第二章细胞生物学研究方法.ppt
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1、第二章.细胞生物学研究方法显微成像技术细胞化学技术(cytochemistry)细胞培养和细胞融合分离技术分子生物学方法显微成像技术光学和电子显微镜成像原理光学和电子显微镜成像原理三个基本要素:照明系统,被观察的样品,聚焦和成像的透镜系统常用的光学显微镜常用的光学显微镜普通双筒显微镜(binocularmicroscope)荧光显微镜(fluorescencemicroscope)相差显微镜(phasecontrastmicroscope)暗视野显微镜(darkfieldmicroscope)倒置显微镜光学和电子显微镜的基本结构分辨率(resolution)R=0.61/nSinn=聚光镜和物
2、镜之间介质的折射率.空气为1.油为1.5;=样品对物镜角孔径的半角,sin的最大值为1;=照明光源的波长。0.61是一个恒定的参数,表示成像的点虽被重叠但仍能被区别的程度数值孔径越大,进入物镜的光越多;介质的数值孔径越大,进入物镜的光越多;介质的折射率越大,则数值孔径越大,这些都可以折射率越大,则数值孔径越大,这些都可以使分辨率提高使分辨率提高表2-2电子显微镜与光学显微镜的基本区别分辨本领光源透镜真空光学显微镜300nm可见光玻璃透镜不需真空200nm(油镜)可见光玻璃透镜不需真空100nm紫外光玻璃透镜不需真空电子显微镜0.1nm电子束电磁透镜真空电子显微镜与光学显微镜的基本区别细胞化学技
3、术(cytochemistry)酶细胞化学技术酶细胞化学技术(enzyme cytochemistry)通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内的定位免疫细胞化学技术免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)利用免疫反应定位组织或细胞中抗原成分分布的一类技术。主要分为两大类:免疫荧光技术和免疫电镜技术。分离技术分离技术分离技术是一大类技术的总称,包括细胞组分的分离和生物大分子的分离细胞组分的分级分离差速离心:低速高速密度梯度离心:离心介质(蔗糖.甘油.氯化铯)差速离心的原理密度梯度离心分离溶酶体、线粒体和微体CsCl密度梯度离心分离DNA细胞培养细胞培养(cell cultur
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