课题3　分解纤维素的微生物的分离 (8)(精品)(精品).ppt

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1、课题课题3 分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离吴江汾湖高级中学吴江汾湖高级中学计春娟计春娟1简述纤维素酶的种类及作用2说出刚果红染色法及其原理3掌握从土壤中分离出分解纤维素的微生物的方法、了解这类微生物的应用复习目标复习目标一、纤维素与纤维素酶一、纤维素与纤维素酶纤维素纤维素纤维素酶纤维素酶组成组成分布分布作用作用由葡萄糖组成的多聚体由葡萄糖组成的多聚体由由C C1 1酶、酶、C CX X酶和葡萄酶和葡萄糖苷酶组成的复合酶糖苷酶组成的复合酶棉花、木材、作物秸秆等棉花、木材、作物秸秆等微生物细胞内微生物细胞内与果胶构成植物的细胞壁与果胶构成植物的细胞壁水解纤维素水解纤维素【即时训练

2、即时训练】下列关于纤维素酶的叙述中，错误的是下列关于纤维素酶的叙述中，错误的是()()A.A.纤维素酶只有一种，只能将纤维素分解为葡萄糖纤维素酶只有一种，只能将纤维素分解为葡萄糖B.B.纤维素酶是一种复合酶，至少包括纤维素酶是一种复合酶，至少包括C C1 1酶、酶、C CX X酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶三种组分三种组分C.C.纤维素可被纤维素酶水解成葡萄糖，为微生物提供营养物质纤维素可被纤维素酶水解成葡萄糖，为微生物提供营养物质D.D.分解纤维素的细菌、真菌和放线菌，都是通过产生纤维素酶分解纤维素的细菌、真菌和放线菌，都是通过产生纤维素酶来分解纤维素的来分解纤维素的A A纤维素分解菌纤维素分

3、解菌二、纤维素分解菌的筛选二、纤维素分解菌的筛选1.1.方法：方法：方法一和方法二各自的优缺点方法一和方法二各自的优缺点 2.2.原理：原理：方法一中方法一中NaCl溶液的作用？溶液的作用？二、纤维素分解菌的筛选二、纤维素分解菌的筛选1.1.方法：方法：2.2.原理：原理：刚果红刚果红纤维素分解菌纤维素分解菌刚果红刚果红倒平板倒平板红色红色纤维纤维素分解菌素分解菌NaClNaCl的作用：漂洗，洗去结合不牢的刚果红的作用：漂洗，洗去结合不牢的刚果红染色法染色法优优点点缺点缺点方法一方法一方法二方法二颜色反应基本颜色反应基本上是上是纤维素分纤维素分解菌解菌的作用的作用操作繁琐操作繁琐刚果红会使菌落

4、之间发生刚果红会使菌落之间发生混杂混杂操作简便操作简便、不不存存在菌落混杂问题在菌落混杂问题1.1.产生产生淀粉酶淀粉酶的微生物也产生的微生物也产生模糊透明圈模糊透明圈2.2.有些微生物能有些微生物能降解色素降解色素，形，形成明显的透明圈。成明显的透明圈。R R代表透明圈的直径代表透明圈的直径r r代表菌落的直径代表菌落的直径一般挑选一般挑选R/rR/r的的比值最大的菌落比值最大的菌落R Rr r透明圈大小与透明圈大小与纤维素酶的纤维素酶的量量与活性与活性有关有关三、三、实实 验验 设设 计计土壤取样土壤取样选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释 将样品涂布在鉴别纤将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培

5、养基上维素分解菌的培养基上 筛选产生透筛选产生透 明圈的菌落明圈的菌落三、三、分离分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的实验设计实验设计流程：流程：纤维素纤维素纤维素纤维素梯度稀释梯度稀释鉴别培养基鉴别培养基涂布平板涂布平板透明圈透明圈纤维素分解菌的选择培养基纤维素分解菌的选择培养基培养培养基组成基组成提供主要的营养物质提供主要的营养物质纤维素粉纤维素粉 5gNaNO3 1gKCl 0.5g Na2HPO47H2O 1.2gKH2PO4 0.9g MgSO4 7H2O 0.5g酵母膏酵母膏 0.5g水解酵素水解酵素 0.5g溶解后，蒸馏水定容至溶解后，蒸馏水定容至1000mL水水碳源碳源

6、氮源、无机盐氮源、无机盐无机盐无机盐碳源、氮源、碳源、氮源、生长因子生长因子氮源、生长因子氮源、生长因子培养基组成培养基组成提供的主要营养物质提供的主要营养物质CMC-Na 510g酵母膏酵母膏 1gKH2PO4 0.25g土豆汁土豆汁 100mL琼脂琼脂 15g上述物质溶解后，加蒸馏上述物质溶解后，加蒸馏水定容至水定容至1000mL水水鉴别纤维素分解菌的培养基鉴别纤维素分解菌的培养基(水溶性羧甲基纤维素钠水溶性羧甲基纤维素钠)碳源碳源碳源、氮源、生长因子碳源、氮源、生长因子无机盐无机盐碳源、生长因子碳源、生长因子凝固剂凝固剂项目项目物理性质物理性质微生物生长情况微生物生长情况 目的目的选选择

7、择培培养养基基鉴鉴别别培培养养基基固体培养基固体培养基液体培养基液体培养基增加纤维素分增加纤维素分解菌的浓度解菌的浓度 鉴别微生物鉴别微生物的种类的种类以纤维素作为碳以纤维素作为碳源和能源的微生源和能源的微生物可以正常生长物可以正常生长绝大多数微生绝大多数微生物都可以正常物都可以正常生长生长判断某个培养基是否具有选择作用时，应设立基础培养基进行对照。判断所使用的培养基是否被杂菌污染时，应设立不接该菌种的培养基进行空白对照。未接种培养基未接种培养基 接种培养基接种培养基 无菌落产生无菌落产生有菌落产生有菌落产生课题延伸：课题延伸：(1)(1)为确定透明圈内的菌落是否是纤维素分解菌，需要进行为确定

8、透明圈内的菌落是否是纤维素分解菌，需要进行 的实验，纤维素酶的发酵方法有的实验，纤维素酶的发酵方法有_和和_两种。两种。(2)(2)纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解_等纤维等纤维素后所产生的素后所产生的_进行定量的测定。进行定量的测定。液体发酵液体发酵固体发酵固体发酵滤纸滤纸葡萄糖葡萄糖发酵产纤维素酶发酵产纤维素酶尿素分解菌的分离与尿素分解菌的分离与鉴鉴定定纤维纤维素分解菌的分离与素分解菌的分离与鉴鉴定定分离分离条件条件 作作为为唯一氮源唯一氮源 作作为为主要碳源主要碳源鉴鉴定定方法方法培养基中加入培养基中加入 ，变变在以在以纤维纤维素素为为主要

9、碳源的培养基上，主要碳源的培养基上，利用利用 法，出法，出现现鉴鉴定定原理原理分解尿素的微生物合成分解尿素的微生物合成 ，将尿素分解，将尿素分解产产生氨，使生氨，使PH ，加入酚，加入酚红变红红变红色色分解分解纤维纤维素的微生物素的微生物产产生生 ，将将纤维纤维素分解素分解为纤维为纤维二糖或葡萄糖，二糖或葡萄糖，使使纤维纤维素素-刚刚果果红红复合物降解而出复合物降解而出现现 步步骤骤土壤取土壤取样样制制备备培养基培养基样样品梯度稀品梯度稀释释涂布平板涂布平板培培养养观观察察进进一步一步鉴鉴定定土壤取土壤取样样制制备备培养基培养基 梯度稀梯度稀释释涂布培养涂布培养 挑挑选选菌落菌落进进一步一步鉴鉴定定尿素尿素纤维素纤维素酚红指示剂酚红指示剂红色红色刚果红染色刚果红染色透明圈透明圈脲酶脲酶升高升高纤维素酶纤维素酶透明圈透明圈选择培养选择培养刚果红染色刚果红染色课后作业：课后作业：搜集并讨论分解纤维素的微生物的应用搜集并讨论分解纤维素的微生物的应用在农业、纺织、洗涤、食品、生物能源、造纸等领域在农业、纺织、洗涤、食品、生物能源、造纸等领域