药物定量分析与分析方法验证 (2)精选PPT.ppt

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1、关于药物定量分析与分关于药物定量分析与分析方法验证析方法验证(2)第1页，讲稿共113张，创作于星期三基本要求 一、掌握体外样品分析前处理方法一、掌握体外样品分析前处理方法 二、掌握体内样品分析前处理方法二、掌握体内样品分析前处理方法 三、了解定量分析样品的前处理方法的进展三、了解定量分析样品的前处理方法的进展 及在药物分析中的应用及在药物分析中的应用第2页，讲稿共113张，创作于星期三 第一节 概述为什么要对定量分析的样品进行前处理？为什么要对定量分析的样品进行前处理？常规药物的主药，辅料常规药物的主药，辅料常规药物的主药，辅料常规药物的主药，辅料新剂型药物的脂质体结构，微球骨架新剂型药物的

2、脂质体结构，微球骨架新剂型药物的脂质体结构，微球骨架新剂型药物的脂质体结构，微球骨架中药制剂的复杂组成中药制剂的复杂组成中药制剂的复杂组成中药制剂的复杂组成生物药物浓度低，含有蛋白质等内源性物质生物药物浓度低，含有蛋白质等内源性物质生物药物浓度低，含有蛋白质等内源性物质生物药物浓度低，含有蛋白质等内源性物质减少干扰，提高灵敏度，专属性，准确度减少干扰，提高灵敏度，专属性，准确度减少干扰，提高灵敏度，专属性，准确度减少干扰，提高灵敏度，专属性，准确度第3页，讲稿共113张，创作于星期三 第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法 一、概述一、概述 1.1.不同结构的样品不同结

3、构的样品 卤素与芳环结合卤素与芳环结合 含卤素有机药物含卤素有机药物 R-X（F，Cl,Br,I）卤素与脂肪链碳原子结合卤素与脂肪链碳原子结合 含金属有机药物含金属有机药物 R-O-Me（有机酸或酚有机酸或酚 含金属有机药物含金属有机药物 金属盐；结合不牢固）金属盐；结合不牢固）有机金属药物有机金属药物 R-Me（结合牢固）结合牢固）第4页，讲稿共113张，创作于星期三2.2.常用的处理方法常用的处理方法 不经有机破坏的分析方法不经有机破坏的分析方法 经有机破坏的分析方法经有机破坏的分析方法第5页，讲稿共113张，创作于星期三 含卤素有机药物系指药物分子结构含卤素有机药物系指药物分子结构中所含

4、卤素直接与芳环或脂肪链相连者，中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐。酸盐。结构特点：结构特点：CX第6页，讲稿共113张，创作于星期三（一）卤原子的活泼性（一）卤原子的活泼性1.1.卤原子与碳原子直接相连，卤原子卤原子与碳原子直接相连，卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系很大关系第7页，讲稿共113张，创作于星期三（1）乙烯型卤和芳卤）乙烯型卤和芳卤 不活泼不活泼第8页，讲稿共113张，创作于星期三（2）烯丙型卤和苄卤）烯丙型卤和苄卤 活泼活泼（3）卤代烷型）卤代烷型 介于两者

5、之间介于两者之间第9页，讲稿共113张，创作于星期三2.分子中所含卤原子的个数分子中所含卤原子的个数 分子中所含卤原子的个数越多，分子中所含卤原子的个数越多，活泼性越强，特别是同一碳上含多个活泼性越强，特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，活泼性增强更加明显。活泼性增强更加明显。第10页，讲稿共113张，创作于星期三二、不经有机破坏的分析方法二、不经有机破坏的分析方法（一）直接测定法（一）直接测定法（一）直接测定法（一）直接测定法例如葡萄糖酸锌在水中溶解，直接释放锌离子。例如葡萄糖酸锌在水中溶解，直接释放锌离子。例如葡萄糖酸锌在水中溶解，直接释

6、放锌离子。例如葡萄糖酸锌在水中溶解，直接释放锌离子。例如：富马酸亚铁例如：富马酸亚铁例如：富马酸亚铁例如：富马酸亚铁 不溶于水，溶于热稀矿酸，释放亚铁离子，采用铈量法不溶于水，溶于热稀矿酸，释放亚铁离子，采用铈量法不溶于水，溶于热稀矿酸，释放亚铁离子，采用铈量法不溶于水，溶于热稀矿酸，释放亚铁离子，采用铈量法 ，邻二氮菲作指示剂邻二氮菲作指示剂邻二氮菲作指示剂邻二氮菲作指示剂 （红色（红色（红色（红色-蓝色）蓝色）蓝色）蓝色）第11页，讲稿共113张，创作于星期三 （二）经水解后测定法（二）经水解后测定法 1.用碱水解后测定法用碱水解后测定法 例如：三氯叔丁醇的含量测定例如：三氯叔丁醇的含量测

7、定 CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH (CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2O NaCl +AgNO3 AgCl +NaNO3 AgNO3 +NH4SCN AgSCN +NH4NO3 第12页，讲稿共113张，创作于星期三 原原理理 三三氯氯叔叔丁丁醇醇在在氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液中中加加热热回回流流水水解解，氯氯元元素素全全部部转转变变成成氯氯化化钠钠，然然后后用用剩剩余余滴滴定定法法，即即于于水水解解液液中中加加硝硝酸酸酸酸化化，再再加加入入定定量量过过量量的的硝硝酸酸银银滴滴定定液液，使使Cl-生生成成AgCl沉沉淀淀，过过量量的的硝硝酸酸银银，以以Fe3+为为指指

8、示示剂剂，用用硫硫氰氰酸酸铵液回滴定。铵液回滴定。例例:三氯叔丁醇的测定三氯叔丁醇的测定 ChP（2000）第13页，讲稿共113张，创作于星期三 （二）经水解后测定法（二）经水解后测定法 2.用酸水解后测定法用酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定例如：硬脂酸镁的含量测定 Mg(C17H35COO)2 +H2SO4 MgSO4 +2C17H35COOH H2SO4 +2NaOH Na2SO4 +2H2O 第14页，讲稿共113张，创作于星期三例例 硬脂酸镁的测定硬脂酸镁的测定 ChP（2000）取本品约取本品约0.1g，精密称定，精密加硫酸滴定液，精密称定，精密加硫酸滴定液(0.05mol

9、/L)50ml，煮沸至油滴澄清，继续加热，煮沸至油滴澄清，继续加热10min，放冷至室温，加甲基橙指示液，放冷至室温，加甲基橙指示液12滴，用氢滴，用氢氧化钠滴定液氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硫酸滴定液硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于相当于2.016mg的的MgO。第15页，讲稿共113张，创作于星期三1.碱性还原后测定碱性还原后测定 卤素结合于芳环上时卤素结合于芳环上时,由于分子中碘的结合较牢固由于分子中碘的结合较牢固,需在碱性条件下需在碱性条件下加还原剂（如锌粉）加热回流，使结合的卤素转变为无机的卤素离加还原剂（如锌粉）加热回流，使结合的卤素转变为无机的卤素

10、离子，然后采用银量法（子，然后采用银量法（Fajans法）测定。法）测定。（三（三）经氧化还原后测定法经氧化还原后测定法 本法适用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个本法适用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个碘原子的含卤素有机药物。碘原子的含卤素有机药物。第16页，讲稿共113张，创作于星期三例例 泛影酸的测定泛影酸的测定 ChP(2000)取本品约取本品约0.4g，精密称定，精密称定，加氢氧化钠溶液加氢氧化钠溶液30ml与锌粉与锌粉1.0g，加热回流，加热回流30min，放冷，冷凝管用放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水

11、洗涤3次，每次次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸，洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示与曙红钠指示液液5滴，用硝酸银滴定液滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每滴定。每1ml硝硝酸银滴定液酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于20.46mg的的C11H9 I 3N2O4。第17页，讲稿共113张，创作于星期三 USP(24)、BP（1998）ChP(2000)收收载载的的胆胆影影酸酸、碘碘番番酸酸、胆胆影影葡葡胺胺、泛泛影影葡葡胺胺、碘碘他他拉拉酸酸等等均均采采用同法测定。用同法测定。第18页，讲稿共113张，创作于星期三（三（三）经氧化还原后测定经氧化还原后测定 2

12、.酸性还原后酸性还原后测定测定 例如：碘番酸的含量测定例如：碘番酸的含量测定 醋酸酸性环境下，醋酸酸性环境下，Zn还原后银量法还原后银量法 第19页，讲稿共113张，创作于星期三有机破坏有机破坏n n金属原子，卤素与碳原子结合牢固者，用上述方法很难将有机结合的金属原子或者卤素转化为无机的金属化合物及卤素化合物，必须采用有机破坏的方法将药物分子破坏，将有机结合状态的金属，卤素等转变为可测定的无机化合物，方可选用合适的分析方法进行测定。第20页，讲稿共113张，创作于星期三 三、经有机破坏的分析方法三、经有机破坏的分析方法 HNOHNO3 3-HClO-HClO4 4法法(一一)湿法破坏湿法破坏

13、HNOHNO3 3-H-H2 2SOSO4 4法法 H H2 2SOSO4 4-硫酸盐法硫酸盐法 HNOHNO3 3-H-H2 2SOSO4 4-HClO-HClO4 4法；法；H H2 2SOSO4 4-H-H2 2O O2 2；H H2 2SOSO4 4-KMnO-KMnO4 4(二二)干法破坏干法破坏 高温炽灼法高温炽灼法 氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法 加加NaNa2 2COCO3 3或或MgOMgO以助灰化；温度控制在以助灰化；温度控制在420420 第21页，讲稿共113张，创作于星期三n n硫酸硫酸-硫酸盐法：常用于含砷或锑有机药物。硫酸钠硫酸盐法：常用于含砷或锑有机药物。硫酸钠为含水化合

14、物，不利于有机破坏，采用硫酸钾。加为含水化合物，不利于有机破坏，采用硫酸钾。加入硫酸盐，提高硫酸沸点，破坏完全，防止分解入硫酸盐，提高硫酸沸点，破坏完全，防止分解。破坏得到的无机金属离子多为低价态！破坏得到的无机金属离子多为低价态！破坏得到的无机金属离子多为低价态！破坏得到的无机金属离子多为低价态！n n仪器：凯式烧瓶n n取样：10gn n生物样品：10-15mln n尿样：50ml第22页，讲稿共113张，创作于星期三(二二)干法破坏干法破坏 适用于湿法不易破坏完全的有机适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。不适用于含易挥发性金有

15、机药物。不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏属（如汞、砷等）有机药物的破坏第23页，讲稿共113张，创作于星期三注意事项：注意事项：（1）加热或灼烧时，应控制温度在）加热或灼烧时，应控制温度在420以下以下（2）一定要灰化完全）一定要灰化完全（3）经本法破坏后，所得灰分往往不易）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但不要轻易弃去溶解，但不要轻易弃去第24页，讲稿共113张，创作于星期三(三三)氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法 （1）原理）原理 氧瓶燃烧法：氧瓶燃烧法：将有机药物放入将有机药物放入充满氧气充满氧气的的密闭密闭燃烧瓶中进行燃烧瓶中进行燃烧燃烧，并将燃烧所产生的欲，并将燃烧所产生的

16、欲测物质测物质吸收吸收于适当的吸收液中，然后根据欲于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或含量测定。别、检查或含量测定。第25页，讲稿共113张，创作于星期三 适用于含卤素、硫、氮、硒等有机适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析药物的分析 本法特点是简便、快速、破坏完全，本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析尤其适用于微量样品的分析第26页，讲稿共113张，创作于星期三 （2）仪器与材料仪器与材料 仪器装置仪器装置 燃烧瓶为燃烧瓶为500、1000或或2000ml无色、磨口、厚壁、无色、磨口、厚壁、硬

17、质玻璃锥型瓶；瓶塞硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空空心，底部熔封铂丝一根，下心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状端呈螺旋状或网状第27页，讲稿共113张，创作于星期三称样用材料及称样称样用材料及称样 A.固体样品固体样品 无灰滤纸无灰滤纸 B.液体样品液体样品 纸袋纸袋 C.软膏类样品：将适量样品置不含被软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹无灰滤纸包裹第28页，讲稿共113张，创作于星期三第29页，讲稿共113张，创作于星期三吸收液吸收液 A.作用：吸收液的作用是将样品经作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤

18、素、硫、燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态便于测定的价态氧气氧气第30页，讲稿共113张，创作于星期三B.吸收液的选择吸收液的选择氟氟 水水 氯氯 NaOH溶液溶液溴溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液碘碘 NaOH硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液硫硫 NaOH或或H2O2 硒硒 硝酸溶液硝酸溶液第31页，讲稿共113张，创作于星期三（3）操作方法）操作方法燃烧瓶燃烧前的准备燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，

19、小心急速地通入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。，立即用表面皿覆盖瓶口。样品的准备样品的准备 取样品适量，精密称定后按规定方法包取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。第32页，讲稿共113张，创作于星期三样品的燃烧样品的燃烧 点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置的烟雾

20、完全吸入吸收液中，放置15min，用水，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。法进行鉴别、检查或含量测定。第33页，讲稿共113张，创作于星期三根根据据被被燃燃烧烧分分解解的的样样品品量量选选用用适适宜宜大大小的燃烧瓶。小的燃烧瓶。（4）注意事项注意事项 ChP（2000）规规定定的的燃燃烧烧瓶瓶体体积积为为500、1000或或2000ml三三种种，采采用用常常量量或或半微量分析半微量分析第34页，讲稿共113张，创作于星期三 待分解样品量待

21、分解样品量 燃烧瓶的体积燃烧瓶的体积 35mg（微量分析）（微量分析）150250ml 2030mg（半微量分析）（半微量分析）300500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多或更多 2000ml或特殊结或特殊结构的燃烧瓶构的燃烧瓶第35页，讲稿共113张，创作于星期三 正正确确选选用用燃燃烧烧瓶瓶的的目目的的在在于于：样样品品能能在在足足够够的的氧氧气气中中燃燃烧烧分分解解完完全全；有有利利于于将将燃燃烧烧分分解解产产物物较较快快地地吸吸收收到到吸收液中；防止爆炸的可能性。吸收液中；防止爆炸的可能性。第36页，讲稿共113张，创作于星期三测定含氟有机药物时，用石英制测定含氟

22、有机药物时，用石英制燃烧瓶燃烧瓶铂丝燃烧时起催化作用铂丝燃烧时起催化作用应同时做空白试验应同时做空白试验燃烧时要注意防爆燃烧时要注意防爆燃烧要完全燃烧要完全燃烧产生的烟雾完全被吸收燃烧产生的烟雾完全被吸收第37页，讲稿共113张，创作于星期三例例 碘苯酯的含量测定碘苯酯的含量测定 ChP（2000）原原理理 碘碘苯苯酯酯系系有有机机碘碘化化物物，用用氧氧瓶瓶燃燃烧烧分分解解，转转变变为为碘碘化化物物，继继而而氧氧化化为为游游离离的的碘碘，并并被被定定量量地地吸吸收收于于吸吸收收液液中中，和和氢氢氧氧化化钠钠反反应应，生生成成碘碘化化物物与与碘碘酸酸盐盐，加加入入溴溴-醋醋酸酸溶溶液液，使使全全

23、部部转转变变为为碘碘酸酸盐盐，过过量量的的溴溴以以甲甲酸酸及及通通空空气气去去除除。加加入入碘碘化化钾钾，使使与与碘碘酸酸盐盐反反应应析析出出游游离离碘碘，用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠液液滴滴定定，碘碘与与淀淀粉粉结结合合所所显显的的蓝蓝色色消消失失即即为终点为终点。（5）应用）应用第38页，讲稿共113张，创作于星期三应用示例：碘苯酯的测定应用示例：碘苯酯的测定第39页，讲稿共113张，创作于星期三第二节 定量分析方法特点 一、容量分析法一、容量分析法 （一）容量分析法的（一）容量分析法的特点特点 操作简单、快速；操作简单、快速；比较准确（比较准确（RSDRSD0.2%0.2%）；）；仪器普通易

24、得。仪器普通易得。第40页，讲稿共113张，创作于星期三（二）容量分析法的（二）容量分析法的计算计算问题问题 1.1.滴定度滴定度（T T）的概念的概念 每每1 1mlml规定浓度（规定浓度（mol/Lmol/L）的滴定液所相当的被测物质的量）的滴定液所相当的被测物质的量(mg)mg)。2.2.滴定度的计算滴定度的计算 aA aA+bB cC bB cC+dD dD T T=m ma/ba/bM M 3.3.百分含量的计算百分含量的计算 （1 1）直接滴定法）直接滴定法 D%=D%=V V F F T/WT/W 100%100%F F=实际标定的浓度实际标定的浓度/规定的浓度规定的浓度 （2

25、2）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）间接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）D%=D%=（V VO O V VB B)F F T T/W W 100%100%第41页，讲稿共113张，创作于星期三 二、光谱分析法二、光谱分析法 （一）紫外（一）紫外-可见分光光度法（可见分光光度法（200200nmnm760nm)760nm)灵敏度高，可达灵敏度高，可达10-4g/ml 10-7g/ml 1.特点特点 准确度高，准确度高，SRD（%）为为2%5%5%仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用仪器价格低廉，操作简单，易普及，应用 范围广。范围广。2.2.朗伯朗伯-比耳定律比耳定律 A=ECL A=ECL E

26、 E1%1%1 1cmcm 的概念的概念第42页，讲稿共113张，创作于星期三 3.3.仪器校正和检定仪器校正和检定 波长校正用汞灯中较强谱线波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73,237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07 313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nmnm与与576.96576.96nmnm 或用仪器中氘灯的或用仪器中氘灯的486.02486.02nmnm与与656.10656.10nmnm进行校正。

27、进行校正。吸收度的检定：用吸收度的检定：用K K2 2CrOCrO7 7(60mg)+0.005mol/LH(60mg)+0.005mol/LH2 2SOSO4 4液至液至10001000mlml 波长波长(nm)235(nm)235(最小最小)257()257(最大最大)313()313(最小最小)350()350(最大最大)E E1%1%1 1cmcm 124.5 144.0 48.62 106.6 124.5 144.0 48.62 106.6 杂散光检查：杂散光检查：试剂试剂 浓度浓度(g/ml)g/ml)测定波长测定波长 透光率透光率(%)(%)NaI 1.00 220nm NaI

28、1.00 220nm 0.8 0.8 NaNO NaNO2 2 5.00 340nm 5.00 340nm 0.8 0.8第43页，讲稿共113张，创作于星期三 4.4.对溶剂的要求对溶剂的要求:使用范围不得小于截止使用波长。使用范围不得小于截止使用波长。220 220240nm 241240nm 241250nm 251250nm 251300nm 300nm300nm 300nm以上以上 溶剂溶剂+吸收池吸收池 A 0.40 0.40 0.20 0.20 0.10 0.10 0.050.05 5.5.测定方法测定方法 要求供试品溶液的要求供试品溶液的A A应在应在0.3 0.3 0.70.

29、7 对照品比较法：对照品比较法：C Cx x=(=(A Ax x/A Ar r)C Cr r;含量含量%=%=C Cx xD/WD/W100%100%常用方法常用方法 吸收系数法：吸收系数法：含量含量%=(%=(E E1%1%1 1cmcm )x x/(/(E E1%1%1 1cmcm )r r 100%100%计算分光光度法计算分光光度法第44页，讲稿共113张，创作于星期三 （二）荧光分光光度法（二）荧光分光光度法 灵敏度高灵敏度高，可达，可达10-10g/ml 10-12g/ml 在在低浓度低浓度进行测定，防止进行测定，防止F与与C不成正比及自熄灭作用不成正比及自熄灭作用 1.特点特点

30、用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减用基准物溶液校正仪器灵敏度，防止样品液荧光衰减 灵敏度高，但灵敏度高，但干扰因素多干扰因素多。制备荧光制备荧光衍生物衍生物，可提高其灵敏度和选择性。，可提高其灵敏度和选择性。用样品用样品量少量少，操作，操作简单简单，方法，方法快速快速，应用，应用范围范围较较广广。第45页，讲稿共113张，创作于星期三2.荧光分析仪荧光分析仪 有二个单色光器有二个单色光器激发单色光器与发射单色光激发单色光器与发射单色光 器；且激发光源、样品池和检测器成直角。器；且激发光源、样品池和检测器成直角。3.含量测定含量测定 常用的方法对照品比较法常用的方法对照品比较法:Ci

31、=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)C Cr r Ch.P收载收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。第46页，讲稿共113张，创作于星期三 三、色谱分析法三、色谱分析法 按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色谱 按分离方法分为：按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；柱色谱；GC；HPLC。（一）（一）HPLC法法 1.对对HPLC仪器一般要求仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱的理论板数：色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)2 2.系统性试验系统性试验

32、分离度：分离度：R=2（tR1 tR2)/(W1+W2);要大于要大于1.5 拖尾因子：拖尾因子：T=W0.05h/2d1 应在应在0.9 1.05 第47页，讲稿共113张，创作于星期三 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3.测定方法测定方法 标准曲线法标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法外标一点法 应用示例：应用示例：RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法法测定盐酸黄酮哌酯片含量，用标准曲线法 如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法如头孢拉丁；头孢羟氨苄；头孢唑啉钠用外标一点法第48

33、页，讲稿共113张，创作于星期三 （二）（二）GC法法 1.对对GC仪器一般要求仪器一般要求 载气为载气为氮气氮气；色谱柱为填充或毛细管柱；色谱柱为填充或毛细管柱 色谱柱的理论板数：色谱柱的理论板数：n=5.54(tR/Wh/2)2 2.系统性试验系统性试验 分离度：分离度：R=2（tR1 tR2)/(W1+W2);要大于要大于1.5 拖尾因子：拖尾因子：T=W0.05h/2d1 应在应在0.9 1.05 第49页，讲稿共113张，创作于星期三 内标法加校正因子测定供试品中主成分含量内标法加校正因子测定供试品中主成分含量 3.测定方法测定方法 标准曲线法标准曲线法 外标法测定供试品中主成分含量

34、外标法测定供试品中主成分含量 外标一点法外标一点法 应用示例：应用示例：Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注及其片剂、注 射剂、甲酚皂溶液等均采用射剂、甲酚皂溶液等均采用GC法中的内标法加校正法中的内标法加校正 因子测定含量。因子测定含量。第50页，讲稿共113张，创作于星期三 第三节第三节 药品质量标准分析方法验证药品质量标准分析方法验证 一、准确度一、准确度 是指用该方法是指用该方法测定结果与真实值接近的程度测定结果与真实值接近的程度，用，用回收率回收率表示表示（一）含量测定方法的准确度（一）含量测定方法的准确度 1.原料药原料药 可用已知纯度对照

35、品或样品进行测定；或与已建准确可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准确 度的另一方法测定的结果进行比较。度的另一方法测定的结果进行比较。2.制剂制剂 要考察要考察辅料对回收率的影响辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原。采用在空白辅料中加入原 料对照品的方法作回收率试验，然后计算料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。具体做法：测定高、中、低三个浓度，具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3,共共9个数据来评价个数据来评价 回收率的回收率的RSD2%；用用UV和和HPLC发时，一般回发时，一般回 收率可达收率可达98%102%；容量法可达；容量法可达99.7%100.3%第51页

36、，讲稿共113张，创作于星期三（二）数据要求（二）数据要求 回收率回收率%=（测定平均值（测定平均值 空白值）空白值）/加入量加入量100%要求制备要求制备高高、中中、低低三浓度的样品，各测定三浓度的样品，各测定3次次。应。应报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值报告已知加入量的回收率，或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。之差及其可信限。第52页，讲稿共113张，创作于星期三 二、精密度二、精密度 是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果是指在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测定结果 之间的之间的接近程度接近程度。（一）精密度表示方法（一）精密度表示方法 1

37、.偏差偏差(deviation,d)d=测得值测得值-平均值平均值=Xi-X 2.标准偏差标准偏差（standard deviation,SD或或S）S=(Xi X)2/(n-1)1/2 3.相对标准差相对标准差(relative standard deviation,RSD)也称变异系数也称变异系数 (coefficient of variation,CV)RSD=标准偏差标准偏差/平均值平均值100%=S/X 100%第53页，讲稿共113张，创作于星期三（二）重复性、中间精密度及重现性（二）重复性、中间精密度及重现性 1.重复性重复性 在相同条件下在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果

38、的精密度由一个分析人员测定所得结果的精密度.2.中间精密度中间精密度 在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不 同设备测定结果的精密度。同设备测定结果的精密度。3.重现性重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。第54页，讲稿共113张，创作于星期三（三）数据要求（三）数据要求 应报告应报告S或或SD、RSD和可信限。用统计学的可信性分和可信限。用统计学的可信性分析析(t或或f）。）。第55页，讲稿共113张，创作于星期三 三、专属性三、专属性 是指在其他成分是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料

39、等如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下，采用可能存在下，采用的方法能的方法能准确测定出被测物的特性准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应考察其专属性。（一）鉴别反应（一）鉴别反应 应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含被测组分的样品均应呈现负反应。组分的样品均应呈现负反应。第56页，讲稿共113张，创作于星期三 （二）含量测定和杂质测定（二）含量测定和杂质测定 色色谱谱法法和和其其他他分分离离法法，应应附附代代表表性性的图谱，以说明专属性。的图谱，以说明专属性。图图中中

40、应应注注明明各各组组分分的的位位置置，色色谱谱法法中中分分离离度度应应符符合合要要求求。在在能能获获得得杂杂质质的的情情况况下下，可可加加到到试试样样中中，考考察察对对结结果果的的干干扰扰。在在杂杂质质和和降降解解物物不不能能获获得得的的情情况况下下，可可用用以以验验证证方方法法和和药药典典方方法法进进行行对对照照；也也可可用用对对试试样加速破坏的方法，比较两种方法。样加速破坏的方法，比较两种方法。第57页，讲稿共113张，创作于星期三 四、检测限（四、检测限（limit of detection,LOD)是指试样中被测物能被检测出的是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量最低浓度或量，是限度

41、检验，是限度检验 指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。指标。它无需测定，只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。（一）（一）常用的方法常用的方法 1.1.非仪器分析目视法非仪器分析目视法 用已知浓度被测物，试验出能被可靠地用已知浓度被测物，试验出能被可靠地 检测出的最低浓度或量。检测出的最低浓度或量。2.2.仪器分析方法仪器分析方法 UVUV法：法：LODLOD=f f.3.3S S空空=C C样样/A A样样 3 3S S空空 FluFlu法：法：LODLOD=f f.3.3S S空空=C C样样/(/(F F样样-F F空空)3 3S S空空 GCGC和和HPLCHP

42、LC法：法：LODLOD=S S/N N=2=2或或3 3 第58页，讲稿共113张，创作于星期三（二）数据要求（二）数据要求 应附测试图，说明测试过程和检测限结果。应附测试图，说明测试过程和检测限结果。第59页，讲稿共113张，创作于星期三 五、定量限（五、定量限（limit of quantitation,LOQ)是指样品中是指样品中被测物能被被测物能被定量测定定量测定的最低量的最低量，其测定结果应，其测定结果应 具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时，要求 LOQLOQ.常用信噪比法确定定量限，一般常用信噪比法确定定量限

43、，一般以以S/N=10S/N=10时时相应的浓度进行相应的浓度进行 测定。测定。第60页，讲稿共113张，创作于星期三 六、线性六、线性 是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接是指在设定的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接 呈呈正比正比关系的关系的程度程度。UVUV法：首先制备一个标准系列，浓度点法：首先制备一个标准系列，浓度点n=5;A=0.3n=5;A=0.30.70.7 建立回归方程建立回归方程C=aA+b;C=aA+b;r r 0.9999 0.9999。HPLC HPLC法：制备一个标准系列，浓度点法：制备一个标准系列，浓度点n=5 n=5 7;7;以以C C对对h

44、h或或A A或与或与 内标物的峰面积之比，建立回归方程内标物的峰面积之比，建立回归方程r r 0.9999 0.9999。第61页，讲稿共113张，创作于星期三七、范围七、范围 是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法是指达到一定精密度、准确度和线性、测试方法适用的高低限度或量的区间适用的高低限度或量的区间。原料药和制剂含量测定原料药和制剂含量测定：范围应为测试浓度的：范围应为测试浓度的80%120%。制剂含量均匀度检查制剂含量均匀度检查：范围应为测试浓度的：范围应为测试浓度的70%130%。溶出度或释放度中的溶出量测定溶出度或释放度中的溶出量测定：范围应为限度的：范围应为限度的20%20%

45、。第62页，讲稿共113张，创作于星期三 八、耐用性八、耐用性 是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响的是指在测定条件下有效的变动时，测定结果不受影响的承受承受 程度程度。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、。典型的变动因素有：被测溶液的稳定性、样品提取次数、时间等。时间等。HPLC法变动因素有：流动相组成与法变动因素有：流动相组成与pH，色谱柱，柱温，流速等。色谱柱，柱温，流速等。GC法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检法变动因素有：色谱柱，固定相，担体、柱温、进样口和检 测器温度等。测器温度等。第63页，讲稿共113张，创作于星期三 分析方法效能指标的

46、具体应用分析方法效能指标的具体应用：1.用于鉴别试验的方法：只要求专属性、耐用性，其余不要求。用于鉴别试验的方法：只要求专属性、耐用性，其余不要求。2.用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法：用于原料药中杂质测定和制剂中降解产物测定的方法：用于定量：除了检测限不要求外，其余七项指标均要求。用于定量：除了检测限不要求外，其余七项指标均要求。限度检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其余不要求。限度检查：除检测限、专属性、耐用性要求外，其余不要求。3.原料、制剂及溶出度测定：不要求检测限和定量限，其余均要求。原料、制剂及溶出度测定：不要求检测限和定量限，其余均要求。准确度、精密度、专属性、

47、检测限准确度、精密度、专属性、检测限定量限、线性、范围、耐用性定量限、线性、范围、耐用性第64页，讲稿共113张，创作于星期三练习与思考 A A型题型题 1 1 药品的鉴别是证明药品的鉴别是证明 A A未知药物的真伪未知药物的真伪 B B已知药物的真伪已知药物的真伪 C C已知药物的疗效已知药物的疗效 D D药物的纯度药物的纯度 E E药物的稳定性药物的稳定性2 2相对标准差表示的应是相对标准差表示的应是A A准确度准确度 B B回收率回收率 C C精密度精密度 D D纯净度纯净度 E E限度限度第65页，讲稿共113张，创作于星期三3 3用移液管量取的用移液管量取的2525mlml溶液，应记

48、成溶液，应记成A A25ml B25ml B25.0ml C25.0ml C25.00ml 25.00ml D D25.000ml E25.000ml E251ml251ml4 4以下三个数字以下三个数字0.53620.5362、0.00140.0014、0.250.25之和之和应为应为A A0.79 B0.79 B0.788 C0.788 C0.787 0.787 D D0.7876 E0.7876 E0.80.8第66页，讲稿共113张，创作于星期三5 5表示两变量指标表示两变量指标A A与与C C之间线性相关程度常用之间线性相关程度常用A A相相关关规规律律 B B比比例例常常数数 C

49、C相相关关常常数数 D D相关系数相关系数 E E精密度精密度6 6减小偶然误差的方法是减小偶然误差的方法是A A做空白试验做空白试验 B B做对照实验做对照实验 C C做回收试验做回收试验 D D增加平行测定次数增加平行测定次数 E E选用多种测定方法选用多种测定方法第67页，讲稿共113张，创作于星期三 B B型题型题 1 14 4A A1.23 1.23 B B1.22 1.22 C C2.54 2.54 D D2.53 E2.53 E2.512.511 11.22521.22522 22.53512.53513 32.53482.53484 42.50682.5068ACDE第68页，

50、讲稿共113张，创作于星期三 5 58 8A A空白试验空白试验 B B对照试验对照试验 C C回收试验回收试验 D D鉴别试验鉴别试验 E E检测试验检测试验5 5以同量的溶剂替代供试品同法进行测定试验以同量的溶剂替代供试品同法进行测定试验6 6在在供供试试液液中中加加入入已已知知量量的的标标准准物物或或已已知知量量的的被被测测物物后后，同同法进行测定试验法进行测定试验7 7用已知量的纯物质作为试样，同法进行测定试验用已知量的纯物质作为试样，同法进行测定试验8 8取取少少许许水水杨杨酸酸，加加水水溶溶解解，加加三三氯氯化化铁铁试试液液，显显紫紫堇色堇色ACDB第69页，讲稿共113张，创作于