实验五大肠杆菌与沙门氏菌讲稿.ppt

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1、关于实验五大肠杆菌与沙门氏菌第一页，讲稿共二十八页哦实验原理实验原理u各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦不同，所以利用这点进行生化试验，可达不同，所以利用这点进行生化试验，可达到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆菌时，生化试验是极其常用的一种方法。菌时，生化试验是极其常用的一种方法。第二页，讲稿共二十八页哦一、目的要求一、目的要求1.1.学习常用的生化实验方法；学习常用的生化实验方法；学习常用的生化实验方法；学习常用的生化实验方法；2.2.掌握掌握掌

2、握掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。第三页，讲稿共二十八页哦个体为杆状个体为杆状个体为杆状个体为杆状散在或成对散在或成对散在或成对散在或成对GG二、背景知识介绍二、背景知识介绍1.大肠杆菌大肠杆菌中等大小中等大小0.4-0.72-3m0.4-0.72-3m大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；与广泛的兽医临床病征有关，如：与广泛的兽医临床病征有关，如：与广泛的兽医临床病征有关，如：与广泛的兽医

3、临床病征有关，如：犊牛的肠道感染和水泻；犊牛的肠道感染和水泻；犊牛的肠道感染和水泻；犊牛的肠道感染和水泻；幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病；幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病；幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病；幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病；狗的尿道感染；狗的尿道感染；狗的尿道感染；狗的尿道感染；鸡：脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、鸡：脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、鸡：脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、鸡：脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等。第四页，讲稿共二十八页哦第五页，讲稿共二十八页哦第六页，讲稿

4、共二十八页哦个体为杆状个体为杆状个体为杆状个体为杆状散在或成对散在或成对散在或成对散在或成对GG2.沙门氏菌沙门氏菌是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构相似，是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构相似，是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构相似，是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构相似，GG，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。在医学、兽医和公共卫生上均十分重要：在医学、兽医和公共卫生上均十分重要：在医学、兽医和公共卫生上均十分重要：在医学、兽医和公共卫生上均十分重要：绝大多数沙门氏菌

5、对人和动物有致病性；绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性；绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性；绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性；能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病；能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病；能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病；能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病；人类食物中毒的主要病原之一。人类食物中毒的主要病原之一。人类食物中毒的主要病原之一。人类食物中毒的主要病原之一。第七页，讲稿共二十八页哦第八页，讲稿共二十八页哦伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌伤寒沙门氏菌 鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌 除除除除雏沙门雏沙门雏沙门雏沙门和和

6、和和鸡沙门氏菌鸡沙门氏菌鸡沙门氏菌鸡沙门氏菌外，外，外，外，其余各菌具有周生鞭毛。其余各菌具有周生鞭毛。其余各菌具有周生鞭毛。其余各菌具有周生鞭毛。第九页，讲稿共二十八页哦三、实验材料三、实验材料1.1.常规接种工具：接种棒、酒精灯等常规接种工具：接种棒、酒精灯等常规接种工具：接种棒、酒精灯等常规接种工具：接种棒、酒精灯等2.2.革兰氏染色液、玻片、滴管革兰氏染色液、玻片、滴管革兰氏染色液、玻片、滴管革兰氏染色液、玻片、滴管 等等等等3.3.菌种菌种菌种菌种:大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（大肠杆菌的普通琼脂（或

7、麦康凯）培养物（1 1个个个个/组）组）组）组）沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1 1个个个个/组）组）组）组）大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物；大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物；大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物；大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物；大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。4.4.培养基：培养基：培养基：

8、培养基：三糖铁斜面（三糖铁斜面（三糖铁斜面（三糖铁斜面（1 1支支支支/人）人）人）人）5.5.生化管：生化管：生化管：生化管：葡、乳、麦、甘、蔗、葡、乳、麦、甘、蔗、葡、乳、麦、甘、蔗、葡、乳、麦、甘、蔗、HH2 2S S、尿、枸（、尿、枸（、尿、枸（、尿、枸（1 1套套套套/人）人）人）人）6.6.试剂：试剂：试剂：试剂：吲哚试剂、吲哚试剂、吲哚试剂、吲哚试剂、M.RM.R试剂、试剂、试剂、试剂、V-PV-P试剂试剂试剂试剂 等等等等第十页，讲稿共二十八页哦四、实验内容四、实验内容1.观察观察 大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现；大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现；大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现；

9、大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现；大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现；大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现；大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现；大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现；沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现；沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现；沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现；沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现；沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现；沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现；沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现；沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现；大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检；大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检；大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检；大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检；记录结果。记录结果。记录结果。记

10、录结果。第十一页，讲稿共二十八页哦2.三糖铁琼脂接种三糖铁琼脂接种三糖铁琼脂接种三糖铁琼脂接种挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；置置置置 3737培养。培养。培养。培养。第十二页，讲稿共二十八页哦3.3.生化管接种培养生化管接种培养生化管接种培养生化管接种培养糖发酵试验：糖发酵试验：糖发酵试验：糖发酵试验：葡葡葡葡 乳乳乳乳 麦麦麦麦 甘甘甘甘 蔗蔗蔗蔗 HH2 2S S试验；试验；试验；试验；尿素酶试验；尿素酶试验；尿素酶试验；尿素酶试验；枸橼

11、酸盐利用试验。枸橼酸盐利用试验。枸橼酸盐利用试验。枸橼酸盐利用试验。葡葡葡葡 乳乳乳乳 麦麦麦麦 甘甘甘甘 蔗蔗蔗蔗 H H2 2S S 尿尿尿尿 枸枸枸枸第十三页，讲稿共二十八页哦葡葡葡葡 乳乳乳乳 麦麦麦麦 甘甘甘甘 蔗蔗蔗蔗 H H2 2S S 尿尿尿尿 枸枸枸枸大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌置置置置 3737培养培养培养培养第十四页，讲稿共二十八页哦4.吲哚试验吲哚试验 接种大肠杆菌或沙门氏菌于接种大肠杆菌或沙门氏菌于接种大肠杆菌或沙门氏菌于接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL5mL邓亨氏蛋白胨

12、水中，置邓亨氏蛋白胨水中，置邓亨氏蛋白胨水中，置邓亨氏蛋白胨水中，置3737培养培养培养培养3-5d3-5d；静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂1mL1mL；上层变为红色者为阳性反应。上层变为红色者为阳性反应。上层变为红色者为阳性反应。上层变为红色者为阳性反应。乙醚乙醚乙醚乙醚混匀混匀混匀混匀分层分层分层分层吲哚试剂吲哚试剂吲哚试剂吲哚试剂阳性阳性阳性阳性阴性阴性阴性阴性第十五页，讲稿共二十八页哦吲哚试验原理吲哚试验原理蛋白质中的色氨酸蛋白质中的色氨酸蛋白质中的色氨酸蛋白质中的色氨酸有些细菌有些细菌有

13、些细菌有些细菌如大肠埃希氏菌如大肠埃希氏菌如大肠埃希氏菌如大肠埃希氏菌吲哚吲哚吲哚吲哚对位二甲基氨基对位二甲基氨基对位二甲基氨基对位二甲基氨基苯甲醛苯甲醛苯甲醛苯甲醛+玫瑰吲哚玫瑰吲哚玫瑰吲哚玫瑰吲哚红色红色红色红色 试剂配方一：试剂配方一：试剂配方一：试剂配方一：对二甲基氨基苯甲醛对二甲基氨基苯甲醛对二甲基氨基苯甲醛对二甲基氨基苯甲醛1g 1g 无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇 95mL 95mL 浓盐酸浓盐酸浓盐酸浓盐酸 20mL 20mL 试剂配方二：试剂配方二：试剂配方二：试剂配方二：对二甲基氨基苯甲醛对二甲基氨基苯甲醛对二甲基氨基苯甲醛对二甲基氨基苯甲醛 5g 5g戊醇（或异戊醇）戊

14、醇（或异戊醇）戊醇（或异戊醇）戊醇（或异戊醇）75mL 75mL浓盐酸浓盐酸浓盐酸浓盐酸 25mL 25mL先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。第十六页，讲稿共二十八页哦5.5.M.RM.R试验试验接种大肠杆菌或沙门氏菌于接种大肠杆菌或沙门氏菌于接种大肠杆菌或沙门氏菌于接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL5mL葡萄糖蛋白胨水中，置葡萄糖蛋白胨水中，置葡萄糖蛋白胨水中，置葡萄糖蛋白胨水中，置3737培养培养培养培养3-5d3-5d）；）；）；）；于培养物中加入几滴试剂；于培养物中加入几滴试剂；于

15、培养物中加入几滴试剂；于培养物中加入几滴试剂；变红色者为阳性反应，变红色者为阳性反应，变红色者为阳性反应，变红色者为阳性反应，桔红到黄色则为阴性。桔红到黄色则为阴性。桔红到黄色则为阴性。桔红到黄色则为阴性。M.RM.R试剂试剂试剂试剂阳性阳性阳性阳性阴性阴性阴性阴性第十七页，讲稿共二十八页哦6.V-PV-P试验试验试验试验接种大肠杆菌或沙门氏菌于接种大肠杆菌或沙门氏菌于接种大肠杆菌或沙门氏菌于接种大肠杆菌或沙门氏菌于1mL1mL葡萄糖蛋白胨水中，置葡萄糖蛋白胨水中，置葡萄糖蛋白胨水中，置葡萄糖蛋白胨水中，置3737培养培养培养培养3-5d3-5d）；）；）；）；于培养物中加入于培养物中加入于培

16、养物中加入于培养物中加入0.5mL V-P0.5mL V-P甲液；甲液；甲液；甲液；随后加随后加随后加随后加V-PV-P乙液乙液乙液乙液0.5mL0.5mL，轻摇；，轻摇；，轻摇；，轻摇；静置静置静置静置10-15min10-15min。15min15min内变红者为阳性。内变红者为阳性。内变红者为阳性。内变红者为阳性。V-PV-P甲液甲液甲液甲液V-PV-P乙液乙液乙液乙液阳性阳性阳性阳性阴性阴性阴性阴性第十八页，讲稿共二十八页哦M.R与与V-P试验原理试验原理M.RM.R试验试验试验试验：甲基红是一种甲基红是一种甲基红是一种甲基红是一种pHpH指示剂：指示剂：指示剂：指示剂：当细菌分解葡萄

17、糖产酸且产酸量大时；当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时；当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时；当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时；在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。pH 4.4-6.2pH 4.4-6.2 红红红红 黄黄黄黄葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖丙酮酸丙酮酸丙酮酸丙酮酸乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇乙酰甲基甲醇2,3-2,3-丁二烯醇丁二烯醇丁二烯醇丁二烯醇某些细菌能发酵某些细菌能发酵某些细菌能发酵某些细菌能发酵二乙酰二乙酰二乙酰二乙酰碱碱碱碱V-PV-P试验试验试验试验：+胨中的胍基化合物胨

18、中的胍基化合物胨中的胍基化合物胨中的胍基化合物注意：注意：注意：注意：通常通常通常通常M.RM.R和和和和V-PV-P试验是密切相关：试验是密切相关：试验是密切相关：试验是密切相关：如果一个微生物如果一个微生物如果一个微生物如果一个微生物M.RM.R是阳性，则是阳性，则是阳性，则是阳性，则V-PV-P是阴性；或者相反。是阴性；或者相反。是阴性；或者相反。是阴性；或者相反。粉粉粉粉红红红红色色色色化化化化合合合合物物物物+第十九页，讲稿共二十八页哦 M.RM.R试剂试剂试剂试剂 V-PV-P试剂试剂试剂试剂甲基红甲基红甲基红甲基红 0.02g0.02g9595酒精酒精酒精酒精 60mL60mL蒸

19、馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水 40mL40mL甲液：甲液：甲液：甲液：萘酚酒精溶液萘酚酒精溶液萘酚酒精溶液萘酚酒精溶液 （萘酚萘酚萘酚萘酚5g5g无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇100mL100mL）乙液：乙液：乙液：乙液：KOHKOH溶液溶液溶液溶液 （KOH 40gKOH 40g，水，水，水，水100ml100ml）将甲液和乙液分装棕色瓶中，于将甲液和乙液分装棕色瓶中，于将甲液和乙液分装棕色瓶中，于将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-104-10保存。保存。保存。保存。第二十页，讲稿共二十八页哦五、结果观察五、结果观察1.大肠杆菌的生长表现大肠杆菌的生长表现普通琼脂普通琼脂普通琼脂普通琼脂：形成圆形

20、、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约23mm23mm；麦康凯麦康凯麦康凯麦康凯：琼脂上形成琼脂上形成琼脂上形成琼脂上形成红色菌落红色菌落红色菌落红色菌落较大的菌落。较大的菌落。较大的菌落。较大的菌落。第二十一页，讲稿共二十八页哦三糖铁琼脂三糖铁琼脂斜面斜面斜面斜面 产酸（黄色）产酸（黄色）产酸（黄色）产酸（黄色）底部底部底部底部产酸（黄色）产酸（黄色）产酸（黄色）产酸（黄色）产气产气产气产气HH2 2S S反应模式表示：反应模式表示：反应模式

21、表示：反应模式表示：AA；第二十二页，讲稿共二十八页哦2.沙门氏菌的生长表现沙门氏菌的生长表现普通琼脂普通琼脂普通琼脂普通琼脂：生长不良；：生长不良；：生长不良；：生长不良；麦康凯麦康凯麦康凯麦康凯：琼脂上形成琼脂上形成琼脂上形成琼脂上形成灰白色菌落灰白色菌落灰白色菌落灰白色菌落。第二十三页，讲稿共二十八页哦三糖铁琼脂三糖铁琼脂斜面斜面斜面斜面 产碱（红色）产碱（红色）产碱（红色）产碱（红色）底部底部底部底部产酸（黄色）产酸（黄色）产酸（黄色）产酸（黄色）产气产气产气产气HH2 2S S 反应模式表示：反应模式表示：反应模式表示：反应模式表示：KA()；()第二十四页，讲稿共二十八页哦3.细菌

22、的染色、镜检细菌的染色、镜检大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌GG直杆菌，大小直杆菌，大小直杆菌，大小直杆菌，大小0.4-0.72-3m0.4-0.72-3m，无芽胞，两端钝圆，散在或成对。无芽胞，两端钝圆，散在或成对。无芽胞，两端钝圆，散在或成对。无芽胞，两端钝圆，散在或成对。第二十五页，讲稿共二十八页哦4.生化管接种培养生化管接种培养葡葡葡葡 乳乳乳乳 麦麦麦麦 甘甘甘甘 蔗蔗蔗蔗 H H2 2S S 尿尿尿尿 枸枸枸枸葡葡葡葡 乳乳乳乳 麦麦麦麦 甘甘甘甘 蔗蔗蔗蔗 H H2 2S S 尿尿尿尿 枸枸枸枸大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌 /-/-第二十六页，讲稿共二十八页哦5.吲哚、吲哚、M.R、V-P试验结果试验结果大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌沙门氏菌吲哚吲哚吲哚吲哚试验试验试验试验M.RM.R试验试验试验试验V-PV-P试验试验试验试验吲哚吲哚吲哚吲哚试验试验试验试验M.RM.R试验试验试验试验V-PV-P试验试验试验试验第二十七页，讲稿共二十八页哦感感谢谢大大家家观观看看第二十八页，讲稿共二十八页哦