新型植物基因组DNA快速提取试剂盒使用说明书.docx

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1、 型植物基因组DNA快速提取试剂盒 名目号 DN15 使用手册 试验室使用，仅用于体外杭州昊鑫生物型植物基因组 DNA 快速提取试剂盒名目号：DN15名目编号DN1501 DN1502 DN1503包装单位50次100次200次适用范围：适用于快速提取植物组织、细胞、真菌基因组DNA杭州昊鑫生物- 1 -试剂盒组成保存50 次100 次200 次RNase-20250 l500 l1 ml缓冲液 AP1室温25 ml50 ml100 ml缓冲液 AP2室温10 ml 15 ml20 ml 25 ml40 ml50 ml试剂盒组成、储存、稳定性：A(10mg/ml)杭州昊鑫生物- 2 -缓冲液

2、AP3/E漂洗液 WB室温第一次使用前按说明加指定量乙醇15 ml25ml50ml室温第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液 EB 室温吸附柱 AC室温收集管2ml 室温15 ml 50 个50 个20 ml 100 个100 个40 ml 200 个200 个本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。储存事项:1. 裂解液 AP1、AP3/E 低温时可能消灭析出和沉淀，可以在 65水浴几分钟帮助重溶解AP3 参加乙醇前可加热，参加乙醇后不行加热，恢复澄清透亮后冷却到室温即可使用。2. 避开试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化，各溶液使用后应准时盖紧盖子。v 产品介绍：该试

3、剂盒承受 DNA 吸附柱和型独特的溶液系统，适合于从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简洁地提取基因组 DNA。可在 30 分钟内完成一个或多个100mg 颖或 20mg 枯燥的植物样品 DNA 的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的 DNA 可直接用于 PCR、酶切和杂交等试验。颖或枯燥的植物组织细胞磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组 DNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗离心的步骤, 进一步将多糖，多酚和细胞

4、代谢物，蛋白等杂质去除， 最终低盐的洗脱缓冲液将纯洁基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。v 产品特点：1. 离心吸附柱内硅基质膜全部承受进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异微小， 可重复性好。抑制了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。2. 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。3. 快速，简捷，单个样品操作一般可在 1 小时内完成。4. 数种去多糖、多酚成份和屡次柱漂洗确保高纯度， OD260/OD280 典型的比值达1.71.9，可直接用于PCR，Southern-blot 和各种酶切反响。留意事项1. 全部的离心步骤均在室温完成，使用转速可以到达13，000 rpm的传统台式离心机，

5、如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。2. 开头试验前将需要的水浴先预热到 65备用。3. 缓冲液 AP3/E 中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避开沾染皮肤，眼睛和衣服。假设沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。4. 不同来源的植物组织材料中提取DNA 的量会有差异，一般100mg颖组织典型产量可达3-25g。5. 洗脱液 EB 不含有螯合剂 EDTA， 不影响下游酶切、连接等反响。也可以使用水洗脱， 但应当确保 pH 大于 7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA 应当保存在20。DNA 假设需要长期保存，可以用 TE 缓冲液洗脱10mM Tris-H

6、Cl， 1mM EDTA，pH 8.0，但是 EDTA 可能影响下游酶切反响，使用时可以适当稀释。v 操作步骤：试验前请先阅读留意事项 提示： 第一次使用前请先在漂洗液 WB 中参加指定量无水乙醇，充分混匀，参加后请及时在方框打钩标记已参加乙醇，以免屡次参加! 第一次使用前请先在缓冲液 AP3/E 中参加指定量无水乙醇!1. 取适量植物组织颖组织 100 mg 或干重组织 20 mg，可适当多取一些样品弥补粘在研钵上的损失在研钵中参加液氮充分碾磨成细粉。研磨前，可预备一个 1.5ml 离心管，参加 400l 缓冲液 AP1 和 4l RNase A(10 mg/ml)室温备用。2. 转移细粉颖

7、组织100 mg 或干重组织 20 mg到前面预备的 1.5ml 离心管已参加 400l 缓冲液 AP1 和 4l RNase A(10 mg/ml)旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。假设组织裂解困难，可依据需要加一个轻柔匀浆 10 秒的步骤帮助裂解。大多数状况下不需要离心去除未完全裂解的组织，由于后面有一个离心去除的步骤。3. 65水浴 10 分钟，在水浴过程中颠倒离心管 2-3 次，混合样品。4. 参加 130 l 缓冲液AP2，充分混匀，冰上放置 5 分钟， 14,000 rpm 离心 5-10 分钟，留神吸取上清到一个的 1.5ml 离心管，留意不要吸到界面物质。5. 计算上清量，参加 1.

8、5 倍体积的 AP3/E请先检查是否已参加无水乙醇!，马上吹打混匀。参加 AP3/E 可能会消灭絮状沉淀，但不影响 DNA 提取。留意将 AP3/E 直接参加到上清并马上吹打混匀。6. 将上一步所得混合物包括可能消灭的沉淀参加一个吸附柱 AC 中，吸附柱放入收集管中13,000 rpm 离心 30-60 秒，倒掉收集管中的废液先加 650l 离心， 弃废液，再参加剩余的溶液，再次离心。7. 参加 600l 漂洗液WB请先检查是否已参加无水乙醇!，12,000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。8. 参加 600l 漂洗液 WB，12,000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。9. 将吸附柱 A

9、C 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反响。10. 取出吸附柱 AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 100l 洗脱缓冲液 EB洗脱缓冲液可事先在 65-70水浴中预热， 室温放置 3-5 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟。将得到的溶液重参加吸附柱中，室温放置 2 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高，假设估量和需要产量高，可增大洗脱体积，假设 需要 DNA 浓度较高，可以适当削减洗脱体积， 但是最小体积不应少于 50，l 体积过小降低 DNA 洗脱效率，削减 DNA 产

10、量。11. DNA 可以存放在 2-8,假设要长时间存放，可以放置在20。问题与解决方法问题评论与建议DNA 产量低RNA 残留未提取到 DNA离心柱堵塞*处理材料过量或者裂解不完全 -建议： 使用适量的起始材料，充分研磨或者匀浆*结合条件不恰当-建议：步骤 5 准确估量上清量，参加 1.5倍体积 AP3/E 量要准确*植物 RNA 含量太丰富-建议：提高 RNase A 处理浓度*漂洗液 WB 中遗忘加无水乙醇-建议：第一次试验时，在漂洗液 WB 中参加指定量无水乙醇。*研磨裂解不充分，团块多；裂解物太粘稠；离心力太小 - 建议：参见步骤 2，加一个离心步骤去除；减低起始材料量，不要处理过量

11、，加大离心力洗脱下来的*漂洗次数不够-建议：步骤 8 完成后，加 500l 乙醇再漂洗DNA 溶液带颜色一遍或者膜上有明显的色素残留洗脱下来的DNA 产量低*起始材料太多过量-建议：削减起始处理材料，不要过量*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇-建议：确保做了步骤 9，否则残留乙醇会影响洗脱效率。*使用了水或者其它非最正确液体代替洗脱缓冲液-建议：认真阅读步骤 10 和留意事项 5 和只使用洗脱缓冲液EB 洗脱。*洗脱缓冲液量偏低-建议：使用 200l 洗脱缓冲液洗脱A260吸光值*一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了吸光值-建议：将特别偏高洗脱的基因组 DNA 溶液 13,000rpm 再离心一分钟，留神取上清使用。*一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反响-建议： 将洗脱的基因组 DNA 溶液 13,000rpm 再离心一分钟，小DNA 下游酶切不能切开或者酶切不完全心取上清使用。*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反响-建议：确保做了步骤 9，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。