核酸与蛋白质的研究方法精选PPT.ppt

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1、关于核酸与蛋白质的研究方法第1页，讲稿共60张，创作于星期二 从从20世纪中叶开始，分子生物学研究世纪中叶开始，分子生物学研究得到高速发展，除了基础理论的重大突破，得到高速发展，除了基础理论的重大突破，主要原因之一是研究方法，特别是主要原因之一是研究方法，特别是基因操基因操作作和和基因工程基因工程技术的进步。技术的进步。第2页，讲稿共60张，创作于星期二 基基因因操操作作主主要要包包括括DNA分分子子的的切切割割与与连连接接、核核酸酸分分子子杂杂交交、凝凝胶胶电电泳泳、细细胞胞转转染染、核核酸酸序序列列分分析析以以及及基基因因人人工工合合成成、定定点点突突变变和和PCR扩扩增增等等，是是分分子

2、子生生物物学学研研究究的核心与基本技术。的核心与基本技术。第3页，讲稿共60张，创作于星期二 基基因因工工程程是是指指在在体体外外将将核核酸酸分分子子插插入入病病毒毒、质质粒粒或或其其它它载载体体分分子子，构构成成遗遗传传物物质质的的新新组组合合，使使之之进进入入原原先先没没有有这这类类分分子子的的寄寄主主细细胞胞内内并并进进行行持持续续稳稳定定的的繁繁殖殖和和表达（细菌、细胞、动物、植物）。表达（细菌、细胞、动物、植物）。第4页，讲稿共60张，创作于星期二 基因工程基因工程技术是核酸操作技术的技术是核酸操作技术的一部分，只不过它强调了外源核酸分一部分，只不过它强调了外源核酸分子在另一种不同的

3、寄主细胞中的繁衍子在另一种不同的寄主细胞中的繁衍与性状表达。与性状表达。事实上，这种跨越物种屏障、把来事实上，这种跨越物种屏障、把来自其它生物的基因置于新的寄主生物细自其它生物的基因置于新的寄主生物细胞之中的能力，是基因工程技术区别于胞之中的能力，是基因工程技术区别于其它技术的根本特征。其它技术的根本特征。第5页，讲稿共60张，创作于星期二第6页，讲稿共60张，创作于星期二重组重组DNA技术回顾技术回顾三大成就：三大成就：第第一一，在在20世世纪纪40年年代代确确定定了了遗遗传传信信息息的的携携带带者者、即即基基因因的的分分子子载载体体是是DNA而而不不是是蛋蛋白白质质解解决决了遗传的物质基础

4、问题；了遗传的物质基础问题；第第二二，50年年代代提提出出了了DNA分分子子的的双双螺螺旋旋结结构构模模型型和和半半保保留留复复制制机机制制解解决决了了基基因因的的自自我我复复制制和世代交替问题；和世代交替问题；第7页，讲稿共60张，创作于星期二第第三三，5050年年代代末末至至6060年年代代，相相继继提提出出了了“中中心心法法则则”和和操操纵纵子子学学说说,成成功功地地破破译译了了遗遗传传密码密码阐明了遗传信息的流动与表达机制。阐明了遗传信息的流动与表达机制。第8页，讲稿共60张，创作于星期二重组重组DNA技术史上的主要事件技术史上的主要事件年年 份份事事 件件1869F Miescher

5、首次从莱茵河鲑鱼精子中分离首次从莱茵河鲑鱼精子中分离DNA。1957A.Kornberg从大肠杆菌中发现了从大肠杆菌中发现了DNA聚合酶聚合酶I。1959-1960Ochoa发发现现RNA聚聚合合酶酶和和信信使使RNA，并并证证明明mRNA决决定了蛋白质分子中的氨基酸序列。定了蛋白质分子中的氨基酸序列。1961Nirenberg破破译译了了第第一一个个遗遗传传密密码码；Jacob和和Monod提提出了调节基因表达的操纵子模型。出了调节基因表达的操纵子模型。1964Yanofsky和和Brenner等等人人证证明明，多多肽肽链链上上的的氨氨基基酸酸序序列与该基因中的核苷酸序列存在着共线性关系。列

6、与该基因中的核苷酸序列存在着共线性关系。1965Holley完完成成了了酵酵母母丙丙氨氨酸酸tRNA的的全全序序列列测测定定；科科学学家证明细菌的抗药性通常由家证明细菌的抗药性通常由“质粒质粒”DNA所决定。所决定。第9页，讲稿共60张，创作于星期二1966Nirenberg，Ochoa，Khorana，Crick等人破译了全部遗传密码。等人破译了全部遗传密码。1967第一次发现第一次发现DNA连接酶连接酶1970Smith，Wilcox和和Kelley分分离离了了第第一一种种限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶，Temin和和Baltimore从从RNA肿瘤病毒中发现反转录酶。肿瘤病毒中发现反转

7、录酶。1972-1973Boyer，Berg等等人人发发展展了了DNA重重组组技技术术，于于72年年获获得得第第一一个个重重组组DNA分子，分子，73年完成第一例细菌基因克隆。年完成第一例细菌基因克隆。1975-1977Sanger与与Maxam和和Gilbert等等人人发发明明了了DNA序序列列测测定定技技术术，1977年年完成了全长完成了全长5387bp的噬菌体的噬菌体x174基因组测定。基因组测定。1978首次在大肠杆菌中生产由人工合成基因表达的人脑激素和人胰岛素。首次在大肠杆菌中生产由人工合成基因表达的人脑激素和人胰岛素。1980美国联邦最高法院裁定微生物基因工程可以被专利化。美国联邦

8、最高法院裁定微生物基因工程可以被专利化。1981Palmiter和和Brinster获获得得转转基基因因小小鼠鼠，Spradling和和Rubin得得到到转转基基因因果蝇。果蝇。1982美美、英英批批准准使使用用第第一一例例基基因因工工程程药药物物胰胰岛岛素素，Sanger等等人人完完成成了入噬菌体了入噬菌体48,502bp全序列测定。全序列测定。第10页，讲稿共60张，创作于星期二1983获得第一例转基因植物。获得第一例转基因植物。1984斯坦福大学获得关于重组斯坦福大学获得关于重组DNA的专利。的专利。1986GMO首次在环境中释放。首次在环境中释放。1988Watson出任出任“人类基因

9、组计划人类基因组计划”首席科学家。首席科学家。1989DuPont公司获得转肿瘤基因小鼠公司获得转肿瘤基因小鼠“Oncomouse”。1992欧欧共共体体35个个实实验验室室联联合合完完成成酵酵母母第第三三染染色色体体全全序序列列测测定定(315kb)。1994第一批基因工程西红柿在美国上市。第一批基因工程西红柿在美国上市。1996完成了酵母基因组完成了酵母基因组(1.25107bp)全序列测定。全序列测定。1997英国爱丁堡罗斯林研究所获得克隆羊。英国爱丁堡罗斯林研究所获得克隆羊。2000完完 成成 第第 一一 个个 高高 等等 植植 物物 拟拟 南南 芥芥 的的 全全 序序 列列 测测 定

10、定（(1.15108bp)。2001完成第一个人类基因组全序列测定完成第一个人类基因组全序列测定(2.7109bp)。第11页，讲稿共60张，创作于星期二GMO-Genetically Modified OrganismGMO，是“转基因生物(geneticallymodifiedorganism)”的缩写。“转基因”的意思是通过某种方式改变基因组，这种方式是自然、杂交或者重组无法达到的。杂交过程是一种基因重组的自然方法，把一个物种的花粉转移到另一个相关物种上，从而获得新的栽培变种。但是如果通过媒介帮助把基因转移给其他植物，就不是自然过程而叫做转基因。细胞融合也被称为转基因。相反，经过诱导突变

11、，如化学物质诱导的植物则不是“转基因体”。转基因植物包含一个或者更多由人工手段引入的基因。甚至不相关物种的基因也可以通过这样的方式被传递给其它物种。这样一来，某种期望的特性，如对除草剂的忍耐力或者对昆虫的抵抗力就可以被准确地赋予农作物。第12页，讲稿共60张，创作于星期二 限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶能能够够识识别别DNA上上的的特特定定碱碱基基序列并从这个位点切开序列并从这个位点切开DNA分子。分子。第第一一个个核核酸酸内内切切酶酶Eco RI是是Boyer实实验验室室在在1972年年发发现现的的，它它能能特特异异性性识识别别GAATTC序序列列，将将双双链链DNA分分子子在在这这个个位

12、位点点切切开开并并产产生生具具有有粘粘性性末端或平端的小片段。末端或平端的小片段。（1）限制性核酸内切酶）限制性核酸内切酶第13页，讲稿共60张，创作于星期二几种主要几种主要DNA内切酶所识别的序列及其酶切末端内切酶所识别的序列及其酶切末端第14页，讲稿共60张，创作于星期二DNA连连接接酶酶能能把把不不同同的的DNA片片段段连连接接成成一一个个整整体体。a.DNA的的粘粘性性末末端端;b.DNA的平末端的平末端;c.化学合成的具有化学合成的具有EcoRI粘性末端的粘性末端的DNA片段。片段。（2）DNA连接酶连接酶第15页，讲稿共60张，创作于星期二 仅仅仅仅能能在在体体外外利利用用限限制制

13、性性核核酸酸内内切切酶酶和和DNA连连接接酶酶进进行行DNA的的切切割割和和重重组组，还还不不能能满满足足基基因因工工程程的的要要求求，只只有有将将它它们们连连接接到到具具备备自自主主复复制制能能力力的的DNA分子上，才能在寄主细胞中进行繁殖。分子上，才能在寄主细胞中进行繁殖。具具备备自自主主复复制制能能力力的的DNA分分子子就就是是分分子子克克隆隆的的载载体体（vector）。病病毒毒、噬噬菌菌体体和和质质粒粒等等小小分分子子量量复复制制子都可以作为基因导入的载体。子都可以作为基因导入的载体。（3）分子克隆的载体）分子克隆的载体第16页，讲稿共60张，创作于星期二重组重组DNA操作过程示意图

14、操作过程示意图第17页，讲稿共60张，创作于星期二目的基因的表达目的基因的表达第18页，讲稿共60张，创作于星期二第19页，讲稿共60张，创作于星期二第20页，讲稿共60张，创作于星期二第21页，讲稿共60张，创作于星期二第22页，讲稿共60张，创作于星期二DNA基本操作技术基本操作技术核酸凝胶电泳技术核酸凝胶电泳技术 自自 从从 琼琼 脂脂 糖糖（agarose）和和 聚聚 丙丙 烯烯 酰酰 胺胺（polyacrylamide）凝凝胶胶被被引引入入核核酸酸研研究究以以来来，按按分分子子量量大大小小分分离离DNA的的凝凝胶胶电电泳泳技技术术，已已经经发发展展成成为为一一种种分分析析鉴鉴定定重重

15、组组DNA分分子子及及蛋蛋白白质质与核酸相互作用的重要实验手段。与核酸相互作用的重要实验手段。第23页，讲稿共60张，创作于星期二 一一种种分分子子被被放放置置到到电电场场中中，它它就就会会以以一一定定的的速速度度移移向向适适当当的的电电极极。我我们们把把这这种种电电泳泳分分子子在在电电场场作作用用下下的的迁迁移移速速度度，叫叫做做电电泳泳的的迁迁移移率率，它它与与电电场场强强度度和和电电泳泳分分子子本本身身所所携携带带的的净净电电荷荷数数成成正正比比，与片段大小成反比。与片段大小成反比。第24页，讲稿共60张，创作于星期二 生生理理条条件件下下，核核酸酸分分子子中中的的磷磷酸酸基基团团呈呈离

16、离子子化化状状态态，所所以以，DNA和和RNA又又被被称称为为多多聚聚阴阴离离子子（polyanions），在在电电场场中中向向正正电电极的方向迁移。极的方向迁移。由由于于糖糖-磷磷酸酸骨骨架架在在结结构构上上的的重重复复性性质质，相相同同数数量量的的双双链链DNA几几乎乎具具有有等等量量的的净净电电荷荷，因此它们能以同样的速度向正电极方向迁移。因此它们能以同样的速度向正电极方向迁移。第25页，讲稿共60张，创作于星期二琼脂糖凝胶分辨琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为片段的范围为0.250kb之间。之间。聚丙烯酰胺凝胶的分辨范围为聚丙烯酰胺凝胶的分辨范围为1到到1000个碱基对之间。个碱基对之间

17、。凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙的凝胶浓度的高低影响凝胶介质孔隙的大小，浓度越高，孔隙越小，其分辨大小，浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强。能力就越强。第26页，讲稿共60张，创作于星期二琼脂糖及聚丙烯酰胺凝胶分辨琼脂糖及聚丙烯酰胺凝胶分辨DNA片片段的能力段的能力 凝胶类型及浓度凝胶类型及浓度 分离分离DNA的大小范围（的大小范围（bp）0.3%琼脂糖琼脂糖 50 0001 000 0.7%琼脂糖琼脂糖 20 0001 000 1.4%琼脂糖琼脂糖 6 000300 4.0%聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺 1 000100 10.0%聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺 50025 20.0%聚丙烯酰胺聚丙烯酰胺

18、501第27页，讲稿共60张，创作于星期二 在在凝凝胶胶电电泳泳中中，加加入入溴溴化化乙乙锭锭（ethidium bromide，EtBr）染染料料对对核核酸酸分分子子进进行行染染色色，然然后后放放置置在在紫紫外外光光下下观观察察，可可灵灵敏敏而而快快捷捷地地检检测测出出凝凝胶胶介介质质中中DNA的的谱谱带带部部位位，即即使使每每条条DNA带带中中仅仅含含有有0.05 g的的微微量量DNA，也也可可以以被被清晰地检测出来。清晰地检测出来。第28页，讲稿共60张，创作于星期二溴溴化化乙乙锭锭是是一一种种具具扁扁平平分分子子的的核核酸酸染染料料，能能插插入入到到DNA或或RNA分分子子的的相相邻邻

19、碱碱基基之之间间，并并在在300 nm波波长长的的紫紫外外光光照照射下发出荧光。射下发出荧光。第29页，讲稿共60张，创作于星期二溴化乙锭染料的化学结构及其对溴化乙锭染料的化学结构及其对DNA分子的插入作用。分子的插入作用。由于插入了溴化乙锭分子，在紫外光照射下，琼脂糖凝胶由于插入了溴化乙锭分子，在紫外光照射下，琼脂糖凝胶 电泳中电泳中DNA的条带便呈现出橘黄色荧光，易于鉴定。的条带便呈现出橘黄色荧光，易于鉴定。第30页，讲稿共60张，创作于星期二第31页，讲稿共60张，创作于星期二细菌转化与目标细菌转化与目标DNA分子的增殖分子的增殖 所所谓谓细细菌菌转转化化，是是指指一一种种细细菌菌菌菌株

20、株由由于于捕捕获获了了来来自自另另一一种种细细菌菌菌菌株株的的DNA而而导导致性状特征发生遗传改变的生命过程。致性状特征发生遗传改变的生命过程。提提供供转转化化DNA的的菌菌株株叫叫作作供供体体菌菌株株，接接受转化受转化DNA的细菌菌株则被称为受体菌株。的细菌菌株则被称为受体菌株。第32页，讲稿共60张，创作于星期二转化转化(transformation)特指以质粒特指以质粒DNA或以它为载体构建的重或以它为载体构建的重 组组子导入细菌的过程。子导入细菌的过程。转染转染(transfection)是指噬菌体、病毒或以它作为载体构成的重组是指噬菌体、病毒或以它作为载体构成的重组子导入细胞的过程。

21、子导入细胞的过程。转导转导(transduction)以噬菌体为媒介，将外源以噬菌体为媒介，将外源DNA导入细菌导入细菌的过程。的过程。上述概念往往容易混淆。上述概念往往容易混淆。第33页，讲稿共60张，创作于星期二 转转化化是是一一个个自自然然存存在在的的过过程程。细细菌菌处处于于容容易易吸吸收收外外源源DNA状状态态叫叫感感受受态态，用用理理化化方方法法诱诱导导细细胞胞进进入入感感受受态的操作叫态的操作叫致敏过程致敏过程。重重组组DNA转转化化细细菌菌的的技技术术操操作作关关键键就就是是通通过过化化学学方方法法，人人工工诱诱导导细细菌菌细细胞胞进进入入一一个个敏敏感感的的感感受受态态，以便

22、外源以便外源DNA进入细菌内。进入细菌内。这这项项技技术术始始于于Mandel和和Higa 1970年年的的观观察察，他他们们发发现现细细菌菌经经过过冰冰冷冷的的CaCl2溶溶液液处处理理及及短短暂暂热热休休克克后后，容容易易被被噬噬菌菌体体DNA感感染染，随随后后Cohn于于 1972年年进进一一步步证明质粒证明质粒DNA用同样的方法也可进入细菌。用同样的方法也可进入细菌。第34页，讲稿共60张，创作于星期二转化原理：转化原理：将将快快速速生生长长中中的的大大肠肠杆杆菌菌置置于于经经0预预处处理理的的低低渗渗氯氯化化钙钙溶溶液液中中，使使细细胞胞膨膨胀胀，细细胞胞膜膜通通透透性性发发生生变变

23、化化，易易与外源与外源DNA相粘附并在细胞表面的复合物。相粘附并在细胞表面的复合物。42下下做做短短暂暂热热刺刺激激，复复合合物物便便会会被被细细胞胞所所吸吸收收。在在全全培培养养基基中中生生长长一一段段时时间间使使转转化化基基因因实实现现表表达达，就就可可涂布于选择性培养基中分离转化子。涂布于选择性培养基中分离转化子。第35页，讲稿共60张，创作于星期二噬噬菌菌体体可可以以作作为为克隆载体克隆载体第36页，讲稿共60张，创作于星期二第37页，讲稿共60张，创作于星期二聚合酶链反应技术（聚合酶链反应技术（PCR）首首先先将将双双链链DNA分分子子加加热热分分离离成成两两条条单单链链，DNA聚聚

24、合合酶酶以以单单链链DNA为为模模板板并并利利用用反反应应混混合合物物中中的的四四种种dNTP合合成成新新生生的的DNA互互补链。补链。因因为为DNA聚聚合合酶酶需需要要有有一一小小段段双双链链DNA来来启启动动（“引引导导”）新新链链的的合合成成，所所以以，新新生生DNA链链的的起起点点由由寡寡核核苷苷酸酸引引物物在在模模板板DNA链链两端的退火位点所决定。两端的退火位点所决定。第38页，讲稿共60张，创作于星期二 整整个个PCR反反应应的的全全过过程程，即即DNA解解链链（变变性性）、引引物物与与模模板板DNA相相结结合合（退退火火）、DNA合合成成（链链的的延延伸伸）三三步步，可可以以被

25、被不不断断重重复复。经经多多次次循循环环之之后后，反反应应混混合合物物中中所所含含有有的的双双链链DNA分分子子数数，即即两两条条引引物物结结合合位位点点之之间间的的DNA区区段段的的拷拷贝贝数数，理理论论上上的的最最高高值值应是应是2n。第39页，讲稿共60张，创作于星期二PCRPCR指数扩增时循环次数与指数扩增时循环次数与指数扩增时循环次数与指数扩增时循环次数与DNADNA产物数量的比较。产物数量的比较。产物数量的比较。产物数量的比较。第40页，讲稿共60张，创作于星期二主要步骤：主要步骤：将将含含有有待待扩扩增增DNA样样品品的的反反应应混混合合物物放放置置在在高高温温（94）环环境境下

26、下加加热热1分分钟钟，使使双双链链DNA变变性性，形形成成单单链链模模板板DNA。第41页，讲稿共60张，创作于星期二 然然后后降降低低反反应应温温度度（约约50），致致冷冷1分分钟钟，使使寡寡核核苷苷酸酸引引物物与与两两条条单单链链模模板板DNA发发生生退退火火作作用用并并结结合合在在靶靶DNA区段两端的互补序列位置上。区段两端的互补序列位置上。第42页，讲稿共60张，创作于星期二最最后后，将将反反应应混混合合物物的的温温度度上上升升到到72左左右右保保温温1-数数分分钟钟，在在DNA聚聚合合酶酶的的作作用用下下，从从引引物物的的3-端端加加入入脱脱氧氧核核苷苷三三磷磷酸酸，并并沿沿着着模模

27、板板分分子子按按53方方向延伸，合成新生向延伸，合成新生DNA互补链。互补链。第43页，讲稿共60张，创作于星期二第44页，讲稿共60张，创作于星期二实时定量实时定量PCR（Real time-PCR）普通普通PCR扩增产物总量变化大。扩增产物总量变化大。实实时时定定量量PCR技技术术：利利用用带带荧荧光光检检测测的的PCR仪仪对对PCR过程过程DNA累积作出动态监测。累积作出动态监测。荧光染料：荧光染料：SYBR Green ITaqMan探针探针第45页，讲稿共60张，创作于星期二实时定量实时定量PCR（Real time-PCR）第46页，讲稿共60张，创作于星期二基因组基因组DNA文库

28、构建文库构建 基基因因组组 DNA文文库库构构建建：把把某某种种生生物物基基因因组组DNA切切成成适适当当大大小小，分分别别与与载载体体组组合合，导导入入微微生物细胞，形成克隆。生物细胞，形成克隆。汇汇集集包包含含基基因因组组中中所所有有DNA序序列列的的克克隆隆，称为称为基因组基因组DNA文库文库。常常用用载载体体：噬噬菌菌体体；柯柯斯斯质质粒粒；BAC；PAC；YAC第47页，讲稿共60张，创作于星期二RNA基本操作技术基本操作技术在在DNA水水平平上上分分离离真真核核生生物物的的靶靶基基因因难难度度大大：基基因组因组DNA庞大；大量重复序列；有内含子。庞大；大量重复序列；有内含子。而而分

29、分离离mRNAcDNA目目的的基基因因工工作作简简单单，速速度度快。快。但但是是，RNA分分子子：敏敏感感，稳稳定定性性差差，某某些些基基因因的的mRNA具有时相和转录的特殊性。具有时相和转录的特殊性。第48页，讲稿共60张，创作于星期二总总RNA的提取的提取1、操操作作要要求求高高：选选择择合合适适的的时时相相、采采用用适适当当的的条条件件与与材材料料，避免降解。避免降解。2、方法：、方法：Trizol法法。由由苯苯酚酚和和异异硫硫氰氰酸酸胍胍组组成成，可可迅迅速速破破坏坏细细胞胞结结构，使构，使RNA释放，并保持释放，并保持RNA完整。完整。3、浓度和纯度鉴定：、浓度和纯度鉴定：通过通过O

30、D260/OD280的比值来鉴定的比值来鉴定第49页，讲稿共60张，创作于星期二mRNA的纯化的纯化 根根据据mRNA3端端具具有有polyA尾尾巴巴的的特特点点，利利用用寡寡聚聚（dT）-纤纤维维素素柱柱色色谱谱法法纯纯化化获获得得高纯度的高纯度的mRNA。第50页，讲稿共60张，创作于星期二PolyATtract mRNA的分离纯的分离纯化过程简图化过程简图第51页，讲稿共60张，创作于星期二cDNA的合成的合成 使使用用oligo dT或或随随机机引引物物，通通过过RT-PCR法（法（逆转录酶）。逆转录酶）。第52页，讲稿共60张，创作于星期二cDNA合成过程合成过程示意图示意图第53页

31、，讲稿共60张，创作于星期二cDNA文库的构建文库的构建获获得得的的含含有有某某种种组组织织器器官官cDNA信信息息的的噬噬菌菌体体文文库库，可可用用于于筛筛选选目目的的基基因因、大大规规模模测测序、基因芯片杂交等功能。序、基因芯片杂交等功能。做法：做法：mRNAcDNA 载体载体大肠杆菌大肠杆菌一一个个完完整整的的cDNA文文库库通通常常包包含含大大于于500000的的独独立立克隆。克隆。第54页，讲稿共60张，创作于星期二1995年，首次提出了蛋白组学的概念。其是蛋白质年，首次提出了蛋白组学的概念。其是蛋白质和基因组研究在形式和内容方面的结合，致力于研和基因组研究在形式和内容方面的结合，致

32、力于研究某一物种、个体、器官或细胞在特定条件、特定究某一物种、个体、器官或细胞在特定条件、特定时间所表达的全部蛋白质图谱。时间所表达的全部蛋白质图谱。基因组是相对固定的，但各个基因的表达调控与基因组是相对固定的，但各个基因的表达调控与表达程度却有时空性。表达程度却有时空性。蛋白质组与蛋白质组学技术蛋白质组与蛋白质组学技术第55页，讲稿共60张，创作于星期二1975年首次建立了等电聚焦及年首次建立了等电聚焦及SDS-聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶双向电泳技术，该方法依赖于蛋白质分子的等电点双向电泳技术，该方法依赖于蛋白质分子的等电点和相对分子质量的差异。和相对分子质量的差异。目前，双向电泳的分辨率

33、达到每块胶目前，双向电泳的分辨率达到每块胶10000个蛋个蛋白白点。白白点。双向电泳技术双向电泳技术第56页，讲稿共60张，创作于星期二第57页，讲稿共60张，创作于星期二蛋蛋白白质质印印迹迹法法（Western blotting），又又称称为为免免疫疫印印迹迹法法（immunoblotting）,用用于于鉴鉴定定蛋蛋白白质质，其其原原理理是是根根据据被被测测蛋蛋白白质质能能与与特特异异性性抗抗体体结结合合的的特特性性和和该该蛋蛋白白质质的的相相对对分子质量。分子质量。蛋白质印迹法蛋白质印迹法第58页，讲稿共60张，创作于星期二Western Blotting示意图示意图第59页，讲稿共60张，创作于星期二感谢大家观看第60页，讲稿共60张，创作于星期二