植物总多酚常用的含量测定方法有Folin9399.pdf

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1、植物总多酚常用的含量测定方法有 Folin-Ciocalteu 法,酒石酸亚铁法,普鲁士蓝法和高锰酸钾法等。1.福林试液的配制：取钨酸钠 10g 与钼酸钠，加水 70ml、85磷酸 5ml 与盐酸 10ml,置 200ml烧瓶中,缓缓加热回流 10 小时，放冷，再加硫酸锂 15g、水 5ml 与溴滴定液 1 滴煮沸约 15 分钟，至溴除尽，放冷至室温，加水使成 100ml。滤过,滤液作为贮备液。置棕色瓶中,于冰箱中保存。临用前，取贮备液，加水稀释至 10ml，摇匀，即得。用 10mL 乙醇溶液溶解没食子酸，定容至 100mL，分别移取到 100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容。加入福林薛卡多（Fo

2、lin-Ciocalteu）试剂显色，在 765nm波长下测定吸光度。每个浓度做三个平行试验，取平均值，根据标准曲线。取样品溶液 1mL，按照上述的制作方法，测定其吸光度，每个样品做三个平行试验，取平均值，计算样品中的多酚含量。反应原理为酚类化合物在碱性条件下可以将钨钼酸还原，生成蓝色的化合物，颜色的深浅与酚类化合物含量呈正相关，在波长760 nm 左右有最大吸收。2.酒石酸亚铁比色法。其测定原理是茶多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。用分光光度法测定其含量。茶多酚标准溶液的配制称取提取纯品,加水溶解定容至 250mL,混匀,即为每毫升含 1mg 提取纯品的标准溶液(mg/mL)。茶多酚的

3、含量。茶多酚标准曲线的绘制。分别吸取茶多酚标准溶液 1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL 于 4 个 50mL 容量瓶中,各加水至 10mL,再加酒石酸亚铁溶液 10mL,加入 pH 为 7.5 的磷酸缓冲液至刻度,混匀后用 1 比色皿,以空白试剂作参比,于波长 540nm 处测定吸光度(A),绘制出标准曲线。实验十七 食品中多酚类物质的提取与含量测定 一、实验原理 多酚类物质包括花青苷、黄酮苷、单宁等，具体又可分为若干种。多酚类物质 含有酚羟基，有的还含有羧基，属于极性有机化合物，常用极性溶剂提取，如甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、水以及由这些溶剂按比例组成的复合溶剂。由以上溶剂直接提

4、取的多酚物质，实质为各种多酚的混合物（总多酚提取液），不同 的原料中所含酚类物质的种类不同，需要进一步的分离鉴定。常用的植物多酚总量的测定方法中较为普遍使用的方法有:酒石酸亚铁比色法、FD 法、FC 法、普鲁士蓝法等。其中酒石酸亚铁分光光度比色法应用较多。酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生 成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。测定总多酚时所 用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿 茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸 作标准物较合适。二、实验材料、试剂与仪器 材料

5、：茶叶；仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取硫酸亚铁（FeSO47H2O）和酒石酸钾钠(C4H4O6NaK4H2O）,混合后加蒸馏水溶解,定容到 1000mL；（2）pH 磷酸盐缓冲液：称取 Na2HPO412H2O 和 NaH2PO4 12H2O，混合后加蒸馏水溶解,定容到 1000mL。三、操作步骤（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用 标准曲线的制作参照 GB-8313-87茶茶多酚测定方法。为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为时，供试液中茶多酚的浓度为 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。（二

6、）样品总多酚的提取 准确称取磨碎并混匀的茶叶样品于 200mL 三角瓶中，加入 80mL 沸水，并在沸水 浴中保温浸提 30min，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至 100mL。（二）样品多酚提取液的多酚总量测定 吸取 1mL 样品多酚提取液于 25mL 容量瓶中，加入 4mL 蒸馏水和 5mL 酒石酸亚铁 溶液，摇匀，再用 pH 磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。同是以蒸馏水代替样品提 取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用比色皿在 540nm 波长处测定吸光 度。四、计算 式中：A540样品提取液的吸光度；T样品提取液的总体积（mL）；V测定时吸取样品液的体积（mL）；W称取样品的质量（g）；吸光度为时,茶多酚含量的经验值(mg/mL)。