微生物的实验室培养 (9)讲稿.ppt

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1、关于微生物的关于微生物的实验室培养室培养(9)第一页，讲稿共六十三页哦微生物包括哪五类：微生物包括哪五类：病毒病毒细菌细菌放线菌放线菌真菌真菌原生动物原生动物特点：特点：结构都相当简单结构都相当简单,个体多数十分微小个体多数十分微小.通常要通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素且体内一般不含有叶绿素.不能进行光不能进行光合作用合作用.原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界微生物基础知识微生物基础知识第二页，讲稿共六十三页哦细菌的外形与大小细菌的外形与大小细菌：细菌：单

2、细胞不分枝的原核微生物单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞细菌细胞微小而透明微小而透明，通常用适当染料，通常用适当染料染色染色后后显微镜观察显微镜观察图图1-1 常见的三种细菌典型形态常见的三种细菌典型形态A.球菌球菌 B.杆菌杆菌 C.弧菌弧菌第三页，讲稿共六十三页哦细菌细胞由外向里依次有鞭毛鞭毛鞭毛鞭毛、菌菌（纤）纤）纤）纤）毛毛毛毛、荚膜荚膜荚膜荚膜、细胞细胞细胞细胞壁壁壁壁、细胞膜、细细胞膜、细细胞膜、细细胞膜、细胞质胞质胞质胞质，细胞质中细胞质中细胞质中细胞质中又有液泡、储存性又有液泡、储存性又有液泡、储存性又有液泡、储存性颗粒、核质等颗粒、核质等颗粒、核质等颗粒、核质等。细菌的构造细

3、菌的构造图图图图1-3 1-3 细菌的结构细菌的结构细菌的结构细菌的结构第四页，讲稿共六十三页哦*细胞壁细胞壁n n结构特点：坚韧且有弹性结构特点：坚韧且有弹性结构特点：坚韧且有弹性结构特点：坚韧且有弹性n细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？n 固定细胞外形；固定细胞外形；固定细胞外形；固定细胞外形；w w 保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；保护细胞免受外力的损伤；w w 阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞阻拦大分子物质进人细胞；使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对噬菌体的敏感性。

4、噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。噬菌体的敏感性。伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含毒毒素素第五页，讲稿共六十三页哦 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸例如，有的细菌的芽孢，煮沸3 3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的

5、时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌形成一个细菌.第六页，讲稿共六十三页哦菌落：菌落：n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落结构的子细胞群体，叫做菌落。n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。第七页，讲稿共六十三页哦菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异 第八页，讲稿共六十三页哦放线菌放线菌1 1、结构：、结构：单细胞原核单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）第九页，讲稿共六十三页哦链霉素、土

6、霉素、四环素、链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中微生物中发现了几千种抗生素，其中2/32/3是是由放线菌产生的由放线菌产生的 应用应用:第十页，讲稿共六十三页哦病毒的结构病毒的结构第十一页，讲稿共六十三页哦病毒病毒 第十二页，讲稿共六十三页哦SARS病毒、病毒、禽流感病毒禽流感病毒第十三页，讲稿共六十三页哦朊病毒（蛋白质病毒）朊病毒（蛋白质病毒）第十四页，讲稿共六十三页哦2、病毒的增殖：、病毒的增殖：第十五页，讲稿共六十三页哦真菌真菌第十六页，讲稿共六十三页哦如图是酵母菌电子显微镜如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构下的形态

7、结构酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉第十七页，讲稿共六十三页哦生殖生殖直立菌丝直立菌丝 营养菌丝营养菌丝腐生生活腐生生活孢子生殖孢子生殖第十八页，讲稿共六十三页哦细菌的营养类型细菌的营养类型 n根据细菌所利用的能源和碳源的不同，根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。将细菌分为两大营养类型。n自养菌（自养菌（autotrophautotroph）n异养菌（异养菌（heterotrophheterotroph）n腐生菌腐生菌n寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌第十九页，讲稿共六十三页哦第二十页，讲稿共六十三页哦 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术了解有关培养基的基础知识

8、，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。的操作，进行微生物的培养。一、课题目标：一、课题目标：掌握掌握培养基的制备培养基的制备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平平板划线法板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标：第二十一页，讲稿共六十三页哦一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 培养基（培养液）是培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养专供微生物

9、生长繁殖使用的混合营养液。液。（1 1）按物理状态来分：培养基可分为）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基固体培养基和和液体培养基液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。鉴定菌落等。（2 2）按功能来分，可分为）按功能来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴别培鉴别培养基养基。（3 3）按成分来分，可分为）按成分来分，可分为天然培养基天然培养基和和合成培养合成培养基基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途第二十二页，讲稿共六十三页哦 2.2.不同的微生物往往需要采用不同的不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方培养基配方(参考教材附录内容参考教

10、材附录内容)3.3.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐、等等营养物质，另营养物质，另外还需要满足微生物生长对外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营养物特殊营养物质质,例如例如:生长因子生长因子(即细菌生长必需，而自即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗渗透压透压等等的要求。的要求。第二十三页，讲稿共六十三页哦选择培养基选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌

11、加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基核苷的培养基:分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞第二十四页，讲稿共六十三页哦 根据细胞生存所需物质的种类和数量，根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。用人工方法模拟合成的。

12、合成培养基主要成分是氨基酸、维生合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。物质。优点：优点：标准化生产，组分和含量相对标准化生产，组分和含量相对固定固定;成本低成本低 缺点：缺点：缺少某些成分，不能完全满缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。足体外细胞生长需要。合成培养基合成培养基:第二十五页，讲稿共六十三页哦 天然培养基有血清、血浆、和组织天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限;成分复

13、杂，影响对某成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染易发生支原体污染;天然培养基：天然培养基：第二十六页，讲稿共六十三页哦血清中含有：血清中含有：多种蛋白质（白蛋白、球蛋多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等）白、铁蛋白等）多种金属离子；多种金属离子；激素；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。冷析球蛋白、胶原等。各种生长因子各种生长因子转移蛋白转移蛋白不明成分不明成分 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血

14、清）。和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。第二十七页，讲稿共六十三页哦液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长第二十八页，讲稿共六十三页哦固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔第二十九页，讲稿共六十三页哦半固体培养基：半固体培养基：无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)(是否运动是否运动)第三十页，讲稿共六十三页哦4.4.培养基的用途培养基的用途液体培养基：增菌液体培养基：增菌固体培养基：纯化，增菌固体培养基：纯化，增菌半固体培养基：动力检测，保种半固体培养基：动力检测，保种第三十一页，讲稿共六十三页哦（二）无菌技术（二）无菌技术1.1.

15、无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作中，在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要无论是随后将要学到的学到的倒平板倒平板、平板划线平板划线操作，还是操作，还是平板稀平板稀释涂布法释涂布法，其操作中的每一步都需要做到，其操作中的每一步都需要做到“无菌无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。微生物。第三十二页，讲稿共六十三页哦（）（）消毒定义：消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份致病利用化学或物理方法，杀死大部份致病

16、微生物的过程。区分为微生物的过程。区分为高程度消毒高程度消毒（High-High-level Disinfectionlevel Disinfection）、）、中程度消毒中程度消毒（Intermediate-level DisinfectionIntermediate-level Disinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-level DisinfectionLow-level Disinfection）三）三种方式。种方式。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别 第三十三页，讲稿共六十三页哦（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消

17、灭以化学剂或物理方法消灭所有所有微生微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。最普通也是最重要的技术。第三十四页，讲稿共六十三页哦1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁尔酒精、新洁尔灭

18、等进行皮肤消毒灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法第三十五页，讲稿共六十三页哦1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-160-170 170 下加热下加热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持维持15-30min.15-30min.(2)灭菌的方法：灭菌的方法：第三十六页，讲稿共六十三页哦 最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以杀灭，它可以杀灭所有的生物，包

19、括最耐热的某些微生物的休眠体，同时所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。为了防止。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。空气中的其他微生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣

20、而成，这种器具是而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。专为防止空气中微生物的污染而设计的。第三十七页，讲稿共六十三页哦分类定义方法灭菌法杀灭一切微生物物理法：热力、辐射、微波、等离子体化学法：醛类、烷化剂高效消毒法杀灭一切致病微生物紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等中效消毒法杀灭除芽孢外的致病微生物超声波、碘类、醇类、酚类低效消毒法杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子无菌技术无菌技术第三十八页，讲稿共六十三页哦3.微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配

21、制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存第三十九页，讲稿共六十三页哦1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3

22、 3）实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。第四十页，讲稿共六十三页哦三、实验操作三、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）第四十一页，讲稿共六十三页哦1 1计算计算、称量称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培养基分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉

23、塞而引沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。角烧瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤第四十二页，讲稿共六十三页哦 8 8灭菌灭菌:将将5050mlml培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100100kPakPa、温度为温度为121121，灭菌，灭菌15153030minmin。将将培培养皿养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱

24、内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2 2h h。9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附近倒平左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）板。（倒平板操作见课本）2 2d d后观察平板，无杂菌后观察平板，无杂菌污染才可用来接种污染才可用来接种.10 10无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培养的温室中培养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。第四十三页，讲稿共六十三页哦倒平板技术倒平板技术倒平板技术倒平板技术第四十四页，讲稿共六十三页哦 1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基

25、灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。物污染培养基。第四十五页，讲稿共六十三页哦3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.

26、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间

27、的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第四十六页，讲稿共六十三页哦2 2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到由一个细胞可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就这就是菌落是菌落.微生物的接种技术微生物的

28、接种技术第四十七页，讲稿共六十三页哦第四十八页，讲稿共六十三页哦第四十九页，讲稿共六十三页哦 1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的

29、菌种直接来源于上种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。免细菌污染环境和感染操作者。第五十页，讲稿共六十三页哦 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3

30、.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第五十一页，讲稿共六十三页哦第五十二页，讲稿共六十三页哦第五十三页，讲稿共六十三页哦 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进涂布平板的所有操作都应在火焰

31、附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第求，想一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。精灯火焰周围等等。第五十四页，讲稿共六十三页哦微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养第五十五页，讲稿共六十三页哦微生物的恒温培养微

32、生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养第五十六页，讲稿共六十三页哦菌种的保存菌种的保存菌种的保存菌种的保存 1 1、临时保藏：接、临时保藏：接种到固体斜面培养基，种到固体斜面培养基，菌落长成后置于菌落长成后置于44冰冰箱保存。箱保存。2 2、长期保存：甘、长期保存：甘油冷冻管藏法油冷冻管藏法第五十七页，讲稿共六十三页哦四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌落后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。生长，说明培养基的制备是成功的，否则

33、需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌

34、落的大小会有明显不后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。度与习惯。第五十八页，讲稿共六十三页哦本课题知识小结本课题知识小结:第五十九页，讲稿共六十三页哦【典例解析典例解析】例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无

35、机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于对微生物的具体情况分析。对于A A、B B选项，它的表达是不完整选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C C

36、选项，除水以外的无机物种选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；源；NaHCO3NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则则只能提供无机盐。对于只能提供无机盐。对于DD选项，无机氮源提供能量的情况还是存选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如在的，如NH3NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：答案：D第六十页，讲稿共六十三页哦例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确的是的

37、是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前答案：答案：B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说的是说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；B B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不

38、可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。C C是正确的，因为与发是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。再灭菌就会把所接菌种也杀死。第六十一页，讲稿共六十三页哦编号成分含量粉状硫10g（NH4）2SO40.4gK2HPO44.0gMgSO49.25gFeSO40.5gCaCl20.5gH2O100ml例例3 3右表是某微生物培养右表是某微生物培养基成分，请据此回答：基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养的）右表培养基可培养的微生物类型微生物类型是是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加加入培养基中。入培养基中。如不想浪费此培养基，可如不想浪费此培养基，可再加入再加入 .自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 第六十二页，讲稿共六十三页哦感感谢谢大大家家观观看看第六十三页，讲稿共六十三页哦