组织学技术特殊染色.ppt
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1、关于组织学技术特殊染色现在学习的是第1页,共52页特殊染色用于显示标本中的一些结构,特殊染色用于显示标本中的一些结构,使其在显微镜下与其它组织或细胞区别使其在显微镜下与其它组织或细胞区别.特殊染色特殊染色单一特殊染色单一特殊染色复合特殊染色复合特殊染色一种染料对一种组织一种染料对一种组织结构或细胞进行染色结构或细胞进行染色多种染料对多种组织多种染料对多种组织结构或细胞进行染色结构或细胞进行染色现在学习的是第2页,共52页糖原染色方法:糖原染色方法:糖原为细胞内的多糖或粘多糖,糖原为细胞内的多糖或粘多糖,肝细胞和肌细胞内的糖原最多。肝细胞和肌细胞内的糖原最多。糖原的多少,可以反映机体糖代谢的情况
2、。糖原的多少,可以反映机体糖代谢的情况。例如:例如:先天性糖代谢紊乱先天性糖代谢紊乱-葡萄糖葡萄糖-6-6-磷酸酶缺乏、磷酸酶缺乏、淋巴肉瘤、间皮瘤、肾上腺瘤,肝细胞内淋巴肉瘤、间皮瘤、肾上腺瘤,肝细胞内都可聚集过多的糖原。都可聚集过多的糖原。现在学习的是第3页,共52页 过碘酸过碘酸-雪夫反应雪夫反应(periodic acid Schiff reaction,PAS)原理:原理:用过碘酸氧化多糖结构的碳键,用过碘酸氧化多糖结构的碳键,使其形成使其形成2-醛基,与无色的品红结合生成醛基,与无色的品红结合生成紫红色品红复合物,沉淀于细胞内糖原分布部位,紫红色品红复合物,沉淀于细胞内糖原分布部位
3、,从而可证明从而可证明多糖或粘多糖的存在。多糖或粘多糖的存在。现在学习的是第4页,共52页1、试剂配制、试剂配制(1)1%过碘酸水溶液:过碘酸水溶液:过碘酸过碘酸 1g 双蒸水双蒸水 100ml 将过碘酸溶于双蒸水中将过碘酸溶于双蒸水中(2)Schiff试剂:试剂:双蒸水双蒸水 200ml 碱性品红碱性品红 1g 1mol/L 盐酸盐酸 20ml 偏重亚硫酸钠偏重亚硫酸钠 2g(或亚硫酸氢钠)(或亚硫酸氢钠)活性炭活性炭 300mg现在学习的是第5页,共52页 双蒸水煮沸后离火,慢慢加入品红,双蒸水煮沸后离火,慢慢加入品红,搅拌至完全溶解,冷却至搅拌至完全溶解,冷却至50时过滤,时过滤,加入盐
4、酸,冷却至加入盐酸,冷却至25时加入偏重亚硫酸钠时加入偏重亚硫酸钠摇荡,密封置于暗处或摇荡,密封置于暗处或4冰箱内冰箱内24h。溶液呈草黄色时,加入活性炭摇荡溶液呈草黄色时,加入活性炭摇荡1min快速过滤。避光快速过滤。避光4保存备用。保存备用。现在学习的是第6页,共52页(3)亚硫酸氢纳溶液亚硫酸氢纳溶液 10%偏重亚硫酸氢纳偏重亚硫酸氢纳 5ml 1mol/L盐酸盐酸 5ml 蒸馏水蒸馏水 90ml 用前配制用前配制(4)1mol/L盐酸盐酸 36%盐酸盐酸 85.6ml 蒸馏水蒸馏水 914.4ml现在学习的是第7页,共52页2、染色步骤、染色步骤(1)切片入切片入1%过碘酸液过碘酸液
5、氧化氧化2-5 min。充分水洗后,过蒸馏水。充分水洗后,过蒸馏水。(2)入)入Schiff 液液10-20 min(室温(室温 暗处)暗处)(3)入亚硫酸氢纳液洗)入亚硫酸氢纳液洗3次每次次每次2min (去非特异性染色)流水冲洗(去非特异性染色)流水冲洗10min,过蒸馏水。过蒸馏水。(4)Mayer苏木精复染苏木精复染2-3min。流水冲洗,。流水冲洗,过蒸馏水,吸干。过蒸馏水,吸干。从从95%乙醇开始脱水、透明、封片。乙醇开始脱水、透明、封片。现在学习的是第8页,共52页3、对照、对照用用1%淀粉糖化酶处理对照片淀粉糖化酶处理对照片20 min.或用唾液或用唾液(无气泡)消化对照片(无
6、气泡)消化对照片30 min 2次。次。4、结果、结果细胞内糖原呈紫红色;对照片为阴性细胞内糖原呈紫红色;对照片为阴性现在学习的是第9页,共52页5、注意事项:、注意事项:(1)糖原易溶于水,要用冷)糖原易溶于水,要用冷Carnoy液固定液固定(2)配制)配制Schiff试剂碱性品红杂质太多,试剂碱性品红杂质太多,或亚硫酸氢纳潮解,都不能使碱性品红脱色;或亚硫酸氢纳潮解,都不能使碱性品红脱色;盛盛Schiff试剂的瓶子不宜过大,以免试剂的瓶子不宜过大,以免SO2逸出;逸出;若若Schiff试剂变成粉红色即失效。试剂变成粉红色即失效。Carnoy固定液固定液:取纯乙醇、氯仿、冰醋酸,按取纯乙醇、
7、氯仿、冰醋酸,按6:3:1的比例配制,的比例配制,现配现用。一般固定现配现用。一般固定1-2 h。固定后的组织块。固定后的组织块可直接入可直接入95%的乙醇脱水。的乙醇脱水。现在学习的是第10页,共52页现在学习的是第11页,共52页现在学习的是第12页,共52页疏松结缔组织各种成分显示方法:疏松结缔组织各种成分显示方法:疏松结缔组织中含有:疏松结缔组织中含有:胶原纤维、弹性纤维、网状纤维;胶原纤维、弹性纤维、网状纤维;巨噬细胞、肥大细胞。巨噬细胞、肥大细胞。现在学习的是第13页,共52页一、一、网状纤维网状纤维 分布:分布:肝、肾、脾、淋巴结肝、肾、脾、淋巴结等器官内。等器官内。纤维直径纤维
8、直径0.2-2.0m,分支多,交织成网。,分支多,交织成网。网状纤维主要由网状纤维主要由型胶原蛋白组成,表面型胶原蛋白组成,表面被覆糖蛋白,在镀银切片呈黑色称为嗜被覆糖蛋白,在镀银切片呈黑色称为嗜银纤维。银纤维。现在学习的是第14页,共52页Gomoris镀银法显示网状纤维镀银法显示网状纤维1、取材:、取材:淋巴结淋巴结2、试剂配制、试剂配制(1)硝酸银溶液:)硝酸银溶液:硝酸银硝酸银 10.2g,溶于,溶于100ml蒸馏水。蒸馏水。(2)氢氧化钠溶液:)氢氧化钠溶液:氢氧化钠氢氧化钠 3.1g,溶于,溶于100ml蒸馏水。蒸馏水。现在学习的是第15页,共52页(3)银氨溶液的配置:)银氨溶液
9、的配置:取取5ml 硝酸银硝酸银溶液,溶液,缓慢滴加缓慢滴加氨水氨水至溶液变得至溶液变得清亮清亮;再加入再加入5ml氢氧化钠氢氧化钠溶液,溶液,此时溶液此时溶液变黑色变黑色再滴加再滴加氨水氨水至溶液清亮后,至溶液清亮后,补加补加4滴氨水,加蒸馏水稀释至滴氨水,加蒸馏水稀释至100ml,保存于棕色瓶中备用。保存于棕色瓶中备用。现在学习的是第16页,共52页(4)高锰酸钾溶液:高锰酸钾溶液:高锰酸钾高锰酸钾0.5g,蒸馏水蒸馏水95ml,3%硫酸硫酸5ml(5)氯化金溶液:氯化金溶液:氯化金氯化金 0.2g,蒸馏水蒸馏水100ml(6)草酸溶液:草酸溶液:草酸草酸2ml,蒸馏水,蒸馏水98ml(7
10、)硫酸铁溶液:硫酸铁溶液:硫酸铁硫酸铁2g,蒸馏水蒸馏水100ml(8)甲醛溶液:甲醛溶液:甲醛甲醛20ml,蒸馏水蒸馏水80ml现在学习的是第17页,共52页 3、染色程序、染色程序(1)新鲜组织)新鲜组织10%甲醛固定,石蜡切片,甲醛固定,石蜡切片,常规脱蜡入水;常规脱蜡入水;(2)入高锰酸钾溶液中)入高锰酸钾溶液中5min,水洗,水洗1min;(3)入草酸溶液中漂白)入草酸溶液中漂白2min,水洗,水洗2min;(4)硫酸铁中媒染)硫酸铁中媒染2min,水洗,水洗1min;现在学习的是第18页,共52页(5)银氨溶液中处理)银氨溶液中处理1-5min(25),),蒸馏水洗蒸馏水洗2次,各
11、次,各2min;(6)甲醛溶液中还原)甲醛溶液中还原5min,蒸馏水洗蒸馏水洗2次,各次,各2min;(7)氯化金溶中调色)氯化金溶中调色1-3min,蒸馏水洗,蒸馏水洗2次;次;(8)95%及无水乙醇脱水,及无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。二甲苯透明,中性树胶封片。现在学习的是第19页,共52页4、结果、结果 淋巴结内可见黑色网状纤维,淋巴结内可见黑色网状纤维,粗细不等,交织成网。粗细不等,交织成网。5、注意事项、注意事项 配制氨银时氨液不可过多。配制氨银时氨液不可过多。现在学习的是第20页,共52页现在学习的是第21页,共52页二、弹性纤维二、弹性纤维 分布广泛,弹性纤维较细,直径
12、分布广泛,弹性纤维较细,直径0.2-1.0m,交织成网。富有弹性,与胶原纤维交织在一起。交织成网。富有弹性,与胶原纤维交织在一起。弹性纤维核心部分由均质的弹性蛋白组成;弹性纤维核心部分由均质的弹性蛋白组成;外周覆盖微原纤维。外周覆盖微原纤维。在皮肤学和检测幼年机体组织中的弹性结构。在皮肤学和检测幼年机体组织中的弹性结构。常用的显示弹性纤维的染色有:常用的显示弹性纤维的染色有:地衣红染色、地衣红染色、Gomoris醛品红染色、醛品红染色、Weigert染色等。染色等。现在学习的是第22页,共52页地衣红染色显示弹性纤维地衣红染色显示弹性纤维1、取材、取材 皮下组织皮下组织2、染液配制、染液配制地
13、衣红染液:地衣红染液:地衣红地衣红0.1g,70%乙醇乙醇100ml,硝酸,硝酸2ml。3、染色程序、染色程序(1)石蜡切片脱蜡下行至)石蜡切片脱蜡下行至70%乙醇。乙醇。(2)地衣红染液,室温,)地衣红染液,室温,12h或过夜,或或过夜,或37,15-30min.(3)70%乙醇分色,必要时可用乙醇分色,必要时可用0.5%-1%盐酸乙醇分色,盐酸乙醇分色,去除胶原纤维颜色。去除胶原纤维颜色。(4)常规乙醇脱水,二甲苯透明,树胶封片。)常规乙醇脱水,二甲苯透明,树胶封片。4、结果、结果 弹性纤维为棕红色,背景淡棕色。弹性纤维为棕红色,背景淡棕色。现在学习的是第23页,共52页现在学习的是第24
14、页,共52页三、胶原纤维三、胶原纤维胶原纤维,粗细不等,直径胶原纤维,粗细不等,直径0.5-10m,波浪状,波浪状,有分支交织成网。胶原纤维由有分支交织成网。胶原纤维由型胶原蛋白组成。胶原型胶原蛋白组成。胶原纤维对酸性染料的亲和力强,纤维对酸性染料的亲和力强,如常用的如常用的酸性复红酸性复红及及苯胺蓝苯胺蓝等,对胶原纤维有选染等,对胶原纤维有选染性,而其它组织不易着色,从而有利于其他组织的复染。性,而其它组织不易着色,从而有利于其他组织的复染。显示胶原纤维的主要方法:显示胶原纤维的主要方法:如如van Gieson法、法、Mallory法、法、Masson法等。法等。现在学习的是第25页,共5
15、2页Masson s三色染色法显示胶原纤维三色染色法显示胶原纤维1、取材:、取材:皮下组织或肠系膜铺片皮下组织或肠系膜铺片2、固定:、固定:ZenkerBouin 10%中性福尔马林缓冲液中性福尔马林缓冲液3、染液配制、染液配制(1)Weigert铁苏木精铁苏木精A液:液:苏木精苏木精 10g,95%乙醇乙醇100mlB液:液:29%三氯化铁水溶液三氯化铁水溶液 4ml 25%盐酸盐酸 1ml 蒸馏水蒸馏水 95ml用时甲乙两液等份混合,只能用数天。用时甲乙两液等份混合,只能用数天。现在学习的是第26页,共52页(2)Masson 酸性复红染液:酸性复红染液:酸性复红酸性复红1g,冰醋酸,冰醋
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- 组织学 技术 特殊 染色
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