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1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。基因工程题库及答案汇编-基因工程题库及答案汇编一、填空题1基因工程是年代发展起来的遗传学的一个分支学科。基因工程技术的诞生，使人们从简单地利用现存的生物资源进行诸如发酵、酿酒、制醋和酱油等传统的生物技术时代，走向的时代。2随着基因工程技术的诞生和发展，人类可以通过、和等三种主要生产方式，大量取得过去只能从组织中提取的珍稀蛋白，用于研究或治病。3Cohen等在年构建了第一个有功能的重组DNA分子。4基因工程的两个基本特点是：(1)，(2)。5基因克隆中三个基本要点是：；和。6年，美国斯坦福大学等在上发表了

2、题为：“将新的遗传信息插入SV40病毒DNA的生物化学方法：含有噬菌体基因和Ecoli半乳糖操纵子的环状SV40DNA”的论文，标志着基因工程技术的诞生。这一工作具有划时代的意义，但是他们并没有。7克隆基因的主要目的有四：(1)；(2)；(3)；(4)。填空题答案170；按人们的需要而定向地改造和创造具有新的遗传性品种。2细菌发酵；真核细胞培养；乳腺生物反应器。319734(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达。5克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择61972；PBerg；ProcNatlAcadSciUSA；证明体外重组的DNA分子具有生物学功能7(1)扩增DNA；(2)获得基因产

3、物；(3)研究基因表达调控；(4)改良生物的遗传性二、选择题(单选或多选)1因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是()(a)AKomberg(b)WGilbert(c)PBerg(d)BMcClintock2第一个作为重组DNA载体的质粒是()(a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl83第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是()(a)EcoRI(b)EcoB(c)EcoC(d)EcoR4PBerg构建SV40二聚体时用了几种不同的酶，其中()的作用是制造隐蔽的5端。(a)末端转移酶(b)外切核酸酶(c)外切酶(d)DNA连接酶选择题(单选或多选)答案：1C；2

4、C；3a；4b。三、简答题1为什么说基因工程技术是60年代末70年代初发展起来的?答：这是因为：(1)1967年发现了连接酶；(2)大肠杆菌的转化技术是1970年获得突破；(3)限制性内切核酸酶的分离始于1970年；(4)Berg在1972年构建了第一个重组的DNA分子。2 重组DNA的含义是什么?答：将一个生物的DNA片段插入到一个载体中，并引入到另一生物体中进行繁殖。3 如何理解基因工程的两个特点?答：基因工程的两个基本特点是分子水平的操作和细胞水平的表达。分子水平的操作包括DNA分离、切割和连接(还有其他一些DNA的修饰等)。由于体外重组DNA的最终目的是要改变生物的遗传性，所以分子水平

5、的操作和细胞水平的表达是基因工程的两个最基本的特点。4 在Cohen构建有生物功能重组体的第一步实验中，用EcoRI切割了R6-5质粒，然后转化EcoliC600，在卡那霉素抗性子板上筛选到了pSCl02，它是由R6-5的三个EcoRI片段组成，请推测这个质粒具有什么遗传特性?答：至少可说明两点：(1)pSC102含有复制起点，是一个独立的复制子；(2)重组DNA分子中的卡那霉素抗性基因得到了表达。5 什么是动物乳腺生物反应器?答：能够分泌乳汁的转基因动物生产其他来源的基因产品，并通过乳腺分泌出来。四、问答题1SNCohen于1973年构建了三个重组体，pSCl02，pSCl05，pSCl09

6、请说明这三个重组体是如何获得的?各说明了什么?答：pSCl02：用EcoRI切割R6-5，混合转化大肠杆菌，在卡那霉素抗性平板上选择了一个克隆，并从该克隆中分离了重组质粒DNA，命名为pSCl02。该质粒是由质粒R6-5的EcoRI酶切片段、V和在体内连接的，说明可以利用体内连接构建重组体。pSCl05：作者分别用EcoRI切割质粒pSC101、pSC102,然后加入DNA连接酶进行连接后转化大肠杆菌，在四环素和卡那霉素双抗性的平板上筛选到pSC105。说明用质粒作为载体，体外连接可得到有功能的重组体。pSCl09：pSC101与RSF1010的共整合，即用EcoRl分别切割这两个质粒，然后在

7、体外进行重组。说明两个独立的复制子体外重组后仍具有生物功能。2 基因克隆是如何使含有单个基因的DNA片段得到纯化的?答：大分子量的DNA会含有许多特殊限制性内切核酸酶的限制位点，因此用一种限制酶处理一完整染色体或整个基因组会产生许多不同的DNA片段，每一个片段带有基因组的一个不同的基因或一个不同的小片段。当全部片段与用同种限制酶处理过的载体分子混合时(图A14.1)，每个片段将插入一个不同的载体分子(比如一个质粒)，同样地，当用这些质粒转化宿主细胞时，每个宿主细胞将只接收一个质粒DNA分子而筛选出的含重组质粒的每个菌落实际上会含有某一特异的供体DNA片段的多个拷贝。一旦带有待研究的特定基因的克

8、隆被确认了，此重组DNA分子可从宿主细胞中提取出来进行纯化。五、概念题1遗传工程：是遗传学和工程学相结合的一门技术科学。借用工程技术上的设计思想，在离体条件下，对生物细胞、细胞器、染色体或DNA分子进行按图施工的遗传操作，以求定向地改造生物的遗传性。遗传工程的概念有广义和狭义之分。2生物技术：又称生物工艺学，生物工程学。是根据生物学、化学和工程学的原理进行工业规模的经营和开发微生物、动植物细胞及其亚细胞组分，进而利用生物体所具有的功能元件(如基因、蛋白质)等来提供商品或社会服务的一门综合性科学技术。它包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程等。3基因工程(geneengineering)：也称

9、基因操作(genemanipulation)、重组DNA(recombinantDNA)。基因工程是以分子遗传学理论为基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导人活细胞，以改变生物原有的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构和功能。4细胞工程(cellengineering)：应用细胞生物学的原理和方法，结合工程学的技术手段，按照人们预先的设计，有计划地改变或创造细胞遗传性的技术，以及在体外大量培养和繁殖细胞，或获得细胞产品，或利用细胞体本身的技术领域。主要内容包括细胞融合、细胞拆合、染色体转移

10、、基因转移、细胞或组织培养等。由于所用细胞的来源不同，细胞工程又分为微生物细胞工程、植物细胞工程、动物细胞工程等。5细胞分泌工程：是根据细胞内蛋白质合成和运输理论而发展起来的一项新的细胞工程技术，主要是通过对基因改造，如基因缺失、多效分泌突变、周质泄漏突变或拼接信号肽基因等措施，促进基因产物分泌的技术。6酶工程(enzymeengineering)：又称为酶技术。它是围绕着酶所特有的生化催化特性，结合现代化的技术手段，在体外模拟或在常温常压下生成酶反应的产品；以及利用重组DNA技术定向改变酶，进行酶的修饰，或酶的全人工合成。其主要内容包括酶的化学修饰、酶的固定化、酶反应器等。7蛋白质工程(pr

11、oteinengmeenng)：是更广义上的包括酶工程在内的蛋白质修饰操作，通过对蛋白质及酶的化学修饰及基因改造获得具有特殊功能的非天然蛋白质的技术。主要是根据蛋白质的结构和功能间的相互关系，利用基因工程技术，或用化学方法合成基因、改造基因，以便合成新的蛋白质，或改变蛋白质的活性、功能以及溶解性等。8发酵工程(fermentationengineering)：又称微生物工程，微生物发酵工程。利用生物，主要是微生物的某种特定功能，通过现代化工程技术手段，生产有用物质，或把微生物直接用于某种工业化生产的一种技术体系。主要内容包括菌种选育，发酵生产微生物，或植物细胞的代谢产物，生产微生物菌体，最佳培

12、养条件的优化组合等。9移动基因(movablegene)又叫转座元件(订ansposableelement)。是一类可以在同种DNA或异种DNA间移动的基因，但这种移动只是移动一个拷贝，在原来的位置仍保留一份拷贝。移动基因最早是BMcClintock夫人1951年在玉米中发现，她因此获得1983年医学和生理学诺贝尔奖。10断裂基因(splitgene，intermptedgene)是被间隔序列间隔成若干部分，而形成不连续形式的基因，是真核基因的普遍形式。断裂基因首先在腺病毒中发现。将断裂基因中不出现在成熟mRNA中的部分称为内含子(inffon)，出现在成熟mRNA上的部分称为外显子(exon

13、)。如卵清蛋白基因有7个内含子。11重叠基因(overlappinggene)是指一个基因的序列中，含有另一基因的部分或全部序列。即一段DNA序列中含有合成两个或两个以上的多肽的基因。重叠包括编码区和控制区的重叠。基因重叠现象是英国分子生物学家Sanger1977年在测定噬菌体9X174的DNA序列时发现的，在噬菌体X174的9个基因中，O基因与A基因重叠，而E基因与D基因重叠。12假基因(pseudogene)是一类在基因组中稳定存在，序列组成也酷似正常基因，但不能表现出任何功能的DNA序列。它是相应的正常基因突变而丧失活性的结果。从机理上推测，有可能是插入或缺失引起了移码突变或者是点突变，

14、改变了一些剪接信号使之不能正常加工，或是mRNA反转录后再插入的结构。第二章限制性内切核酸酶一、填空题1严格地说限制性内切核酸酶(restrictionendonuclease)是指已被证明是的酶。基因工程中把那些具有识别的内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。2年Luria和Human在T偶数噬菌体对大肠杆菌感染实验中首次发现了细菌的现象。31970年，Smith和Wilcox从流感嗜血杆菌中分离到一种限制酶，能够特异性的切割DNA，这个酶后来被命名为，这是第一个分离到的类限制性内切核酸酶。4通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制

15、性内切核酸酶切点相互位置的。5类限制性内切核酸酶分子量较小一般在2040kDa，通常由亚基所组成。它们的作用底物为双链DNA，极少数类酶也可作用于单链DNA，或DNARNA杂合链。这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，类酶既具有专一性，也具有专一性，一般在识别序列内切割。切割的方式有，产生末端的DNA片段或的DNA片段。作用时需要作辅助因子，但不需要和。6完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：(1)(2)。7类限制性内切核酸酶一般识别个碱基，也有识别多序列的限制性内切核酸酶。根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析，限制性内切核酸酶识别序列具有

16、倾向，即它们在识别序列中含量较高。8EcoK是I类限制性内切核酸酶，分子组成是22，分子量300kDa。在这些亚基中，o亚基具有作用；亚基具有的活性；亚基的作用则是。9个体之间DNA限制性片段长度的差异叫。10限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自，第二、第三两个字母取自，第四个字母则用表示。11限制性内切核酸酶AcyI识别的序列是5GRCGYG-3，其中R，Y。12在酶切反应管加完各种反应物后，需要离心2秒钟，其目的是和。13部分酶切可采取的措施有：(1)(2)(3)等。14第一个分离的限制性内切核酸酶是；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是。15限制性内

17、切核酸酶BsuRI和Hae的来源不同，但识别的序列都是，它们属于。16由于DNA是由4种碱基组成的，所以任何限制性内切核酸酶的切割频率的理论值应该是。17SalI和NotI都是哺乳动物中识别序列稀有的酶，在哺乳动物基因组的5kb片段中，找到NotI切点的概率是。18部分酶切是指控制反应条件，使得酶在DNA序列上的识别位点只有部分得到切割，它的理论依据是。19I类限制酶识别DNA的位点和切割的DNA位点是不同的，切割位点的识别结合有两种模型，一种是，另一种是。20限制性内切核酸酶通常保存在浓度的甘油溶液中。填空题答案1 限制修饰系统的一个组成部分；双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割

18、DNA双链结构21952；限制和修饰。3Hind。4限制性酶切图谱524个相同的；切割位点；识别位点的；平切和交错切；平；具有突出黏睦末端；Mg2+；ATP；SAM6能够在中间划一个对称轴，两侧的序列两两对称互补配对；两条互补链的53的序列组成相同，即将一条链旋转180，则两条链重叠746；GC。8限制性内切核酸酶的作用；甲基化酶；识别DNA。9限制性片段长度多态性(RFLP)。10属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名。11代表A或者是T；代表G或者C。12混合均匀；防止部分酶切13(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积。14EcoK；EcoRl。15GGCC；异源同工酶。

19、164n。17120018酶切速度是不均衡的。19限制酶移动；DNA弯曲。2050二、判断题1限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的修饰和对自身DNA的限制实现的。2限制性内切核酸酶在DNA中的识别切割位点的二级三级结构也影响酶切效率。一般来说，完全切割质粒或病毒DNA，要比切割线状DNA需要更多的酶，最高的需要20倍。3如果限制性内切核酸酶的识别位点位于DNA分子的末端，那么接近末端的程度也影响切割，如Hpa和MboI要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。4能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸酶识别的序列。5限制性图谱与限制性

20、片段长度多态性(RFLP)图谱的最显著的区别在于前者是一个物理图谱而后者是一个连锁图。6用限制性内切核酸酶Hae分别切割载体DNA和供体DNA后，可用EcoliDNA连接酶进行连接。7已知某一内切核酸酶在一环状DNA上有3个切点，因此，用此酶切割该环状DNA,可得到3个片段。8迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链DNA，又能作用于单链DNA。9基因工程中使用的类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的活性。10DNA多态性就是限制性片段长度多态性。11用限制性内切核酸酶PstI切割质粒pBR322后，再用外切核酸酶Exo进行系列缺失，可得到一系列大小不同的缺失突变体。12

21、甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5以下。13具有EcoR末端的外源片段只能以一个方向插入到EcoR末端的载体中。14从EsherichiacoliK中分离的限制性内切核酸酶命名为EcoK。15同一种限制性内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的两个末端都是相同的。16在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制性酶就不能切割了。17稀有酶是指那些识别序列很长又不常用的限制性内切核酸酶。判断题答案1错误。对外源DNA的限制，对自身DNA的修饰。2正确。3正确。4错误。细菌本身

22、基因组中核酸酶的识别序列因C或A残基的甲基化作用而受到保护，可免遭切割。5正确。6错误。限制性内切核酸酶Hae切割DNA产生平末端的DNA片段，EcoliDNA连接酶不能连接平末端。7正确。8错误。9错误。类限制性内切核酸酶没有甲基化酶的活性。10错误。DNA多态性是指中性突变不低于1的一种群体，一般是不能检测的。如果这种突变发生在限制性内切核酸酶的识别位点上，就会改变酶切的模式，可以通过电泳检测出来。所以，RFLP是DNA多态性的一部分。11错误。限制性内切核酸酶PstI切割DNA后产生3，突出的黏性末端，而外切核酸酶Exo只能从突出的5，端降解DNA。12正确。13正确。14错误。应是Ec

23、oK。15错误。同一种限制性内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的两个末端不一定相同。如果识别序列不是完整的回文序列，产生的末端就不相同。16错误。限制与修饰是一对保护系统，修饰了就不能被同一系统中的限制性内切核酸酶切割，但是对不同限制修饰系统中的酶没有作用。17错误。在某种生物基因组DNA中切割频率很低的酶称为稀有酶。三、选择题(单选)1关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当。(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制修饰系统10因研究

24、噬菌体的限制与修饰现象的本质而获得诺贝尔奖的科学家是：()(a)JLederberg(b)WArber(c)HSmith(d)FSanger11第一个被分离的类酶是：()(a)EcoK(b)Hind(c)Hind(d)EcoB12双链DNA中一段自我互补的序列被称为回文序列，这种序列一般具有下列特征：()(a)有对称轴(b)两条链的53方向的序列相同(c)是类酶的识别序列(d)可增强基因的表达13在下列进行DNA部分酶切的条件中，控制那一项最好?()(a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度14在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2离子?()(a)EDTA(b)柠檬酸钠(c)SDS(

25、d)EGTA，15在下列工具酶中，那一种可以被EGTA抑制活性?()(a)S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal31核酸酶16限制性内切核酸酶可以特异性地识别：()(a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列(c)特定的三联密码(d)以上都正确17在下列酶中，催化反应不需要ATP的是()(a)EcoK(b)EcoB(c)T4DNA连接酶(d)BamHl18下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是()。(a)Sau3AI(b)EcoRI(c)hindIII(d)Sau3A119限制性内切核酸酶的星号活性是指：()(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生

26、变化的活性。(b)活性大大提高(c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同20下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?()(a)甘油含量过高(b)反应体系中含有有机溶剂(c)含有非Mg2的二价阳离子(d)酶切反应时酶浓度过低21DNA被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，那一项不太可能?()(a)酶失活(b)蛋白质(如BSA)同DNA结合(c)酶切条件不合适(d)有外切核酸酶污染22关于回文序列，下列各项中，()是不正确的(a)是限制性内切核酸酶的识别序列(b)是某些蛋白的识别序列(c)是基因的旁侧序列(d)是高度重复序列23关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只

27、有()不太恰当(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制修饰系统选择题(单选或多选)答案1 b；2C；3b；4C；5C；6b，d；7c；8a，e；9b，c，d，e；10b；11c；12a，b，c；13b；14d；15d16b；17d；18d；19a；20d；21a；22d；23b四、简答题2说明SangerDNA测序法的原理。答：SangerDNA测序法是建立在两个基本原理之上：(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5，端向3，端聚合(DNA聚合酶参与了细

28、菌修复DNA合成过程)；(2)可延伸的引物必须能提供游离的3，羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3，羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。3在酶切反应缓冲液中加入BSA的目的是什么?机理是什么?答：目的是保护酶活性，机理是通过提高溶液中蛋白质的浓度，防止酶失活。4Fredrick和McClarin等用一个由13个碱基对的DNA片段与EcoRI、反应，然后分离到酶和DNA共结晶的复合物，通过X射线分析发现了什么?答：发现：具有活性的EcoRI是一个二聚体，它们同DNA结合形成一

29、个直径为50A的球形结构，两个EcoRI位于DNA的两侧。5有些噬菌体和质粒常常编码一些抗限制性酶的蛋白以中和宿主的限制系统。你认为噬菌体和质粒还有哪些可能的方式避免宿主的限制作用?答：某些噬菌体的基因组中有修饰的碱基，因此对限制性内切核酸酶具有免疫作用。另一种避免限制酶切割的途径是抑制SAMase的活性，该酶制造S腺苷甲硫氨酸。某些限制酶作用时需要S腺苷甲硫氨酸。然而，噬菌体在发育过程中不能同某些单碳的供体反应。6某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?答：盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。7在序列5CGAACATATGGAGT-3中含有一个6bp的

30、类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?答：回文序列是：5-CATATG-38下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是类酶的识别序列：GAATCG，AAATTT，GATATC，ACGGCA?为什么?答：GATATC；AAATUF，因为它们是回文序列。9用连接酶将Sau3AI(,bGATC)切割的DNA与经BamHI(GGATCC)切割的DNA连接起来后，能够被BamHI切割的机率有多大(用百分比表示)?答：25。10用Klenow酶填补的办法可使5黏性末端转变成平末端。这种方法常使DNA上的某些限制酶的识别位点消失。请问，对于下列限制酶，用这种方法处理会不会使它们的识别序列都

31、消失?BamHI(GGATCC)；TaqI(TCGA)，BssH(GCGCGC)。答：BssH不会。11请推测细菌的染色体上是否会有编码识别8个碱基的内切酶?怎样验证?答：关于这个问题没有明确的答案。这些酶的作用不仅仅限于噬菌体的感染，因为大多数噬菌体并不含有8个碱基序列的酶切位点，一种可能是8个碱基的酶是质粒整合后加上去的，作为质粒附加系统的一部分。12当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?为什么?答：注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星活性。或使用通用缓冲液。五、问答题1什么是细菌

32、的限制修饰系统(restriction-modificationsystem，R-Msystem)答：细菌中有作用于同一DNA的两种酶，即分解DNA的限制酶和改变DNA碱基结构使其免遭限制酶分解的修饰酶。而且，这两种酶作用于同一DNA的相同部位，把这两种酶所组成的系统称为限制与修饰系统。2细菌的限制修饰系统有什么意义?答：不同种的细菌或不同的细菌菌株具有不同的限制酶和修饰酶组成的限制与修饰系统。修饰的本质是通过甲基化酶将DNA中某些碱基进行甲基化修饰，由于宿主自身DNA上的这些位点进行了修饰，限制酶就不能进行切割。由于外来的DNA在相应的碱基上没有被甲基化，宿主的限制酶通过对该位点的识别来分辨

33、敌我，并将人侵的外来DNA分子降解掉。所以DNA限制作用和修饰作用为细胞提供了保护。3说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株名的各一个首字母，再加上序号。基本原则：34个字母组成，方式是：属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写；(2)若种名有词头，且已命名过限制酶坝，j取词头后的第一字母代替。第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I

34、、等，用正体。8双酶消化法(doubledigests)绘制限制性内切核酸酶酶谱的原理。答：双酶消化法是绘制DNA中两个或两个以上限制性内切核酸酶图谱所采用的方法。做法是在两个限制性内切核酸酶分别单独消化DNA分子的基础上，然后再用这两个酶同时或先后消化此DNA，根据它们的结果，构建物理图谱。10限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP)。当DNA序列的差异发生在限制性内切核酸酶的识别位点时，或当DNA片段的插入、缺失或重复导致基因组DNA经限制性内切核酸酶酶解后，其片段长度的改变可以经凝胶电泳区分时，DNA多态性就可应用限制性

35、内切核酸酶进行分析，这种多态性称为限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)。(注：Py二任何一种嘧啶：Pu二任何一种嘌吟)11计算下列三种酶各自在某染色体DNA序列上识别位点间的平均距离：AluI：5AGCT3，EcoRI：5GAATTC3AcyI：5GPuCGPyC33TCGA53CTTAGG53CPyGCPuG512在细菌质粒pBPI的四环素抗性基因tetR的中间有一个Hind的切点。用Hind切割果蝇基因组DNA，以pBPl为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆15带有果蝇的目的基因。用Hind和EcoRV对克隆15进行

36、了酶切分析，电泳结果如图151(用酶切的pBPl质粒DNA作对照)，旁边标出了片段的大小。图151酶切电泳图谱12：Hind切割；34：EcoRV切割；56：HindIII+EcoRV；1、3、5是质粒DNA；2、4、6是15号克隆。(1)绘制含有插入片段和不含插入片段时的pBPl的限制性图谱，并标明四环素抗性基因的位置；(2)如果用克隆在另一个与pBPl完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针进行Southern印迹杂交，预测上述电泳图会出现怎样的杂交带(3)如果用克隆15的果蝇DNA片段作为探针进行Southern印迹杂交，放射自显影的结果又是如何?答：(1)酶切图谱示于图A15.1图A1

37、5.1限制性图谱(2)除No.2的2.5kb，No.6的1.5kb和1.0kb没有带外，其他都有带。(3)(2)项中没有带的都有带，有带的都没有带。13为什么大多数内切酶被称为“限制”酶。答：大多数内切核酸酶是限制性的内切核酸酶，只在特定的位点(即一段特定的核酸序列或甲基化核苷酸)作用。另外，限制性内切核酸酶主要是用来切割外源片段(例如侵染的噬菌体DNA)。噬菌体对宿主具有专一性，因为在其他生物中，其DNA会成为细胞限制系统攻击的对象。从这种意义上说是内切核酸酶限制了噬菌体的宿主范围。14据Science杂志报道：一种重要的遗传疾病可由导致DNA中碱基替换的诱变剂在体外进行人工诱导。设计一种快

38、速用以鉴定疾病基因型的检测方法。答：这要求基因座已被作图，其目的在于分离基因，测定核苷酸序列以及确定是否碱基替换突变。碱基替换突变可以改变DNA修饰酶(例如甲基化酶、限制酶)的识别序列。15为了绘制长为30kbBamH限制性片段的限制性图谱，分别用EcoRI、Hpa、EcoRI+Hpa消化这一片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离DNA片段，溴化乙锭染色后观察DNA带型(图152)。请根据这些结果，绘制一个限制性图谱，要标明EcoRI和Hpa识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离(kb)。图15.2用EcoRI、Hpa单独切割及用这两种酶图A15230kb的BamHI片段的限制性酶谱混合切割3

39、.0kbBamH片断产生的DNA带数字表示片段的大小(kb)答：图A152是BamHI片段的限制性图谱。倒装法绘图是同样有效的，制作这种图谱的一种方法如下：画一条适当长度的线段表示3.0kb的BamHI片段，由于Hpa只切割一次，Hpa的位点可以明确地定位，从片段的任一端起1.6kb处标出其位置。EcoRI切割片段两次，如果你从片段的任一端起1.7kb处确定EcoRI位点的位置，你会发现它与Hpa的距离同那些用双酶消化所得到片段的大小不相符，因此1.7kb的片段必定位于中间，两个EcoRI位点必定离两端各为0.4和0.9kb。第三章DNA和RNA合成修饰酶一、填空题1连接酶(ligase)是一

40、类用于核酸分子连接形成键的核酸合成酶，有DNA连接酶RNA连接酶之分。2原核生物主要有两种类型的DNA连接酶：EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶。基因工程中使用的主要是T4DNA连接酶，它是从T4噬菌体感染的Ecoli中分离的种单链多肽酶，分子量为Oa，由T4噬菌体基因编码。EcoliDNA连接是由大肠杆菌基因一编码，也是一条多肽链的单体，分子量为kDa。这两DNA连接酶有两个重要的差异：第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同，TDNA连接酶用，而EcoliDNA连接酶则用作为能源。第是它们催化平末端连接的能力不同，在正常情况下只有T4DNA连接酶能够连接平末端EcoliDNA连接酶则

41、不能。即使是调整反应条件，EcoliDNA连接酶催化平末端连接效率也只有T4DNA连接酶的。3DNA连接酶的单位通常用Weiss单位表示，一个Weiss单位是：。4DNA聚合酶I是在1965年从大肠杆菌细胞中分离的，所以又称为合酶。该酶由大肠杆菌基因编码，是一种单链球蛋白，分子量为109kDa，酶蛋白中含有一个Zn原子。5T4DNA聚合酶与Klenow酶一样，具有53，聚合酶和35外切酶两种性，但是它的35外切酶的活性比Klenow酶强倍。该酶的35外切活性既能作用于单链DNA也能作用于双链DNA，不过作用于的活性要强于链。6反向转录酶(reversetranscriptase)是由kDa和k

42、Da两个单位组成的二聚体，作用时以RNA为模板合成DNA。7从小牛胸腺中分离纯化的末端转移酶催化的基本反应是将，同时释放出离的无机磷。催化反应时不需，但需要引物，单链DNA是最好的引物单链DNA受体的长度最短需有个dNTP。具有3，突出末端的双链DNA是较好的反应底物。二价离子和DNA末端状态对催化反应影响较大，但是用为辅助离子，可以催化任何形式的末端(突出的、隐含的、平齐的)加接单核苷酸，但突出的3端效率较高。以Mn2Mg2+作为辅助因子，只能在单链DNA或双链DNA3突出端加尾。8S1核酸酶(S1nuclease)是从米曲霉(Aspergillusoryzae)中分离纯化的一种含金属蛋白，

43、分子量为32kDa，是一种耐热的酶(3765)。9在S1保护实验中，S1切割的温度有两种：20和45，这是因为：在20时，；在45C时，。10技术可以用来鉴定DNA分子中与DNA结合蛋白相互作用的特定序列。11真核生物有两种DNA连接酶，连接酶I主要是参与，而连接酶则参与。12T4RNA连接酶是1972年发现的，并于1977年纯化。该酶是由T4噬菌体基因编码，作用是不需要模板。它在体内的作用是参与T4噬菌体，它不参与DNA合成的连接，但在中可能有作用。13DNA聚合酶I的Klenow大片段是用切割DNA聚合酶I得到的分子量76kDa的大片段，具有两种酶活性：(1)；(2)的活性。14反向转录酶

44、除具有以DNA和RNA为模板合成DNA的53合成酶的活性外，还具有4种酶的活性：(1)；(2)；(3)；(4)。15RNA连接酶作用时除了需要ATP和Mg2外，还需要。16DNA聚合酶I是一种单体酶，分子量为109kDa，它含有金属离子。17为了防止DNA的自身环化，可用脱去双链DNA。18T4单核苷酸激酶进行DNA片段的5端标记时，主要是通过两种反应即和。19CIP催化脱磷酸时有两种最适温度，一种是37，适用于端脱磷酸；另一种是56，适用于端脱磷酸。20外切核酸酶可从双链DNA的5端依次切下5单核苷酸，但对不同末端的底物来说，作用效率不同，最高，最低。21EGTA是离子螯合剂。22测序酶是修

45、饰了的T7DNA聚合酶，它只有酶的活性，而没有酶的活性。23切口移位(nicktranslation)法标记DNA的基本原理在于利用的和的作用。24欲将某一具有突出单链末端的双链DNA分子转变成平末端的双链形式，通常可采用或。25反转录酶除了催化DNA的合成外，还具有的作用，可以将DNA/RNA杂种双链中的水解掉。一、填空题1磷酸二酯。2，68；30；51；74；ATP；NAD；1100。3在37下20分钟内催化焦磷酸交换1nmol32p到ATP所需要的酶量4AKomberg；Komberg；polyA。5200；单；双。662；94。7脱氧单核苷酸添加到DNA的3OH端；模板；3；C02+8

46、锌。9S1核酸酶只切割DNA-RNA双链中的环出结构；S1核酸酶不仅切割环出部分，也能切割与环出的相对链10DNA足迹。11DNA的复制；DNA的修复。1263；尾丝的装配；tRNA的修复13枯草杆菌蛋白酶；(1)53合成酶的活性；(2)35外切核酸酶14(1)53外切核酸酶活性；(2)35外切核酸酶活性；(3)DNA内切核酸酶的活性(Mn2+，切割SCDNA)；(4)解旋酶的活性15-SH。16Zn。17碱性磷酸酶；5端的磷酸基团。18交换反应；向前反应。195突出端；平末端和突出的3端205突出末端；3突出末端。21Ca2+。2253合成；35外切。23DNA聚合酶I：53外切核酸酶：53合成酶。24S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平。25核酸水解酶H；RNA。二、判断题1T4DNA连接酶和Ecoli连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接。2T4DNA连接酶和Ecoli连接酶都能催化双链DNA和单链DNA的连接。3反转录酶能够以单链RNA或单链DNA为模板，在引物的引发下合成一条互补的DNA链。以RNA为模板合成的DNA是互补DNA(complementaryDNA，cDNA)。若是以DNA模板合成DNA，dN