浙江大学生物化学实验甲 维生素C的定量测定 (2,6-二氯酚靛酚滴定法).ppt

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1、维生素维生素C的定量测定的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）二氯酚靛酚滴定法）1、维生素维生素C简介简介维维生生素素C是是人人类类营营养养中中最最重重要要的的维维生生素素之之一一，食食物物中如缺乏，将会导致坏血病，因此又称为抗坏血酸。中如缺乏，将会导致坏血病，因此又称为抗坏血酸。植植物物的的绿绿色色部部分分及及许许多多水水果果（如如橙橙子子、橘橘子子、苹苹果果、草草莓莓、山山楂楂、鲜鲜枣枣、猕猕猴猴桃桃等等）、蔬蔬菜菜（黄黄瓜瓜、洋洋白白菜菜、西西红红柿柿、豆豆芽芽菜菜、辣辣椒椒等等）中中维维生生素素C的的含含量尤为丰富。量尤为丰富。维维生生素素C为为一一种种稍稍有有酸酸味味的的糖糖类类白白

2、色色晶晶体体，易易溶溶于于水水，不不溶溶于于有有机机溶溶剂剂。在在酸酸性性溶溶液液中中比比在在中中性性及及碱碱性性溶溶液液中中稳稳定定，易易被被热热、光光及及某某些些金金属属离离子子（Cu2+、Fe2+等破坏。等破坏。维生素维生素C的定量测定的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）二氯酚靛酚滴定法）维维生生素素C具具有有很很强强的的还还原原性性，参参与与体体内内多多种种氧氧化化还还原原反反应应，是是一一些些氧氧化化还还原原酶酶的的辅辅酶酶。金金属属铜铜和和酶酶（抗抗坏坏血血酸酸氧氧化化酶酶）可可催催化化维维生生素素C氧氧化化为为脱脱氢氢型型（氧化型）。还原型和氧化型都具有活力。（氧化型）。还原型

3、和氧化型都具有活力。2、维生素、维生素C的测定原理的测定原理 根根据据维维生生素素C的的还还原原性性可可测测定定其其含含量量，常常用用2，6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚测测定定法法。还还原原性性抗抗坏坏血血酸酸能能还还原原染染料料2，6二二氯氯酚酚靛靛酚酚，本本身身则则氧氧化化为为脱脱氢氢型型。在在酸酸性性溶溶液液中中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。维生素维生素C的定量测定的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）二氯酚靛酚滴定法）因因此此，当当用用此此染染料料滴滴定定含含有有维维生生素素C的的酸酸性性溶溶液液时时，维维生生素素C尚尚未未全全部部被被氧氧化化

4、前前，则则滴滴下下的的染染料料立立即即被被还还原原成成无无色色。一一旦旦溶溶液液中中的的维维生生素素C已已全全部部被被氧氧化化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所所以以，当当溶溶液液从从无无色色转转变变成成微微红红色色时时即即表表示示溶溶液液中中的的维维生生素素C刚刚刚刚全全部部被被氧氧化化，此此时时即即为为滴滴定定终终点点。如如无无其其它它杂杂质质干干扰扰，样样品品提提取取液液所所还还原原的的标标准准染染料料量与样品中所含的还原性抗血酸量成正比。量与样品中所含的还原性抗血酸量成正比。00 O CHO CHO C H CHO CH CH2OHO还原型抗

5、坏血酸还原型抗坏血酸 O C O C O C H CHO CH CH2OHO氧化型抗坏血酸氧化型抗坏血酸ClNClOOHClNClOO-ClNClHOOHH还原型还原型2，6-二氯酚靛酚二氯酚靛酚（无色）（无色）氧化型氧化型2，6-二氯酚靛酚（粉红色）二氯酚靛酚（粉红色）（蓝色）（蓝色）H+OH-+（被还原的标准染被还原的标准染料量与样品中所含料量与样品中所含的还原型抗坏血酸的还原型抗坏血酸量成正比）量成正比）维生素维生素C的定量测定的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）二氯酚靛酚滴定法）滴滴定定终终点点：当当溶溶液液从从无无色色转转变变成成微微红红色色（15s内内不不消消退退）时时即即表表示

6、示溶溶液液中中的的维维生生素素C刚刚刚刚全全部部被被氧氧化化，此时即为滴定终点。此时即为滴定终点。2，6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚滴滴定定法法的的特特点点：简简便便，快快速速，比比较较准准确确，适适用用于于许许多多不不同同类类型型样样品品的的分分析析。缺缺点点是是不不能能直直接接测测定定样样品品中中的的氧氧化化型型抗抗坏坏血血酸酸，并并且且，易易受受其其它它还还原原物物质质的的干干扰扰，如如果果样样品品中中含含有有色色素素类类物物质质，还会给滴定终点的观察造成困难。还会给滴定终点的观察造成困难。3、材料与试剂、材料与试剂 、实验材料、实验材料 维生素维生素C的定量测定的定量测定（2，6-二氯酚靛酚

7、滴定法）二氯酚靛酚滴定法）橘子、青椒等。橘子、青椒等。、试验试剂、试验试剂标标准准抗抗坏坏血血酸酸溶溶液液和和2，6-二二氯氯酚酚靛靛酚酚溶溶液液配配制制时时的的注意事项参注意事项参P162。4、操作方法操作方法操作步骤及注意事项参操作步骤及注意事项参P162-P163。5、实验结果及处理实验结果及处理准确纪录所称青椒的克数；准确纪录所称青椒的克数；仔仔细细观观察察滴滴定定终终点点，准准确确记记录录滴滴定定所所用用 2，6-二二氯氯酚酚靛酚的毫升数，代入下列公式计算维生素靛酚的毫升数，代入下列公式计算维生素C的含量：的含量：维生素维生素C的定量测定的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）二氯酚靛酚滴定法）VA：滴定样品所耗用的染料的平均体积（滴定样品所耗用的染料的平均体积（ml）V：滴滴定定空空白白对对照照所所耗耗用用的的染染料料的的平平均均体体积积（ml）C：样品提取液的总体积（样品提取液的总体积（ml）D：滴定时所取的样品提取液体积（滴定时所取的样品提取液体积（ml）T：ml染染料料能能氧氧化化抗抗坏坏血血酸酸的的质质量量（mg）（由由操操 作二计算出）作二计算出）W：待测样品的质量（待测样品的质量（g）维生素维生素C含量（含量（mg/100g样品）样品）=（VA-VB）CTDW 100