过氧化氢酶活性 演示文稿.ppt

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1、过氧化物酶活性测定过氧化物酶活性测定一、实验目的：一、实验目的：学习和掌握过氧化物酶(POD)活性测定的原理及方法。二、实验原理二、实验原理:在通常情况下，需氧生物在还原氧至水的过程中会产生氧气，植物细胞中电子传递不通畅时，会产生一系列活性氧（超氧阴离子自由基，羟自由基，单线态氧，过氧化氢），会直接或间接启动膜脂过氧化作用，导致膜的损伤和破坏。过氧化物酶广泛存在于植物体中，是生物体内存在的一种防护氧自由基对细胞膜系统伤害的酶，在细胞膜产生过氧化物的破坏有保护作用，在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。过氧化物酶能催化过氧化氢氧化酚类，产物为醌类化合物,此化合物进一步缩合或与其他分子缩合，产

2、生颜色较深的化合物。本实验是以邻甲氧基苯酚（即愈创木酚）为过氧化物酶的底物，在该酶存在下，H2O2可将邻甲氧基苯酚氧化成红棕色的4-邻甲氧基苯酚，其反应为：该红棕色的物质在波长470nm处有最大光吸收，故可通过测470nm处的吸光度变化来测定过氧化物酶的活性。器材与试剂n1 实验仪器：分光光度计，离心机，秒表，天平，研钵。n2 实验试剂：50mmol/L磷酸缓冲液,50mmol/L愈创木酚溶液，2%过氧化氢。n3 实验材料：小麦（营养液，盐胁迫）。实验步骤n1.粗酶液的提取 称取植物材料0.5g，加5ml50mmol/L 磷酸缓冲液,于研钵中研磨成匀浆，以4000r/min离心15min，残渣再用5ml 磷酸缓冲液提取一次，合并两次上清液,25ml容量瓶定溶，保存在冷处。n2.酶活性的测定 n取光径1cm比色杯2只，于1只中加入磷酸缓冲液1ml,50mmol/L愈创木酚溶液1ml，2%过氧化氢1ml，作为校零对照；另一只加入50mmol/L愈创木酚溶液1ml，2%过氧化氢 1ml，上述酶液1ml（如酶活性过高可适当稀释），立即开启秒表计时，于分光光度计470nm波长下测量OD值，每隔1min读数一次。以每分钟OD变化值表示酶活性大小，即以A稀释倍数（min鲜重g）表示。注意事项n酶的提取需要在低温下进行。