微生物食源性疾病第二节讲稿.ppt

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1、微生物食源性疾病第二节第一页，讲稿共二十七页哦1.金黄色葡萄球菌的简单介绍 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球菌。无芽孢，无鞭毛，不能运动，呈葡萄状排列。兼性厌氧菌，对营养要求不高，在普通琼脂培养基上培养24h，菌落圆形、边缘整齐、光滑湿润不透明，颜色呈金黄色。最适生长温度为3537，最适pH7.4。此菌对外界的抵抗力是不产芽孢细菌中最强的一种，加热8030min至1h才能杀死。一、形态结构一、形态结构第二页，讲稿共二十七页哦2.2.形态结构形态结构 1.葡萄球菌呈球形或稍呈椭圆形，直径0.41.2分裂面不规则，菌体常常无规则堆积一起，呈葡萄串状。2.葡

2、萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。3.革兰氏染色为阳性。其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。第三页，讲稿共二十七页哦1.营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧。2838均能生长，致病菌最适温度为37，PH为4.59.8，最适为7.4。2.在肉汤培养基中24小时后呈均匀混浊生长，在琼脂平板上形成圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，不透明的菌落。二、培养与生理生化特性二、培养与生理生化特性第四页，讲稿共二十七页哦 3.不同种的菌标产生不同的色素，如金黄色、白色、柠檬色。色素为

3、脂溶性。葡萄球菌在血琼脂平板上形成的菌落较大，有的菌株菌落周围形成明显的完全透明溶血环（溶血），也有不发生溶血者。凡溶血性菌株大多具有致病性。第五页，讲稿共二十七页哦 3.生化特性 本属菌触酶试验阳性，对糖的发酵反应不规则，多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气。多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。第六页，讲稿共二十七页哦三、抗原构造三、抗原构造 葡萄球菌抗原构造复杂，已发现的在30中以上，但是其目前了解化学组成及生物活性的只有以下几种：1.葡萄球菌A蛋白（）2.多糖抗原 3.荚膜抗原第七页，讲稿共二十七页哦1.SPA是大多数金色葡萄球菌细胞表面的一种蛋白，为完全

4、抗原SPA可与人类和多种哺乳动物IgG的Fc段结合。SPA与IgG结合后的复合物具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物学活性。此外，SPA与IgG Fc结合后IgG（除了IgG3）的Fab段仍能特异性结合抗原，可用于协同凝集试验，检测多种细菌抗原或抗原抗体复合物。SPA也是一种B细胞丝裂原，可使多克隆B细胞活化和增殖。第八页，讲稿共二十七页哦.多糖抗原：为半抗原，具有群特异性，存在于细胞壁，借此可以分群，A群多糖抗原体化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡胺核糖醇残基。B群化学组成是磷壁酸中的N-乙酰区糖胺甘油残基。.荚膜抗原：其几乎所有金黄色葡萄球菌菌株的表面有荚膜多糖抗原的存在

5、。表皮葡萄球菌仅个别是菌株有此抗原。第九页，讲稿共二十七页哦完全抗原和半抗原的区别1.具有免疫原性与免疫反应性的物质，称为完全抗原(complete antigen)，如大多数蛋白质、细菌、病毒、细菌外毒素、动物血清等。既能刺激机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能与其在体内、体外发生特异性结合反应。2.半抗原：其能与对应抗体结合出现抗原-抗体反应、又不能单独激发人或动物体产生抗体的抗原。它只有免疫反应性，不具免疫原性，又称不完全抗原。第十页，讲稿共二十七页哦 四、金黄色葡萄球菌引起的肠胃炎及其预防四、金黄色葡萄球菌引起的肠胃炎及其预防（一）金黄色葡萄球菌的毒素 金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球

6、菌一种重要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒素而导致的。第十一页，讲稿共二十七页哦 肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链组成。分子量约为3000左右。易溶于水，难溶于有机溶剂。近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在实验室条件下可产生肠毒素，并且1个菌株能产生两种或两种以上的肠毒素。第十二页，讲稿共二十七页哦（二）金黄色葡萄球菌肠炎 金黄色葡萄球菌肠炎是金黄色葡萄球菌引起的，多因原发疾病长期用抗生素引起肠道菌群失调所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐药的金黄色葡萄球菌株趁机繁殖。金黄色葡萄球菌为侵袭性细菌，能产生毒素，对肠道破坏性大，所以

7、金黄色葡萄球菌肠炎起病急，中毒症状严重，主要表现为呕吐、发热、腹泻。第十三页，讲稿共二十七页哦（1）临床症状 呕吐常在发热前出现，发热很高。轻症大便次数稍多，为黄绿色糊状便；重症大便次数频繁，每日可达数十次，大便呈暗绿色水样便，外观像海水，所以叫海水样便。粘液多，有腥臭味，有时可排出片状伪膜，将伪膜放入生理水，脱落的肠粘膜即漂在水面上，对诊断帮助很大。体液损失多，患儿脱水、电解质紊乱和酸中毒严重，可发生休克。第十四页，讲稿共二十七页哦（2）检测手段 挑选大便粘液部分涂片，在显微镜下检查可见大量脓细胞，如经革兰氏染色，显微镜检查可见成堆的大量革兰氏阳性球菌。大便培养金黄色葡萄球菌生长，即可明确诊

8、断。第十五页，讲稿共二十七页哦（三）引起金黄色葡萄球菌肠毒素中毒的食品1.糕、凉拌切粉、剩大米饭和米酒等2.熟肉类食品污染了致病葡萄球菌，又在20-30C的环境下放置较长时间，极易引起食物中毒3.乳和乳制品以及用乳制作的冷饮4.被葡萄球菌污染的油煎鸡蛋、熏鱼、油浸鱼罐头等含油脂较多的食品第十六页，讲稿共二十七页哦（四）预防措施1.主要对产乳牲畜应严格检疫，对患有乳房炎的奶牛产的乳不能作为食用2.要定期对食品从业人员进行健康检查。3.乳制品，特别是含乳的冷饮食品，必须使用经消毒的优质乳为原料，加工、保藏必须按照卫生操作规程进行，防止再度污染。4.已被金黄色葡萄球菌污染的食品，不能再食用，因一般的

9、烹调温度不足以破坏肠毒素第十七页，讲稿共二十七页哦五、金黄色葡萄球菌的检验五、金黄色葡萄球菌的检验第十八页，讲稿共二十七页哦操作步骤：操作步骤：1.1.増菌増菌2.2.分离培养分离培养3.3.血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验4.4.肠毒素实验肠毒素实验5.5.致病性试验致病性试验（上述试验可初步判定葡萄球菌数目以及是否存在致病性葡萄球菌）第十九页，讲稿共二十七页哦吸取1：10的检样稀释液5ml注入75g/L氯化钠肉汤50ml中，3724h进行増菌培养返回返回第二十页，讲稿共二十七页哦将培养物划线接种于却甫曼氏平板或血琼脂平板上。经37培养2448h后观察。挑取可疑菌落进行革兰氏染色，镜检。返回返回

10、第二十一页，讲稿共二十七页哦玻片法：玻片法：取一块洁净的载玻片，一端滴加1:4新鲜兔(人)血浆，另一端滴加生理盐水，然后以接种环挑取可疑菌落的细菌少许，分别于血浆和生理盐水相混合，若血浆出现颗粒生理盐水浑浊，则凝固菌呈阳性。试管法：试管法：取1:4新鲜兔(人)血浆0.5ml放入小试管中，再加入培养24h的葡萄球菌肉汤培养物0.5ml，振摇均匀放入36水浴锅内每半小时观察一次，观察6小时，呈凝块为阳性。返回返回第二十二页，讲稿共二十七页哦 将分离到的可以菌株，经培养制备成肠毒素进行检验，也可使用待测样品做成1:10、1:100的稀释液后，直接进行动物试验。本实验最适动物为68周龄的幼猫，如有葡萄

11、球菌肠毒素存在，幼猫与15min4h内发生呕吐、寒颤、轻度腹泻，经45h后逐渐恢复正常。返回返回第二十三页，讲稿共二十七页哦 将分离到的葡萄球菌接种于肉汤中，37培养24h，取1.0ml培养液注射于家兔皮下，如有致病性葡萄球菌存在，则可引起局部皮肤溃疡坏死。静脉接种肉汤培养液0.10.5ml，2448h后，如有致病性葡萄球菌存在，解剖后可见浆膜出血，肾脏、心脏及其他脏器出现大小不等的脓肿，切取组织块触片镜检。返回返回第二十四页，讲稿共二十七页哦六、金黄色葡萄球菌肠毒素的快速检验六、金黄色葡萄球菌肠毒素的快速检验（一）主要方法1.动物学试验法动物学试验法2.血清学试验法血清学试验法3.分子生物学

12、试验法分子生物学试验法第二十五页，讲稿共二十七页哦1.动物学试验法动物学试验即用幼猫和猴作为研究对象，喂食肠毒素，然后观察动物可能出现的各种异常的生理或形态变化，这是测定食物中肠毒素较早采用的一种方法。特点：结果判断直观、准确，在某些情况下可采用，但由于试验动物来源因难、灵敏度低、检测结果不够理想等使其应用受到极大的限制。返回第二十六页，讲稿共二十七页哦2.血清学试验法 血清学试验是通过将肠毒素作为抗原和特异性 抗体发生结合性反应，来检验食品中金黄色葡萄球菌肠毒素。在食品卫生检验中主要采用的方法为免疫琼脂扩散法、反向间接血凝试验、放射免疫法和酶吸附法等。3.分子生物学试验法主要包括核酸分子杂交检测法和PCR（聚合酶链反应）返回第二十七页，讲稿共二十七页哦