实验一,二.ppt

《实验一,二.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验一,二.ppt（47页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、实验一实验一 人血涂片的制作人血涂片的制作一、实验目的一、实验目的1 1、学习制作血涂片的基本方法、学习制作血涂片的基本方法2 2、观察血涂片中的红细胞、白细胞、观察血涂片中的红细胞、白细胞等相关淋巴细胞结构等相关淋巴细胞结构 血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，制备厚薄适宜，本方法，临床上应用极为广泛，制备厚薄适宜，分布均匀。染色良好的血涂片是血液学检查的分布均匀。染色良好的血涂片是血液学检查的重要基本技术。重要基本技术。涂片法制片是生物显微制片的基本方法之一涂片法制片是生物显微制片的基本方法之一 正常白细胞数为（正常白细胞数为

2、（4 41010）10109 9/升，通俗升，通俗说就是每立方毫米说就是每立方毫米400040001000010000个，平均值则个，平均值则为为70007000个。如果介于个。如果介于4000400070007000表示正常偏表示正常偏低，不需治疗；如果低于低，不需治疗；如果低于40004000个，就可诊断个，就可诊断为白细胞减少症。为白细胞减少症。附:血液的基本常识n血液中的白细胞是人体防御细菌入侵的巡逻兵。血液中的白细胞是人体防御细菌入侵的巡逻兵。当细菌等异物入侵时，白细胞便进入被入侵部当细菌等异物入侵时，白细胞便进入被入侵部位，将细菌包围、吞噬、消灭，故白细胞有人位，将细菌包围、吞噬、

3、消灭，故白细胞有人体体“白色卫士白色卫士”之称。可见白细胞数减少，就之称。可见白细胞数减少，就会削弱人体抗菌能力，容易受感染。不过，白会削弱人体抗菌能力，容易受感染。不过，白细胞减少并不一定要治疗，一要看减少程度；细胞减少并不一定要治疗，一要看减少程度；二要看减少原因。二要看减少原因。n白细胞不是一个均一的细胞群，根据其白细胞不是一个均一的细胞群，根据其形态、功能和来源部位可以分为三大类：形态、功能和来源部位可以分为三大类：粒细胞、单核细胞和淋巴细胞粒细胞、单核细胞和淋巴细胞 化验血液时怎样采血？为什么化验血液时怎样采血？为什么?1 1、消、消 毒毒:先按摩取血部位先按摩取血部位(左手的无名指

4、左手的无名指 )，使血流，使血流通畅；再用酒精消毒采血针和取血部位（如通畅；再用酒精消毒采血针和取血部位（如指尖）。指尖）。二、实验步骤二、实验步骤附附:化验血液时为什么在无名指采血？化验血液时为什么在无名指采血？n这是因为无名指结构较特殊。人的每个手指都有动这是因为无名指结构较特殊。人的每个手指都有动静脉通过，在手指的末端形成毛细血管网，以供应静脉通过，在手指的末端形成毛细血管网，以供应手指的血液营养，并保证血液的回流。但拇指与小手指的血液营养，并保证血液的回流。但拇指与小指肌腱活动的滑液囊比较广泛，并分别向手掌部延指肌腱活动的滑液囊比较广泛，并分别向手掌部延伸，而且互相相通。如果是在这两个

5、指头上采血，伸，而且互相相通。如果是在这两个指头上采血，万一发生了感染，炎症就可能向后蔓延，引起手掌万一发生了感染，炎症就可能向后蔓延，引起手掌和另一个手指的感染，可能导致严重后果。和另一个手指的感染，可能导致严重后果。n食指和中指是人的功能手指，使用的机会较多，食指和中指是人的功能手指，使用的机会较多，也不宜采血。唯有食指和无名指的滑液囊不向手也不宜采血。唯有食指和无名指的滑液囊不向手掌部位延伸，而是掌部位延伸，而是“各自为政各自为政”，互不相连，所，互不相连，所以一般都在无名指上采血。以一般都在无名指上采血。2 2、取、取 血血 待酒精干后，刺破皮肤，使血自然流出。待酒精干后，刺破皮肤，使

6、血自然流出。取干净载片，让血滴在离载片一端中取干净载片，让血滴在离载片一端中4 45 5毫米毫米处，注意手指持握载片的边缘，勿触及其表面。处，注意手指持握载片的边缘，勿触及其表面。不能使载片接触取血部位的皮肤。不能使载片接触取血部位的皮肤。取一块边缘光滑的载片做推片。将其一端置于取一块边缘光滑的载片做推片。将其一端置于血滴前方，向后移动到接触血滴，使血液均匀分散血滴前方，向后移动到接触血滴，使血液均匀分散在推片与载片的接触处。然后使推片与载片呈在推片与载片的接触处。然后使推片与载片呈30304040角，向另一端平稳地推出，如下图所示。涂角，向另一端平稳地推出，如下图所示。涂片推好后，迅速在空气

7、中摇，使之自然干燥片推好后，迅速在空气中摇，使之自然干燥3 3、推、推 片片4 4、染、染 色色 将瑞氏染液将瑞氏染液(伊红伊红-亚甲基蓝亚甲基蓝)滴在血膜上，至染液淹滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染半分钟。加等量水与染液混合再染没全部血膜，染半分钟。加等量水与染液混合再染5 5分分钟。最后用水把染液冲掉，自然干燥后，即可观察。钟。最后用水把染液冲掉，自然干燥后，即可观察。5 5、结果观察、结果观察(1)(1)红细胞红细胞 淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹淡红色，无核的圆形细胞，因红细胞为双凹形，故边缘部分染色较深，中心较浅，直径形，故边缘部分染色较深，中心较浅，直径7-7-8 8微米

8、微米.(2)(2)颗粒白细胞颗粒白细胞嗜中性颗粒白细胞嗜中性颗粒白细胞：体积略大于红细胞，细胞：体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分核被染成紫色分叶状，可分1-51-5叶。直径叶。直径10-1210-12微米。微米。嗜酸性颗粒白细胞嗜酸性颗粒白细胞：略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，通常为通常为2 2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色。直径成鲜红色。直径10-1510-15微米。微米。体积略小于嗜酸性白细胞，细胞质中有大小体积略小于嗜酸性白细胞，细胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白不等被染成

9、紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核细胞的颗粒少，核1-21-2叶，染成淡蓝色。直径叶，染成淡蓝色。直径10-1110-11微米微米.嗜碱性颗粒白细胞嗜碱性颗粒白细胞：淋巴细胞淋巴细胞:可观察到中、小型两种。小淋巴细可观察到中、小型两种。小淋巴细胞与红细胞大小相似，圆形，核致密，染成深胞与红细胞大小相似，圆形，核致密，染成深紫色。周围仅一薄层嗜碱性染成淡蓝的细胞质。紫色。周围仅一薄层嗜碱性染成淡蓝的细胞质。中淋巴细胞较大，核圆形。直径中淋巴细胞较大，核圆形。直径6-86-8微米。微米。无颗粒白细胞无颗粒白细胞单核细胞单核细胞：体积最大，细胞圆形。胞质染成灰蓝色。体积最大，细胞圆形。胞

10、质染成灰蓝色。核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。直径核。直径14-2014-20微米。微米。血小板：血小板：血小板为不规则小体，直径血小板为不规则小体，直径2-32-3微微米。其周围部分浅蓝色，中央有细小的米。其周围部分浅蓝色，中央有细小的紫红色颗粒，聚集成群。紫红色颗粒，聚集成群。嗜酸性颗粒白细胞嗜酸性颗粒白细胞嗜中性颗粒白细胞嗜中性颗粒白细胞单核细胞单核细胞嗜中性颗粒白细胞嗜中性颗粒白细胞单核细胞单核细胞1 1 玻片的清洗：玻片的清洗：用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤用过的玻片可放入适量肥皂水或合成洗涤剂的清水中煮沸剂的清水中煮沸20min

11、,20min,再用热水将肥皂和血膜再用热水将肥皂和血膜洗去洗去,用自来水反复冲洗用自来水反复冲洗,必要时再置必要时再置95%95%乙醇乙醇中浸泡中浸泡1h,1h,然后擦干或烤干备用。然后擦干或烤干备用。三、注意事项三、注意事项2 2、使用玻片时只能手持玻片边缘、使用玻片时只能手持玻片边缘,切勿触及玻片表面切勿触及玻片表面,以保持玻片清洁以保持玻片清洁,干燥干燥,中性、无油腻。中性、无油腻。3 3、一张良好的血片、一张良好的血片,要求厚薄适宜要求厚薄适宜,头体尾分头体尾分明明,分布均匀分布均匀,边缘整齐边缘整齐,两侧留有空隙。血片两侧留有空隙。血片制好后最好立即固定染色制好后最好立即固定染色,以

12、免细胞溶解和发以免细胞溶解和发生退行性变。生退行性变。4 4、血膜未干透、血膜未干透,细胞尚未牢固附在玻片上细胞尚未牢固附在玻片上,在染在染色过程中容易脱落色过程中容易脱落,因此血膜必需充分干燥。因此血膜必需充分干燥。5 5、用瑞氏染液染色时，切勿先将染液倾去后再、用瑞氏染液染色时，切勿先将染液倾去后再冲洗，以免染液中细小颗粒附着于玻片上影响冲洗，以免染液中细小颗粒附着于玻片上影响标本的清晰度。标本的清晰度。实验二实验二 凝集反应凝集反应1 1了解凝集反应的原理、基本类型及了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。其临床意义。2 2掌握玻片凝集实验、间接凝集实验掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的

13、实验方法和结果分析。的实验方法和结果分析。一、实验目的一、实验目的直接凝集反应直接凝集反应细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应接凝集反应 。常用的凝集试验有玻片法和试。常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。管法两种。玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集一滴在玻片上，混匀，数分钟后即

14、可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便，快速，适结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便，快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞可用于红细胞ABOABO血型的鉴定。血型的鉴定。玻片凝集试验玻片凝集试验ABOABO血型鉴定血型鉴定n人类最基本的血型为人类最基本的血型为A A、B B、O O血型。血型。ABOABO血型是根据红细胞所含的凝集原而划分血型是根据红细胞所含的凝集原而划分的。根据的。根据A A和和B B两种凝集原的组合，有四种类型：两种凝集原的组合，有四种类型：含有含有A A凝集原的称为凝集原的称为A A

15、型；型；含有含有B B凝集原的称凝集原的称为为B B型；型；含有含有A A和和B B两种凝集原的称为两种凝集原的称为ABAB型；型；既无既无A A，也无，也无B B凝集原的称为凝集原的称为O O型。型。人类人类ABOABO血型抗原主要有血型抗原主要有A A和和B B两种，根据红两种，根据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。细胞表面这两种抗原的有无可把血型分为四种。据此，将抗据此，将抗A A和抗和抗B B抗体分别与待测红细胞混合，抗体分别与待测红细胞混合，抗抗A A或（和）抗或（和）抗B B抗体与红细胞表面上的相应抗抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可原结合

16、而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型判定出受试者的血型.二、实验原理二、实验原理三、实验材料三、实验材料1 1ABOABO血型鉴定试剂盒血型鉴定试剂盒:内含抗内含抗A A分分型试剂和抗型试剂和抗B B分型试剂各分型试剂各1 1支。支。2 2一次性采血针一次性采血针1 1枚、洁净玻片枚、洁净玻片1 1块、块、7575酒精、酒精棉球。酒精、酒精棉球。抗A抗BAB1 1取洁净载玻片取洁净载玻片1 1块，并标记（如图）块，并标记（如图）2 2将抗将抗A A、B B分型试剂分别加分型试剂分别加1 1滴于标记滴于标记 有有A A、B B的玻片两侧。的玻片两侧。四、实验方法3 3用酒精棉签消

17、毒被检者手指尖端，以采血用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一载玻片一端取适量血液加入抗抗载玻片一端取适量血液加入抗抗A A分型试剂，分型试剂，并混匀；用另一端再取适量血液加入抗抗并混匀；用另一端再取适量血液加入抗抗B B分分型试剂，并混匀。用干酒精棉球止血。型试剂，并混匀。用干酒精棉球止血。4 4观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。红

18、细胞红细胞红细胞凝集成团红细胞凝集成团含有含有A A型凝集原的红细胞与抗型凝集原的红细胞与抗A A凝集素相遇或者含有凝集素相遇或者含有B B型凝集型凝集原的红细胞与抗原的红细胞与抗B B凝集素相遇时，就会凝集成团，阻碍血液凝集素相遇时，就会凝集成团，阻碍血液循环。循环。五、实验结果五、实验结果记录受检者红细胞凝集情况，根据记录受检者红细胞凝集情况，根据ABOABO血型鉴定表血型鉴定表(下表下表)，判断受检者的血型。，判断受检者的血型。ABO血型鉴定表血型鉴定表抗抗A分型试剂侧分型试剂侧 抗抗B分型试剂侧分型试剂侧 血型血型 +A +B +AB O“”表示红细胞凝集，表示红细胞凝集，“”表示红细

19、胞未凝集表示红细胞未凝集六、作六、作 业业1 1、绘出所做血涂片中能够观察到的、绘出所做血涂片中能够观察到的细胞形态，并注明其名称细胞形态，并注明其名称 。2 2、记录血型鉴定试验材料、方法及、记录血型鉴定试验材料、方法及结果判定（可用图示或表格方式表结果判定（可用图示或表格方式表示）。示）。瑞氏染液瑞氏染液 :瑞氏染料瑞氏染料 1g 1g 加甲醇加甲醇 (AR)600ML(AR)600ML。将瑞氏染料放在清洁干燥乳钵中。将瑞氏染料放在清洁干燥乳钵中 ,加少量加少量甲醇甲醇 ,充分研磨使染料溶解充分研磨使染料溶解 .将已完全溶解将已完全溶解的部分倒入棕色试剂瓶中的部分倒入棕色试剂瓶中 ,未溶解部分再加未溶解部分再加少量甲醇研磨少量甲醇研磨 ,直至染料完全溶解于甲醇为直至染料完全溶解于甲醇为止止 .附附:试剂配制试剂配制