高效液相色谱分析方法的建立 (2)课件.ppt
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1、关于高效液相色谱分关于高效液相色谱分析方法的建立析方法的建立(2)第1页,此课件共79页哦反相高效液相色谱反相高效液相色谱(RPHPLC)分析方法的建立分析方法的建立 第2页,此课件共79页哦什么是色谱?什么是色谱?色谱是一种建立在一定的科学理论基础上的分离方法(工色谱是一种建立在一定的科学理论基础上的分离方法(工色谱是一种建立在一定的科学理论基础上的分离方法(工色谱是一种建立在一定的科学理论基础上的分离方法(工具、手段)。具、手段)。具、手段)。具、手段)。除色谱之外,经典(常见)的分离方法:除色谱之外,经典(常见)的分离方法:除色谱之外,经典(常见)的分离方法:除色谱之外,经典(常见)的分
2、离方法:蒸馏、离心、电泳、过滤、沉淀、萃取等等蒸馏、离心、电泳、过滤、沉淀、萃取等等蒸馏、离心、电泳、过滤、沉淀、萃取等等蒸馏、离心、电泳、过滤、沉淀、萃取等等色谱色谱是一种是一种是一种是一种高效能高效能高效能高效能 的分离方法的分离方法的分离方法的分离方法色谱分析色谱分析以一定的科学理论为基础,在高效能的分离基础上,以一定的科学理论为基础,在高效能的分离基础上,以一定的科学理论为基础,在高效能的分离基础上,以一定的科学理论为基础,在高效能的分离基础上,结合先进的检测方法而建立的现代分析方法。结合先进的检测方法而建立的现代分析方法。结合先进的检测方法而建立的现代分析方法。结合先进的检测方法而建
3、立的现代分析方法。第3页,此课件共79页哦什么是高效液相色谱法?什么是高效液相色谱法?High Performance Liquid ChromatographyHigh Performance Liquid Chromatography 高效液相色谱法,简称:高效液相色谱法,简称:高效液相色谱法,简称:高效液相色谱法,简称:HPLCHPLC 是一种区别于经典液相色谱,基于现代仪器方法的高效能是一种区别于经典液相色谱,基于现代仪器方法的高效能是一种区别于经典液相色谱,基于现代仪器方法的高效能是一种区别于经典液相色谱,基于现代仪器方法的高效能分析方法:分析方法:分析方法:分析方法:高性能的色谱柱
4、,高精度、耐高压的输液泵以及高性能的色谱柱,高精度、耐高压的输液泵以及高性能的色谱柱,高精度、耐高压的输液泵以及高性能的色谱柱,高精度、耐高压的输液泵以及高灵敏度、高选择性的检测器高灵敏度、高选择性的检测器高灵敏度、高选择性的检测器高灵敏度、高选择性的检测器 广泛应用于各个领域:广泛应用于各个领域:广泛应用于各个领域:广泛应用于各个领域:医药医药医药医药 /环保环保环保环保 /石化石化石化石化 /生命科学生命科学生命科学生命科学 /食品及农业食品及农业食品及农业食品及农业 在技术、理论及应用上已进入一个较高的水平,并高在技术、理论及应用上已进入一个较高的水平,并高在技术、理论及应用上已进入一个
5、较高的水平,并高在技术、理论及应用上已进入一个较高的水平,并高速发展。速发展。速发展。速发展。第4页,此课件共79页哦HPLC的基本配置及流程的基本配置及流程溶剂溶剂溶剂溶剂 色谱泵色谱泵手动手动/自动自动 进样器进样器 HPLCHPLC色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱检测器检测器废液废液数据处理系统数据处理系统 第5页,此课件共79页哦第6页,此课件共79页哦HPLC的仪器配置的仪器配置泵系统泵系统泵系统泵系统自动进样器自动进样器自动进样器自动进样器色谱柱及柱温箱色谱柱及柱温箱色谱柱及柱温箱色谱柱及柱温箱检测器检测器检测器检测器数据处理系统数据处理系统数据处理系统数据处理系统溶剂溶剂溶剂溶剂第7页,
6、此课件共79页哦第8页,此课件共79页哦第9页,此课件共79页哦第10页,此课件共79页哦第11页,此课件共79页哦色谱的发明人色谱的发明人茨维特茨维特(M.S.TswettM.S.Tswett)俄国科学家茨维特俄国科学家茨维特俄国科学家茨维特俄国科学家茨维特19031903年利用物质的吸附原理,开年利用物质的吸附原理,开年利用物质的吸附原理,开年利用物质的吸附原理,开创了应用吸附原理分离创了应用吸附原理分离创了应用吸附原理分离创了应用吸附原理分离植物色素植物色素植物色素植物色素 的新方法。的新方法。的新方法。的新方法。1906年正式命名年正式命名 色谱法;色谱法;色谱法;色谱法;Chroma
7、tographyChromatography30年代开始广泛研究和应用 主要是气相色谱及薄层色谱主要是气相色谱及薄层色谱主要是气相色谱及薄层色谱主要是气相色谱及薄层色谱高效液相色谱法的广泛应用始于高效液相色谱法的广泛应用始于70年代年代第12页,此课件共79页哦色谱的发明人色谱的发明人 俄国科学家俄国科学家俄国科学家俄国科学家 M.S.TswettM.S.Tswett第13页,此课件共79页哦正式命名正式命名“色谱色谱”的文献中的一段话的文献中的一段话第14页,此课件共79页哦 一般情况下一般情况下一般情况下一般情况下HPLCHPLC不是分析方法的首选不是分析方法的首选不是分析方法的首选不是分
8、析方法的首选 分析方法选择的大致程序(以药典分析方法为例):分析方法选择的大致程序(以药典分析方法为例):分析方法选择的大致程序(以药典分析方法为例):分析方法选择的大致程序(以药典分析方法为例):滴定分析(原料药、制剂定量分析)滴定分析(原料药、制剂定量分析)滴定分析(原料药、制剂定量分析)滴定分析(原料药、制剂定量分析)紫外可见光度分析(原料药、制剂定量分析)紫外可见光度分析(原料药、制剂定量分析)紫外可见光度分析(原料药、制剂定量分析)紫外可见光度分析(原料药、制剂定量分析)薄层色谱(鉴别、有关物质检查等;半定量分析)薄层色谱(鉴别、有关物质检查等;半定量分析)薄层色谱(鉴别、有关物质检
9、查等;半定量分析)薄层色谱(鉴别、有关物质检查等;半定量分析)HPLCHPLC(中药饮片、中药制剂的鉴别或有关物质的检查;(中药饮片、中药制剂的鉴别或有关物质的检查;(中药饮片、中药制剂的鉴别或有关物质的检查;(中药饮片、中药制剂的鉴别或有关物质的检查;复杂样品定量分析等)复杂样品定量分析等)复杂样品定量分析等)复杂样品定量分析等)什么情况下使用什么情况下使用HPLC?第15页,此课件共79页哦什么情况下使用什么情况下使用HPLC?1 1、对分析结果、测定速度和效率的要求、对分析结果、测定速度和效率的要求、对分析结果、测定速度和效率的要求、对分析结果、测定速度和效率的要求 准确度要求:准确定量
10、(准确度要求:准确定量(准确度要求:准确定量(准确度要求:准确定量(RSD5RSD1.5,R增加不大增加不大)。改改变变 的的方方法法有有:降降低低柱柱温温、改改变变流流动动相相及及固固定定相相的的性性质和组成。质和组成。(3)分离度分离度R 与容量因子与容量因子 k 的关系的关系 k 增增加加,分分离离度度R增增加加,但但分分析析时时间间也也将将增增加加。当当k10,则,则R的增加不明显。通常的增加不明显。通常k控制在控制在110之间。最好之间。最好15。改改变变 k 的的方方法法有有:适适当当增增加加柱柱温温、改改变变流流动动相相性性质以及固定液膜厚度。质以及固定液膜厚度。第64页,此课件
11、共79页哦 容量因子(容量因子(k)、柱效()、柱效(H)及分配系数比()及分配系数比()对分离度()对分离度(R)的)的影响影响HH第65页,此课件共79页哦3 分离条件选择的基本依据分离条件选择的基本依据 在分离多组分复杂混合物时,分子量相近、沸点差小及极性相似在分离多组分复杂混合物时,分子量相近、沸点差小及极性相似的组分,保留值相差小,分离较难。的组分,保留值相差小,分离较难。有必要设立一个指标,表征这种难分离的物质对。有必要设立一个指标,表征这种难分离的物质对。根据热力学参数对分离的影响,设立根据热力学参数对分离的影响,设立Sd值作为难分离物质对的量度。值作为难分离物质对的量度。在一定
12、的色谱条件下,规定:在一定的色谱条件下,规定:k1、k2为容量因子,为容量因子,*为动力学系数为动力学系数(1)难分离物质对的预测难分离物质对的预测 k2/k1比值越小,比值越小,*越大,越大,Sd值就越小,分离越难。值就越小,分离越难。k2/k1属于热力学参数,属于热力学参数,*属于动力学参数。属于动力学参数。如温度如温度如流速如流速第66页,此课件共79页哦(2)分离度的确定分离度的确定 分离度的确定,应根据样品的复杂程度、分离的难易程度、误差要求分离度的确定,应根据样品的复杂程度、分离的难易程度、误差要求等作出选择。对一个分离来说,并不是分离度越高越好,换句话:够用、等作出选择。对一个分
13、离来说,并不是分离度越高越好,换句话:够用、且误差符合要求即可。且误差符合要求即可。分离度较低,但可用逢高定量,误差符合要求。分离度较低,但可用逢高定量,误差符合要求。分离度适中,有误差,但是误差分离度适中,有误差,但是误差5%。第67页,此课件共79页哦(3)流动相线速度的选择流动相线速度的选择 根据根据Van deemter方程式方程式有一个最佳流速,也就是有一个最佳流速,也就是 H 值最小时的流值最小时的流动相流速。但是由于这个流速一般较小,考虑到分析效率,有时动相流速。但是由于这个流速一般较小,考虑到分析效率,有时会牺牲柱效而提高流速。会牺牲柱效而提高流速。(4)色谱柱温度的选择(主要
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