组培实验室的基本设备组培实验室的基本设备 2.1.3.1 2.1.3.1 器皿和器械类器皿和器械类玻璃器皿玻璃器皿器械器械镊子类镊子类解剖刀解剖刀剪刀剪刀接种针接种针细菌过滤器细菌过滤器 第8页，讲稿共51张，创作于星期二92.1.2.2 2.1.2.2 仪器设备仪器设备 无菌操作设备无菌操作设备超净工作台超净工作台第9页，讲稿共51张，创作于星期二10高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器第10页，讲稿共51张，创作于星期二11电热烘箱电热烘箱接种器具消

5、毒器接种器具消毒器第11页，讲稿共51张，创作于星期二12培养设备培养设备空调空调加湿器和去湿机加湿器和去湿机定时器定时器培养架培养架摇床或旋转床摇床或旋转床培养箱培养箱第12页，讲稿共51张，创作于星期二13药品贮存和配制仪器设备药品贮存和配制仪器设备冰箱冰箱天平天平酸度计酸度计观察分析仪器设备观察分析仪器设备体视显微镜体视显微镜普通光学显微镜普通光学显微镜倒置显微镜倒置显微镜其它仪器设备其它仪器设备离心机离心机恒温水浴锅恒温水浴锅第13页，讲稿共51张，创作于星期二142.2 2.2 培养基培养基组培中培养基的重要性：组培中培养基的重要性：基本培养基：基本培养基：指只含有维持离体植物细胞基

6、本指只含有维持离体植物细胞基本生命活动所需的营养成分的培养基。通常包括生命活动所需的营养成分的培养基。通常包括水分、无机营养成分和有机营养成分，不包括水分、无机营养成分和有机营养成分，不包括激素和天然有机附加物。激素和天然有机附加物。完全培养基：完全培养基：指在基本培养基的基础上另外附加激指在基本培养基的基础上另外附加激素或天然有机附加物所组成的培养基。素或天然有机附加物所组成的培养基。第14页，讲稿共51张，创作于星期二152.2.1 2.2.1 培养基的构成培养基的构成 2.2.1.1 2.2.1.1 水水 2.2.1.2 2.2.1.2 无机盐类无机盐类大量元素化合物大量元素化合物微量元

7、素化合物微量元素化合物 2.2.1.3 2.2.1.3 有机营养成分有机营养成分糖类糖类维生素类维生素类氨基酸类氨基酸类第15页，讲稿共51张，创作于星期二16 2.2.1.4 2.2.1.4 植物生长调节剂植物生长调节剂1 1、生长素类、生长素类常用类型：常用类型：NAA,2,4-D,IBA,IAA功能功能培养基中常用浓度：培养基中常用浓度：1010-7-71010-5-5mol/L或或0.10.11010mg/L第16页，讲稿共51张，创作于星期二172 2、细胞分裂素类、细胞分裂素类常用类型：常用类型：6-BA,KT.TDZ,2-ip功能功能培养基中常用浓度：培养基中常用浓度：1010-

8、7-71010-5-5mol/L或或0.10.11010mg/L第17页，讲稿共51张，创作于星期二18 3 3、组织培养时，植物激素的使用规律、组织培养时，植物激素的使用规律 在生长素存在的条件下，细胞分裂在生长素存在的条件下，细胞分裂素的作用有加强的趋势，但二者在使用素的作用有加强的趋势，但二者在使用上有一定的顺序关系，处理顺序不同，上有一定的顺序关系，处理顺序不同，培养物的分化状态也不同。规律如下：培养物的分化状态也不同。规律如下：先用生长素处理，后用细胞分先用生长素处理，后用细胞分裂素处理，有利于细胞分裂，但细胞不裂素处理，有利于细胞分裂，但细胞不容易分化容易分化,容易产生多倍体细胞。

9、容易产生多倍体细胞。第18页，讲稿共51张，创作于星期二19 先用细胞分裂素处理，后用生长素处先用细胞分裂素处理，后用生长素处理，细胞分裂也分化。理，细胞分裂也分化。用生长素和细胞分裂素同时处理，细胞用生长素和细胞分裂素同时处理，细胞脱分化后分化频率提高。但二者的使用浓度脱分化后分化频率提高。但二者的使用浓度比值可以决定器官分化方向：比值可以决定器官分化方向：生长素生长素/细胞细胞分裂素比值高时，有利于根分化，抑制分裂素比值高时，有利于根分化，抑制芽形成。反之，有利于芽分化，抑制根芽形成。反之，有利于芽分化，抑制根形成。比值适中时，促进愈伤组织的形形成。比值适中时，促进愈伤组织的形成和生长。成

10、和生长。第19页，讲稿共51张，创作于星期二202.2.1.5 2.2.1.5 天然有机添加物质天然有机添加物质椰汁：椰汁：CM 100 100150ml/L150ml/L酵母提取液：酵母提取液：YE 0.01%0.01%0.5%0.5%番茄汁：番茄汁：5%5%10%10%马铃薯汁：马铃薯汁：100g/L 100g/L 200g/L200g/L香蕉泥（汁）：香蕉泥（汁）：150mg/L 150mg/L 200mg/L200mg/L第20页，讲稿共51张，创作于星期二212.2.1.6 2.2.1.6 培养基的培养基的pHpH值值灭菌前灭菌前pHpH值调控范围：值调控范围：pH=5.7pH=5.

11、75.85.8pHpH对培养基凝固的影响对培养基凝固的影响pHpH调节剂调节剂2.2.1.72.2.1.7凝固剂凝固剂 琼脂：琼脂：用量范围：用量范围：3 310g/L10g/L 影响琼脂凝固的因素影响琼脂凝固的因素 Gelrite Gelrite：植物凝胶：植物凝胶2.2.1.8 2.2.1.8 其他添加物其他添加物活性炭（活性炭（ACAC）、维生素）、维生素C C、抗生素等、抗生素等第21页，讲稿共51张，创作于星期二222.2.2 2.2.2 基本培养基的选择基本培养基的选择 2.2.2.1 2.2.2.1 基本培养基的类型基本培养基的类型高无机盐含量的培养基高无机盐含量的培养基代表类型

12、：代表类型：MSMS，LSLS，BLBL，ERER硝酸钾含量较高的培养基硝酸钾含量较高的培养基代表类型：代表类型：B5B5，N6N6，SHSH中等无机盐含量的培养基中等无机盐含量的培养基代表类型：代表类型：NitschNitsch，MillerMiller，H H低无机盐含量的培养基低无机盐含量的培养基代表类型：代表类型：WhiteWhite，WSWS，HEHE 第22页，讲稿共51张，创作于星期二23 2.2.2.2 2.2.2.2 基本培养基的选择基本培养基的选择MSMS培养基培养基B B5 5培养基培养基N N6 6培养基培养基改良的改良的WhiteWhite培养基培养基WPMWPM培养

13、基培养基 培养基是否适合所培养的植物，必须通过试验进行筛选。第23页，讲稿共51张，创作于星期二242.2.3 2.2.3 培养基的配制培养基的配制 母液稀释法母液稀释法 2.2.3.1 2.2.3.1 培养基母液的配制和保存培养基母液的配制和保存 1 1、基本培养基母液的配制、基本培养基母液的配制 单配法单配法 混配法混配法 按照避免难溶性沉淀形成的原按照避免难溶性沉淀形成的原则和物质种类的不同，将基本培养基则和物质种类的不同，将基本培养基配方所包括的物质进行分组；配方所包括的物质进行分组；第24页，讲稿共51张，创作于星期二25 基本培养基配方中物质划分组数的多少，即基本培养基配方中物质划

14、分组数的多少，即配制母液数的多少可根据实际情况而定，如配制母液数的多少可根据实际情况而定，如MSMS培养培养基可以配制三液式、四液式、五液式等；基可以配制三液式、四液式、五液式等；例如：例如：MSMS培养基五液式培养基五液式大量元素母液大量元素母液钙盐母液钙盐母液微量元素母液微量元素母液铁盐母液铁盐母液有机营养成分母液有机营养成分母液 第25页，讲稿共51张，创作于星期二26 2 2、激素母液的配制、激素母液的配制 激素母液的浓度激素母液的浓度 1 110mmol/L10mmol/L或或0.10.11mg/L1mg/L 配制方法配制方法 生长素类生长素类 细胞分裂素类细胞分裂素类 培养基的保存

15、培养基的保存第26页，讲稿共51张，创作于星期二27 2.2.3.2 2.2.3.2 培养基的配制培养基的配制 水水准备准备 母液母液 混合定容混合定容 调调pH 加入琼脂加入琼脂 糖糖 加热溶解加热溶解 培养器皿培养器皿 清洗清洗 干燥干燥 分装分装 封口封口 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 冷却冷却 凝固凝固 接种接种培养基具体配制操作过程：培养基具体配制操作过程：P P2121培培 养养 基基 配配 制制 程程 序序 第27页，讲稿共51张，创作于星期二282.3 2.3 组培实验基本操作技术组培实验基本操作技术 2.3.1 2.3.1 器皿和器具的洗涤器皿和器具的洗涤 P P19191.1.

16、洗涤剂：洗涤剂：无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和无磷中性的肥皂粉、洗衣粉和洗洁精洗洁精2.2.常用清洗方法常用清洗方法洗涤剂清洗法洗涤剂清洗法超声波清洗法超声波清洗法 第28页，讲稿共51张，创作于星期二293.3.玻璃器皿的清洗玻璃器皿的清洗新购置的玻璃器皿的清洗新购置的玻璃器皿的清洗用过的培养器皿的清洗用过的培养器皿的清洗已经污染的玻璃器皿的清洗已经污染的玻璃器皿的清洗第29页，讲稿共51张，创作于星期二302.3.2 2.3.2 灭菌灭菌 2.3.2.1 2.3.2.1 器具的灭菌方法器具的灭菌方法干热灭菌法干热灭菌法高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法）高压蒸汽灭菌法（湿热灭菌法）火焰灼烧灭菌法火焰灼

17、烧灭菌法 2.3.2.2 2.3.2.2 培养基的灭菌方法培养基的灭菌方法高温蒸汽灭菌法高温蒸汽灭菌法过滤除菌法过滤除菌法第30页，讲稿共51张，创作于星期二31培养基灭菌方法培养基灭菌方法 -湿热灭菌法湿热灭菌法培养基湿热灭菌最少时间培养基湿热灭菌最少时间 液体容积（液体容积（ml）121所需时间（所需时间（min）20-50 15 75 20 250-500 25 1000 30 1500-2000 35-40第31页，讲稿共51张，创作于星期二32培养基高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）操作培养基高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）操作 P P2020 灭菌后培养基的存放：灭菌后培养基的存放：锅内加水锅内加水

18、放入消毒桶放入消毒桶装入培养基装入培养基盖好锅盖盖好锅盖接通电源加热接通电源加热排尽锅内冷空气排尽锅内冷空气达到灭菌温度时开始计时并达到灭菌温度时开始计时并保持足够长的时间保持足够长的时间继续加热继续加热切断电源切断电源压力表指针归零压力表指针归零时打开锅盖时打开锅盖取出培养基取出培养基并存放好并存放好第32页，讲稿共51张，创作于星期二33高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项：高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项：灭菌前外层锅内要加入足够的水灭菌前外层锅内要加入足够的水,灭菌完成灭菌完成后要将锅内的水排放干净。后要将锅内的水排放干净。在灭菌过程中及灭菌后，压力表压力指针归在灭菌过程中及灭菌后，压力表压力

19、指针归零之前零之前,不能打开锅盖不能打开锅盖,以免发生危险。以免发生危险。注意日常维护和检查注意日常维护和检查,及时发现问题及时发现问题,及时修理，及时修理，保证使用安全可靠。保证使用安全可靠。第33页，讲稿共51张，创作于星期二34使用高压蒸汽灭菌锅进行物品灭菌时的使用高压蒸汽灭菌锅进行物品灭菌时的注意事项：注意事项：消毒锅内放置的物品要有一定的缝隙，便于消毒锅内放置的物品要有一定的缝隙，便于高温蒸汽上下回流，达到良好灭菌效果。高温蒸汽上下回流，达到良好灭菌效果。锅内冷空气必须完全排尽，否则压力表的指针虽锅内冷空气必须完全排尽，否则压力表的指针虽然达到了规定的压力，但由于锅内冷空气的存在，然

20、达到了规定的压力，但由于锅内冷空气的存在，并不能达到相应的温度，因而影响灭菌效果。并不能达到相应的温度，因而影响灭菌效果。进行培养基灭菌时，锅内达到规定的灭菌温度进行培养基灭菌时，锅内达到规定的灭菌温度后，在严格保持灭菌温度的同时，还要严格保持灭后，在严格保持灭菌温度的同时，还要严格保持灭菌时间。时间过长会破坏培养基内一些化学成分的菌时间。时间过长会破坏培养基内一些化学成分的有效性，时间过短则达不到灭菌效果。有效性，时间过短则达不到灭菌效果。第34页，讲稿共51张，创作于星期二35 2.3.2.3 2.3.2.3 无菌操作室内的灭菌方法无菌操作室内的灭菌方法熏蒸灭菌法熏蒸灭菌法射线灭菌法射线灭

21、菌法 2.3.2.4 2.3.2.4 外植体的表面灭菌外植体的表面灭菌 P P2929化学消毒剂灭菌法化学消毒剂灭菌法抗生素抑菌法抗生素抑菌法第35页，讲稿共51张，创作于星期二36 1.1.外植体灭菌的常用杀菌剂外植体灭菌的常用杀菌剂 良好的外植体灭菌效果的含义：良好的外植体灭菌效果的含义：外植体灭菌后无菌率高，同时植物外植体灭菌后无菌率高，同时植物细胞不会受损伤或只是轻微受损伤而能细胞不会受损伤或只是轻微受损伤而能保持正常生长。保持正常生长。第36页，讲稿共51张，创作于星期二37 2.2.外植体表面灭菌外植体表面灭菌外植体表面灭菌操作前的准备工作：外植体表面灭菌操作前的准备工作：无菌水、

22、漂洗瓶、切割用器皿（玻无菌水、漂洗瓶、切割用器皿（玻璃培养皿或不锈钢切割盘）和金属器具璃培养皿或不锈钢切割盘）和金属器具均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净均经过高温高压灭菌并整齐摆放在超净工作台上。工作台上。灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工灭菌剂配制好并整齐摆放在超净工作台上。作台上。第37页，讲稿共51张，创作于星期二38第38页，讲稿共51张，创作于星期二39外植体表面灭菌的一般过程外植体表面灭菌的一般过程预处理：预处理：外植体取材外植体取材备用备用无菌水充分漂洗无菌水充分漂洗35次次无菌条件下，消毒剂处理无菌条件下，消毒剂处理无菌条件下，无菌条件下，70%酒精酒精表面消毒表面消毒30S60

23、S预处理预处理第39页，讲稿共51张，创作于星期二40 3.3.影响外植体消毒效果的因素：影响外植体消毒效果的因素：消毒剂种类消毒剂种类 消毒剂使用浓度消毒剂使用浓度 消毒处理时间消毒处理时间 4.4.培养过程中污染原因及对策培养过程中污染原因及对策污染的病原类型污染的病原类型污染发生原因污染发生原因防污染对策防污染对策第40页，讲稿共51张，创作于星期二41 2.3.3 2.3.3 外植体的接种外植体的接种 1 1 定义定义 2 2 外植体接种操作前的准备工作外植体接种操作前的准备工作接种室的清洁和灭菌接种室的清洁和灭菌超净工作台的清洁和灭菌准备超净工作台的清洁和灭菌准备操作人员无菌操作前的

24、准备操作人员无菌操作前的准备 3 3 外植体接种的具体步骤外植体接种的具体步骤切割外植体切割外植体培养瓶倾斜靠近酒培养瓶倾斜靠近酒精灯火焰精灯火焰瓶盖外部在火焰上旋瓶盖外部在火焰上旋转灼烧数秒钟转灼烧数秒钟旋开瓶盖，扣放在旋开瓶盖，扣放在酒精灯旁边酒精灯旁边瓶口在火焰上旋瓶口在火焰上旋转灼烧数秒钟转灼烧数秒钟用无菌镊子将外植体均用无菌镊子将外植体均匀放置在培养基上匀放置在培养基上瓶盖在火焰上瓶盖在火焰上灼烧两圈灼烧两圈盖紧瓶盖盖紧瓶盖第41页，讲稿共51张，创作于星期二42第42页，讲稿共51张，创作于星期二43第43页，讲稿共51张，创作于星期二44第44页，讲稿共51张，创作于星期二452

25、.4 离体培养体系的建立离体培养体系的建立供体植物材供体植物材料的确定料的确定外植体外植体的选择的选择外植体外植体的灭菌的灭菌外植体外植体的培养的培养外植体外植体的接种的接种第45页，讲稿共51张，创作于星期二462.4.1 2.4.1 供体植物材料的来源供体植物材料的来源田间材料田间材料温室材料温室材料无菌发芽材料无菌发芽材料2.4.2 2.4.2 外植体的选择原则外植体的选择原则再生能力强再生能力强遗传稳定性好遗传稳定性好外植体来源丰富外植体来源丰富外植体灭菌容易外植体灭菌容易第46页，讲稿共51张，创作于星期二472.4.3 2.4.3 常用外植体的种类常用外植体的种类茎尖茎尖带节茎段带

26、节茎段节间部茎段节间部茎段叶片和叶柄叶片和叶柄鳞片鳞片第47页，讲稿共51张，创作于星期二482.5 2.5 外植体的培养条件外植体的培养条件温度温度光照光照湿度湿度培养基的营养物质和培养基的营养物质和pHpH变化变化培养物的气体环境培养物的气体环境第48页，讲稿共51张，创作于星期二49第二章第二章 作业：作业：组培实验室有哪些实验室组成，分别讲述这些组培实验室有哪些实验室组成，分别讲述这些实验室的功能？实验室的功能？设计组培实验室有哪些注意事项？设计组培实验室有哪些注意事项？高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项？高压蒸汽灭菌锅安全使用注意事项？使用高压蒸汽灭菌锅进行各种器皿、器械及培养基使用高压

27、蒸汽灭菌锅进行各种器皿、器械及培养基灭菌时要注意哪些？灭菌时要注意哪些？培养基中的主要成分有哪几类？培养基中的主要成分有哪几类？培养基中常添加的植物生长调节物质有哪两大类培养基中常添加的植物生长调节物质有哪两大类？各包括哪些常用种类？培养基中使用浓度范围？各包括哪些常用种类？培养基中使用浓度范围？第49页，讲稿共51张，创作于星期二50培养基中经常加入的生长素类和细胞分裂素类物培养基中经常加入的生长素类和细胞分裂素类物质各有何作用？这两类激素的使用规律如何？质各有何作用？这两类激素的使用规律如何？上述两类激素母液如何配制？激素母液浓度范围上述两类激素母液如何配制？激素母液浓度范围？培养基的配制程序？培养基配制过程中要注意哪培养基的配制程序？培养基配制过程中要注意哪些问题？些问题？已经污染的培养器皿如何清洗？已经污染的培养器皿如何清洗？外植体污染原因？外植体污染原因？污染的病原类型？污染的病原类型？防污染对策？防污染对策？影响外植体消毒效果的因素？影响外植体消毒效果的因素？第50页，讲稿共51张，创作于星期二感谢大家观看第51页，讲稿共51张，创作于星期二