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1、关于损伤与修复关于损伤与修复1第1页，讲稿共49张，创作于星期一2 哺乳动物细胞哺乳动物细胞DNA损伤的发生频率损伤的发生频率 DNA损伤类型损伤类型 次次细胞细胞-1 天天 1 单链损伤单链损伤 55 000 脱嘌呤脱嘌呤 10 000 脱嘧啶脱嘧啶 200 O6甲基鸟嘌呤甲基鸟嘌呤 3 100 胞嘧啶脱氨基胞嘧啶脱氨基 200 胸腺嘧啶乙二醇胸腺嘧啶乙二醇 270 胸苷乙二醇胸苷乙二醇 70第2页，讲稿共49张，创作于星期一3自自发发性性复制错误复制错误碱基脱落或部分脱落碱基脱落或部分脱落活性氧活性氧紫外线紫外线电离辐射电离辐射烷化剂烷化剂碱基类似物碱基类似物修饰剂修饰剂DNA第一节第一节

2、 DNA损伤的原因及后果损伤的原因及后果病原生物基因的整合病原生物基因的整合物物理理因因素素化化学学因因素素第3页，讲稿共49张，创作于星期一4一、一、DNADNA分子的自发性损伤分子的自发性损伤(一一)DNA)DNA复制产生误差复制产生误差 模板模板 核酸外切酶活性核酸外切酶活性 DNA聚合酶聚合酶 错配碱基错配碱基第4页，讲稿共49张，创作于星期一5 如大肠杆菌如大肠杆菌 碱基配对的错误率为碱基配对的错误率为1010-1-1-10-10-2-2 DNA DNA聚合酶校正后错误率为聚合酶校正后错误率为1010-5-5-10-10-6-6 复制后经校正系统校正，错配率为复制后经校正系统校正，错

3、配率为1010-9-9左右左右第5页，讲稿共49张，创作于星期一6碱基碱基T和和G能够以酮式或烯醇式两能够以酮式或烯醇式两种互变异构的状态出现种互变异构的状态出现碱基碱基C和和A能够以氨基式或亚氨基能够以氨基式或亚氨基式两种互变状态出现式两种互变状态出现一般生理条件下，碱基互变平衡一般生理条件下，碱基互变平衡反应倾向于酮式或氨基式，故反应倾向于酮式或氨基式，故A 与与T和和C 与与G碱基配对碱基配对（二）（二）DNA的自发性化学变化的自发性化学变化 1.碱基的异构互变碱基的异构互变第6页，讲稿共49张，创作于星期一7互变异构效应互变异构效应引起不正常的引起不正常的碱基配对碱基配对稀有形式稀有形

4、式常见形式常见形式A与与T C与与GA与与C T与与G第7页，讲稿共49张，创作于星期一8 2.2.碱基的脱氨基作用碱基的脱氨基作用 碱基的环外氨基有时会自发碱基的环外氨基有时会自发脱落，从而胞嘧啶脱落，从而胞嘧啶(C)(C)变成尿嘧变成尿嘧啶啶(U)(U)，腺嘌呤，腺嘌呤(A)(A)变成次黄嘌呤变成次黄嘌呤(H)(H)。复制时。复制时,U,U与与A A配对、配对、H H与与C C配配对就会导致子代对就会导致子代DNADNA序列的错误序列的错误变化。变化。(A)(H)(C)(U)第8页，讲稿共49张，创作于星期一9 3脱嘌呤与脱嘧啶脱嘌呤与脱嘧啶 即碱基脱落，是指从即碱基脱落，是指从DNA上丢

5、失了嘌呤或嘧啶，上丢失了嘌呤或嘧啶，形成无碱基位点，称为形成无碱基位点，称为AP部部位（位（apurine,apyrimidine site,AP）。）。第9页，讲稿共49张，创作于星期一10l复制时可以插入任何核苷酸。复制时可以插入任何核苷酸。l脱落碱基后的脱氧核糖脱落碱基后的脱氧核糖33端的磷酸二酯键易被水解，端的磷酸二酯键易被水解，造成造成DNADNA链断裂。链断裂。l在哺乳动物细胞基因组中，每天每个细胞因在哺乳动物细胞基因组中，每天每个细胞因N-N-糖苷键糖苷键自发水解约丢失自发水解约丢失10 00010 000个嘌呤碱基和个嘌呤碱基和200200个嘧啶碱基。个嘧啶碱基。第10页，讲稿

6、共49张，创作于星期一11 4碱基修饰与链断裂碱基修饰与链断裂 细胞在正常生理活动中产生的活性氧细胞在正常生理活动中产生的活性氧会造成会造成DNA损伤，产生胸腺嘧啶乙二醇、损伤，产生胸腺嘧啶乙二醇、羟甲基尿嘧啶等碱基修饰物，还可引起羟甲基尿嘧啶等碱基修饰物，还可引起DNA单链断裂等损伤。单链断裂等损伤。第11页，讲稿共49张，创作于星期一12二、物理因素引起的二、物理因素引起的DNA损伤损伤(一一)紫外线照射引起的紫外线照射引起的DNA损伤损伤 同一条同一条DNA链相邻嘧啶以共价键连成二聚体链相邻嘧啶以共价键连成二聚体(T-T、C-T、C-C)，导致复制不能进行。，导致复制不能进行。皮肤因受紫

7、外线照射而形成二聚体的频率可达每小皮肤因受紫外线照射而形成二聚体的频率可达每小时时5105104 4细胞细胞紫外线不能穿透皮肤，因此损伤只局限在皮肤中紫外线不能穿透皮肤，因此损伤只局限在皮肤中紫外线照射还能引起紫外线照射还能引起DNADNA链断裂等损伤链断裂等损伤第12页，讲稿共49张，创作于星期一13胸腺嘧啶二聚体胸腺嘧啶二聚体第13页，讲稿共49张，创作于星期一14 (二二)电离辐射引起的电离辐射引起的DNADNA损伤损伤 直接效应：直接效应：DNADNA直接吸收射线能量直接吸收射线能量而遭损伤。而遭损伤。间接效应：间接效应：DNADNA周围其他分子周围其他分子(主要主要是水分子是水分子)

8、吸收射线能量而吸收射线能量而产生具有很高反应活性的自产生具有很高反应活性的自由基，进而损伤由基，进而损伤DNADNA。第14页，讲稿共49张，创作于星期一15电离辐射引起电离辐射引起DNA损伤的类型损伤的类型产生产生 OH自由基，导致碱基变化自由基，导致碱基变化 脱氧核糖分解脱氧核糖分解 DNA链断裂链断裂 交联交联 包括包括DNA链交联和链交联和DNA-蛋白质交联蛋白质交联 第15页，讲稿共49张，创作于星期一16三、化学因素引起的三、化学因素引起的DNA损伤损伤(一一)烷化剂对烷化剂对DNA的损伤的损伤1碱基烷基化碱基烷基化 2.碱基脱落碱基脱落3 断链断链 4.交联交联第16页，讲稿共4

9、9张，创作于星期一17 5-BrdU（5-BrdU-A；5-BrdU-G）酮式酮式 烯醇式烯醇式(二二)碱基类似物、修饰剂对碱基类似物、修饰剂对DNA的改变的改变 亚硝酸盐能使亚硝酸盐能使C脱氨基变成脱氨基变成U（CU）羟胺能使羟胺能使T脱甲基变成脱甲基变成C （TC）黄曲霉素黄曲霉素B1(GT)第17页，讲稿共49张，创作于星期一18可修复的损伤可修复的损伤激活存活反应网络激活存活反应网络损伤原因损伤原因物理因素物理因素化学因素化学因素损伤程度损伤程度不可逆的损伤不可逆的损伤细胞反应细胞反应细胞后果细胞后果激活凋亡途径激活凋亡途径细胞周期阻滞、修复细胞周期阻滞、修复突变、染色体畸变突变、染色

10、体畸变细胞存活细胞存活细胞死亡细胞死亡细胞恶性转化细胞恶性转化自发性自发性各种各种DNADNA损伤损伤第18页，讲稿共49张，创作于星期一19第二节第二节 DNA修复修复(DNA repair)DNADNA修复是细胞对修复是细胞对DNADNA受损伤后的一种受损伤后的一种反应，这种反应可能使反应，这种反应可能使DNADNA结构恢复原样，结构恢复原样，重新执行原来的功能，但有时并非能完全消重新执行原来的功能，但有时并非能完全消除除DNADNA的损伤，只是使细胞能够耐受这种的损伤，只是使细胞能够耐受这种DNADNA的损伤而能继续生存。的损伤而能继续生存。第19页，讲稿共49张，创作于星期一20一、错

11、配修复一、错配修复(mismatch repair)(mismatch repair)校正校正DNA复制和重组过程中发生的碱基错配。复制和重组过程中发生的碱基错配。错配的碱基可被错配修复酶识别后进行修错配的碱基可被错配修复酶识别后进行修复。复。第20页，讲稿共49张，创作于星期一21错配修复错配修复(大肠杆菌)Mis-paired bases第21页，讲稿共49张，创作于星期一22错配修复错配修复(大肠杆菌大肠杆菌)第22页，讲稿共49张，创作于星期一232.2.真核细胞错配修复机制真核细胞错配修复机制第23页，讲稿共49张，创作于星期一24第24页，讲稿共49张，创作于星期一25 在含有错配

12、碱基的在含有错配碱基的DNA分子中，使正常核苷酸分子中，使正常核苷酸序列恢复的修复方式。序列恢复的修复方式。过程：识别出不正确的链，切除掉不正确链的部分，过程：识别出不正确的链，切除掉不正确链的部分，然后通过然后通过DNA聚合酶和聚合酶和DNA连接酶的作用，合成正连接酶的作用，合成正确配对的双链确配对的双链DNA。错配修复错配修复（mismatch repair）：第25页，讲稿共49张，创作于星期一26遗传性非息肉型结肠癌（遗传性非息肉型结肠癌（hereditary nonhereditary nonpolyposis polyposis colorectal cancercolorecta

13、l cancer，HNPCCHNPCC）lHNPCCHNPCC的临床特征的临床特征l发病早发病早 (-45(-45 岁岁)l肿瘤好发部位：结肠肿瘤好发部位：结肠第26页，讲稿共49张，创作于星期一27HNPCC与与DNA的错配修复基因突变有关的错配修复基因突变有关 MSH2,MSH6,PMS1，MLH1,MSH3,PMS2.第27页，讲稿共49张，创作于星期一28二、直接修复二、直接修复1.单链断裂修复单链断裂修复 在在 DNA 5-P DNA 5-P 端和端和 3-OH3-OH端未受损伤的端未受损伤的情况下，连接酶能够直接修复情况下，连接酶能够直接修复DNADNA的断裂口。的断裂口。第28页

14、，讲稿共49张，创作于星期一292.2.光分解酶光分解酶(光复活酶光复活酶)直接修复二聚体直接修复二聚体形成嘧啶二聚体形成嘧啶二聚体光复活酶结合于光复活酶结合于损伤部位损伤部位酶被可见光激活酶被可见光激活修复后释放酶修复后释放酶第29页，讲稿共49张，创作于星期一303.3.直接修复烷基化碱基直接修复烷基化碱基O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶甲基鸟嘌呤甲基转移酶 O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶通过将甲基从甲基鸟嘌呤甲基转移酶通过将甲基从O6-甲基鸟嘌呤转移到自身的半胱氨酸残基上来修复甲基鸟嘌呤转移到自身的半胱氨酸残基上来修复DNADNA。第30页，讲稿共49张，创作于星期一314 4直接插入嘌呤直接插入

15、嘌呤 DNADNA链链上上嘌嘌呤呤的的脱脱落落造造成成无无嘌嘌呤呤位位点点，能能被被DNADNA嘌嘌呤呤插插入入酶酶(insertase)(insertase)识识别别结结合合，催催化化游游离离的的嘌嘌呤呤碱碱基基与与DNADNA无无嘌嘌呤呤部部位位形形成成糖糖苷苷键键。且且催催化化插插入入的的碱碱基基有有高高度度专专一一性性、与与另另一条链上的碱基严格配对，使一条链上的碱基严格配对，使DNADNA完全恢复。完全恢复。第31页，讲稿共49张，创作于星期一32三、碱基切除修复碱基切除修复（base excision repair，BER）l 指切除和替换由内源性化学物作用产生的指切除和替换由内源

16、性化学物作用产生的 DNA碱基损伤。碱基损伤。l 受损碱基移除是由多个酶来完成的。受损碱基移除是由多个酶来完成的。l 主要针对主要针对DNA单链断裂和小的碱基改变及氧单链断裂和小的碱基改变及氧 化性损伤。化性损伤。第32页，讲稿共49张，创作于星期一33碱基切除修复碱基切除修复第33页，讲稿共49张，创作于星期一34 四、核苷酸切除修复四、核苷酸切除修复（nucleotide excision repair，NER）l 体内识别体内识别 DNA DNA 损伤最多的修复通路。损伤最多的修复通路。l 不识别任何特殊的碱基损伤，而是识别双螺不识别任何特殊的碱基损伤，而是识别双螺旋形状的改变；修复时切

17、除含有损伤碱基的那旋形状的改变；修复时切除含有损伤碱基的那一段一段 DNADNA。第34页，讲稿共49张，创作于星期一35以大肠杆菌为例以大肠杆菌为例UvrA:识别损伤部位识别损伤部位UvrB:解旋双链解旋双链紫外线诱导紫外线诱导uvrA、uvrB、uvrC和和uvrD四四种基因表达种基因表达第35页，讲稿共49张，创作于星期一36UvrC:5末端内切末端内切UvrB:3末端内切末端内切第36页，讲稿共49张，创作于星期一37UvrD:解旋酶解旋酶第37页，讲稿共49张，创作于星期一38核苷酸切除修复核苷酸切除修复(基因组修复基因组修复人类人类)第38页，讲稿共49张，创作于星期一39GG-N

18、ER 和和TC-NER的共同修复通路的共同修复通路第39页，讲稿共49张，创作于星期一40核苷酸切除修复核苷酸切除修复 (转录偶联修复转录偶联修复 -人类人类)第40页，讲稿共49张，创作于星期一41着着色性色性干干皮病皮病(Xeroderma pigmentosis)(Xeroderma pigmentosis)l是一种隐性遗传性疾病，是一种隐性遗传性疾病，该病是由于患者对紫外线照射造成的核苷酸该病是由于患者对紫外线照射造成的核苷酸损伤切除修复缺陷所致损伤切除修复缺陷所致。临床以光暴露部位色素增加和角化及癌变为特征。临床以光暴露部位色素增加和角化及癌变为特征。l1.1.幼年发病，常有家族发病

19、史。幼年发病，常有家族发病史。l2.2.面部等暴露部位出现红斑、褐色斑点及斑片，伴毛细血管扩张，间有面部等暴露部位出现红斑、褐色斑点及斑片，伴毛细血管扩张，间有色素脱失斑和萎缩或疤痕色素脱失斑和萎缩或疤痕,皮肤干燥。数年内发生基底细胞癌、鳞癌及恶皮肤干燥。数年内发生基底细胞癌、鳞癌及恶性黑素瘤。性黑素瘤。l3.3.皮肤和眼对日光敏感。皮肤和眼对日光敏感。l4.4.病情随年龄逐渐加重，多数患者于病情随年龄逐渐加重，多数患者于2020岁前因恶性肿瘤而死亡。岁前因恶性肿瘤而死亡。l5.5.组织病理组织病理 晚期出现表皮非典型性增生、日光角化及鳞癌和基底细胞癌等恶性晚期出现表皮非典型性增生、日光角化及

20、鳞癌和基底细胞癌等恶性肿瘤。肿瘤。第41页，讲稿共49张，创作于星期一42着着色性色性干干皮病皮病患儿脸部特征患儿脸部特征第42页，讲稿共49张，创作于星期一43五、重组修复五、重组修复大肠杆菌重组修复大肠杆菌重组修复第43页，讲稿共49张，创作于星期一44五、重组修复五、重组修复根据根据 DNA 末端连接需要的同源性分为末端连接需要的同源性分为:同同源源重重组组修修复复：需需要要多多种种蛋蛋白白参参与与,在在 S/G2期期起主要作用。起主要作用。非同源末端连接修复：非同源末端连接修复：DNA分子之间不需要广分子之间不需要广泛的同源性，在泛的同源性，在G1/G0期起主要作用。期起主要作用。第4

21、4页，讲稿共49张，创作于星期一45同源重组修复同源重组修复DNADNA双链断裂（人类）双链断裂（人类）第45页，讲稿共49张，创作于星期一46非同源末端连接修复非同源末端连接修复DNADNA双链断裂双链断裂（人类）（人类）第46页，讲稿共49张，创作于星期一47第47页，讲稿共49张，创作于星期一48鸟嘌呤鸟嘌呤胞嘧啶胞嘧啶O6-乙基鸟嘌呤乙基鸟嘌呤胸腺嘧啶胸腺嘧啶碱基烷基化碱基烷基化 烷化剂很容易将烷基加到烷化剂很容易将烷基加到DNA链中嘌呤或嘧啶的链中嘌呤或嘧啶的N或或O上上,烷基化的嘌呤碱基配对会发生变化。烷基化的嘌呤碱基配对会发生变化。第48页，讲稿共49张，创作于星期一03.04.2023感谢大家观看第49页，讲稿共49张，创作于星期一