微生物正交实验精选PPT.ppt
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1、关于微生物正交实验第1页,讲稿共70张,创作于星期日 菌种的扩大培养是发酵生产的第一道工序,该工序该工序又称为又称为种子制备。菌体数量增加种子制备 高质量的种子高质量的种子种子的扩大培养任务:种子的扩大培养任务:获得纯而壮且活力旺盛、接种数量足够的培养物。发酵时间长短和接种量的大小有关。发酵时间长短和接种量的大小有关。将较多数量的成熟菌体接入发酵罐中,有利于缩短将较多数量的成熟菌体接入发酵罐中,有利于缩短 发酵时发酵时间,提高发酵罐利用率,减少染菌机会。间,提高发酵罐利用率,减少染菌机会。第2页,讲稿共70张,创作于星期日一、种子制备的过程 1、固体培养基上生产大量孢子的孢子制 备 2、液体培
2、养基中生产大量菌丝的过程第3页,讲稿共70张,创作于星期日1、孢子制备 孢子制备是种子制备的开始,孢子的质量、数量对以后孢子制备是种子制备的开始,孢子的质量、数量对以后菌丝的生长、繁殖、发酵产量有明显影响。菌丝的生长、繁殖、发酵产量有明显影响。(1)放线菌孢子的制备 限制碳源、氮源(碳源1,氮源不超过0.5);添加麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨、无机盐;干燥。放线菌发酵生产的工艺流程:放线菌发酵生产的工艺流程:菌种菌种 母斜面母斜面 子斜面子斜面 摇瓶种子摇瓶种子 种子罐种子罐 发酵罐发酵罐 (孢子)(孢子)(菌丝)第4页,讲稿共70张,创作于星期日(2)霉菌孢子的制备 一般以大米、小米、玉米、麸皮等
3、天然农产品为培养基(3)细菌培养物的制备 斜面多为碳源限量、氮源丰富的配方第5页,讲稿共70张,创作于星期日2、种子制备 种子制备是将固体培养基上培养出的孢子或菌体转入到液体培养基中培养,使其繁殖成大量菌丝或菌体的过程。(1 1)摇瓶种子制备:某些孢子发芽和菌丝繁殖速度缓慢的)摇瓶种子制备:某些孢子发芽和菌丝繁殖速度缓慢的菌种,需将孢子经摇瓶培养成菌丝后再进入种子罐,这菌种,需将孢子经摇瓶培养成菌丝后再进入种子罐,这就是摇瓶种子。分母瓶和子瓶。就是摇瓶种子。分母瓶和子瓶。(2 2)种子罐种子制备:因菌种不同而异,一般可分为一级)种子罐种子制备:因菌种不同而异,一般可分为一级种子、二级种子和三级
4、种子的制备。种子、二级种子和三级种子的制备。第6页,讲稿共70张,创作于星期日A A、一级种子:孢子或摇瓶菌丝被接入到体积较小的种子:孢子或摇瓶菌丝被接入到体积较小的种子罐中,经培养后形成大量菌丝。一级种子转入到发酵罐罐中,经培养后形成大量菌丝。一级种子转入到发酵罐内发酵,称为内发酵,称为二级发酵。B、二级种子:将一级种子转入体积较大的种子罐中,经:将一级种子转入体积较大的种子罐中,经过培养形成更多的菌丝。二级种子转入到发酵罐内发酵,过培养形成更多的菌丝。二级种子转入到发酵罐内发酵,称为称为三级发酵。C、三级种子,四级发酵三级种子,四级发酵 种子罐的级数主要决定于菌株性质和菌体生长速度及发种子
5、罐的级数主要决定于菌株性质和菌体生长速度及发酵设备的合理应用。酵设备的合理应用。第7页,讲稿共70张,创作于星期日二、种子培养 表面培养法:好氧静置好氧静置 培养法培养法 固体培养法:曲法培养固体培养法:曲法培养 液体深层培养 液体表面培养固体表面培养浅盘固体培养深层固体培养第8页,讲稿共70张,创作于星期日液体深层培养 液体深层种子罐从罐底部通气,送入的空气由搅拌浆叶分散成微小气泡以促进氧的溶解。这种由罐底部通气搅拌的培养方法,相对于气液界面靠自然扩散使氧溶解的表面培养法,称为深层培养法。深层培养基本操作的三个控制点:灭菌 温度控制 通气、搅拌第9页,讲稿共70张,创作于星期日几种深层培养法
6、(1 1)控制培养法:控制培养法:根据罐内部的变化情况,掌握根据罐内部的变化情况,掌握 短时间内状态变量的变化以及可能测定的环境 因子对微生物代谢活动的影响,以此为基础 作控制培养,以达到产物的最优培养条件。(2 2)载体培养法载体培养法:以天然或人工合成的多孔 材料代替麸皮之类的固体基质作为微生 物的载体。物的载体。(3)两步法两步法:酶制剂的两步深层培养中,将 菌体生长(营养期)和产酶条件(繁殖菌体生长(营养期)和产酶条件(繁殖 期)区分开。第10页,讲稿共70张,创作于星期日三、种子质量控制种子质量主要受孢子质量、培养基、培养条件、种龄和接种量等因素的影响。种子的质量是发酵能否正常进行的
7、重要因素之一,因为种子制备不仅是要提供一定数量的菌体,更为重要的是要为发酵生产提供适合发酵、具有一定生理状态大的菌体。种子质量的控制将以此为出发点。第11页,讲稿共70张,创作于星期日三、种子质量控制1、培养基:尽量选择一些有利于孢子发芽和菌丝生长的培、培养基:尽量选择一些有利于孢子发芽和菌丝生长的培养基;营养成分要尽可能和发酵培养基相近。养基;营养成分要尽可能和发酵培养基相近。2 2、培养条件:最适温度;通气搅拌的控制。青霉素生产青霉素生产:通气充足和通气不足的种子都接入发酵罐,:通气充足和通气不足的种子都接入发酵罐,发酵单位可相差一倍。发酵单位可相差一倍。土霉素发酵生产土霉素发酵生产:一级
8、种子罐通气量小却有利。:一级种子罐通气量小却有利。搅拌不足会引起菌丝结团、菌丝粘壁等异常搅拌不足会引起菌丝结团、菌丝粘壁等异常第12页,讲稿共70张,创作于星期日3、种龄:即种子培养时间。一般选对数生长期对数生长期,菌体量尚未达到最高峰时移种。最适种龄:细菌724h;霉菌霉菌 1650h;放线菌2164h64h 同一菌种的不同罐批培养相同的时间,得到种子质量也不完全一致,因此最适的种龄更应通过多次试验,根据本批种子质量来确定。第13页,讲稿共70张,创作于星期日4、接种量:即移入的种子液体积和接种后培养液体积的比例。接种量大小与该菌在发酵罐中生长繁殖的速度有关。近年来,生产上多以大接种量和丰富
9、培养基作为高产措施,如谷氨酸生产:采用高生物素、大接种量、添加青霉素 加大接种量 双种法 种子罐染菌或不理想种子罐染菌或不理想 倒种法、混种进罐倒种法、混种进罐第14页,讲稿共70张,创作于星期日5、种子质量标准(1)细胞或菌体:菌体形态:显微镜观察 菌体健壮、菌形一致、均匀整齐(单细胞菌体种子)菌丝粗壮、对某些染料着色力强、生产旺盛、菌丝分枝和菌丝粗壮、对某些染料着色力强、生产旺盛、菌丝分枝和内含物情况良好(霉菌和放线菌种子)内含物情况良好(霉菌和放线菌种子)菌体生长量:离心沉淀法、光密度法、物质代谢的反应菌体生长量:离心沉淀法、光密度法、物质代谢的反应种子液外观:颜色、粘度。第15页,讲稿
10、共70张,创作于星期日 (2)生化指标:种子液的糖、氮、磷、和pH值变化 (3)产物生成量:(4)酶活力5、种子质量标准第16页,讲稿共70张,创作于星期日6、种子异常的分析、种子异常的分析种子异常往往表现为:种子异常往往表现为:(1)菌种生长发育缓慢或过快:和孢子质量和种子罐的培养条件有关。(2)菌丝结团:液体培养条件下,繁殖的菌丝不分散舒展而聚集成团为菌丝团,与搅拌效果差、接种量小有关。(3)菌丝粘壁:与搅拌效果差、泡沫过多、种子罐装料系数过少等有关。第17页,讲稿共70张,创作于星期日种子带菌及其防治:种子带菌及其防治:a 种子带菌:发酵前期染菌的重要原因之一,是发酵成败的关键。b 种子
11、带菌原因:保藏的斜面试管菌种染菌、培养基和器具灭菌不彻底、种子转移和接种过程染菌以及种子培养基所涉及的设备和装置染菌等。第18页,讲稿共70张,创作于星期日 C 种子染菌防治:严格控制无菌室污染;制备种子时对沙土管、斜面、摇瓶等严格进行管理,防 止杂菌的进入而受到污染;对每一级种子的培养物进行严格的无菌检查;对菌种培养基或器具进行严格的灭菌处理。第19页,讲稿共70张,创作于星期日第20页,讲稿共70张,创作于星期日培培 养养 基基 定义:提供微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的按一定比例配制的多种营养物质的混合物。第21页,讲稿共70张,创作于星期日一、工业培养基的选择一、工业培养基
12、的选择l l从微生物的特点来选择培养基l l液体和固体培养基选择l l从生产实践和科学试验的不同要求选择l l从经济效益方面考虑选择生产原料第22页,讲稿共70张,创作于星期日二、培养基配置原则二、培养基配置原则l l根据不同微生物的营养需要 配制不同的培养基l l营养成分的恰当配比l l渗透压l lpH值l l氧化还原电位第23页,讲稿共70张,创作于星期日三、工业发酵培养基三、工业发酵培养基l l 消耗每克底物将产生最大的菌体得率 或产物得率l l 能产生最高的产品或菌体浓度l l能得到产物的最大速率l l副产品的得率小l l价廉质量稳定l l来源丰富且供应充分第24页,讲稿共70张,创作
13、于星期日蚌埠丰原生化蚌埠丰原生化蚌埠丰原生化蚌埠丰原生化运用先进的生物发酵和现代化工分离技术,以生物发运用先进的生物发酵和现代化工分离技术,以生物发酵技术为起点,大力发展农产品深加工产业,发展成为集生物化工、酵技术为起点,大力发展农产品深加工产业,发展成为集生物化工、制药、食品加工、油脂加工、生物新材料为一体的加工制造产业集制药、食品加工、油脂加工、生物新材料为一体的加工制造产业集团。团。柠檬酸及其盐类产品生产能力处于全国发酵产品行业第一位,在世柠檬酸及其盐类产品生产能力处于全国发酵产品行业第一位,在世界同行业排名前列,位居全国精细化工之首。界同行业排名前列,位居全国精细化工之首。丰原生化以玉
14、米、小麦、油料等农作物为原料,借助自己独创丰原生化以玉米、小麦、油料等农作物为原料,借助自己独创的的“利用玉米清液一次发酵生产柠檬酸利用玉米清液一次发酵生产柠檬酸利用玉米清液一次发酵生产柠檬酸利用玉米清液一次发酵生产柠檬酸”专利技术,国内首家专利技术,国内首家开发利用开发利用,开辟了柠檬酸生产的新途径,选育了适应该原料的开辟了柠檬酸生产的新途径,选育了适应该原料的新菌株,缩短了发酵周期,提高了收率,总收率达新菌株,缩短了发酵周期,提高了收率,总收率达80%80%以上。以上。降低了成本,提高了产品质量,其综合经济技术指标处于国内领降低了成本,提高了产品质量,其综合经济技术指标处于国内领先水平。以
15、玉米代替山芋干为原料,避免了环境污染,副产品还先水平。以玉米代替山芋干为原料,避免了环境污染,副产品还可开发利用。可开发利用。第25页,讲稿共70张,创作于星期日1、工业常用碳源工业常用碳源2、工业常用氮源、工业常用氮源3、无、无 机机 盐盐4、生长因子生长因子5 5、前体物质和前体物质和促进剂促进剂四、工业发酵培养基成分四、工业发酵培养基成分第26页,讲稿共70张,创作于星期日工业常用碳源工业常用碳源功能:供给菌体生命活动所需的能量 构成菌体细胞以及代谢的基础谷物淀粉、甘蔗糖蜜、甜菜糖蜜、大麦酒精、简单的有机酸、烷烃甲醇、甲烷第27页,讲稿共70张,创作于星期日工业常用氮源工业常用氮源 功能
16、:构成菌体细胞物质和代谢产物无机氮源:氨水、铵盐、硝酸盐等有机氮源:玉米浆、豆饼粉、鱼粉、酵母浸出液等 第28页,讲稿共70张,创作于星期日无无 机机 盐盐硫酸盐、磷酸盐、氯化物、含钾、钙、钠、镁、铁的化合物微量元素:铜、锰、锌、钼等 功能:构成菌体成分、酶的组成部分、酶 的激活剂或抑制剂、调节培养渗透 压、调节pH和氧化还原电位第29页,讲稿共70张,创作于星期日生生 长长 因因 子子定义:凡是微生物生长不可缺少的微量有机物质,如:氨基酸、嘌呤、嘧啶、维生素(生物素、硫胺素)。功能:构成细胞的组成,促进生命活动的 进行。并非必需的。提供生长因子的农副产品原料:玉米浆、麸皮水解液、糖蜜、酵母第
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