南昌市水体、水产品霍乱弧菌污染状况调查和流行病学研究可行性研究报告.pdf

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1、 南昌市水体、水(海产品中霍乱弧菌污染状况的调查及流行病学研究可行性研究报告 一、总论(一项目的主要内容及技术原理简述 霍乱是由 O1 群霍乱弧菌和 O139 群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病,也是中华人民共和国传染病防治法中规定必须实施“强制管理”的两个甲类传染病之一,它发病急,传播快,波及范围广,能引起大流行。我市于 1978年 9 月出现建国后首例霍乱病例,1978年至 2005年 6 月我市累计发病 806例,其中死亡 21例。霍乱经水和食物传播,人群中的霍乱暴发流行来自于自然水体的产毒霍乱弧菌及其污染的海、水产品,开展对水体、水(海产品霍乱弧菌污染状况的监测工作,对了解霍乱弧菌在自然生

2、态环境中菌群变化、分析人群霍乱暴发的原因,人群生活环境中霍乱弧菌的污染状况,预测霍乱的局部地区和大范围的暴发的危险性有重大意义。1978年至今我市共有 17个年份出现不同程度的霍乱疫情,其中 1978、1980、1987、1994、1998、1999和 2001年出现一定规模的暴发流行,1994年2005年 6月在外环境水体及水(海产品中都采集到一些阳性标本,因此霍乱防制工作应常抓不懈。为此,本课题拟对南昌市各大水系(特别是发生过疫情的区域水系及水(海产品在霍乱可能发生的月份进行系统地监测,从而了解我市水体、水(海产品霍乱弧菌污染状况,并对监测中发现的霍乱弧菌分离株的毒力特征、生物学性状进行分

3、析,建立我市霍乱弧菌生物学性状数据库,对监测中分离到的菌株及近年来在病人及带菌者中分离到的流行菌株进行分子生物学同源性分析,研究其分子生物学特征及其流行病学意义。(二目的和意义 本项目旨在通过对我市水体、水(海产品中霍乱弧菌的系统监测,了解我市水体,水(海产品霍乱弧菌的污染状况,采用聚合酶链反应(PCR 方法对检出的霍乱弧菌的毒力特征进行分析,可以了解菌株的生物学性状,是否为产毒株,是否有致病力,采用核酸脉冲电泳场技术(PFGE 对水体、水产品中分离株和近年来霍乱病人及带菌者中的分离株进行同源性分析,可以了解其分子生物学特征及流 行病学意义。项目的实施能够为我市制定霍乱防制策略提供依据,使我市

4、的霍乱防制工作更科学、更有效、更有针对性,避免社会资源的盲目使用而造成的浪费。(三相关技术领域国内外发展现状、趋势 霍乱弧菌经水和食物传播,人群中的霍乱暴发流行来自于自然水体的产毒霍乱弧菌及被产毒霍乱弧菌污染的海、水产品。自然水体,尤其是沿海水域、河口和内陆河流湖泊是霍乱弧菌的自然生境,在我国这些水域同时也分布着海水、淡水产品养殖基地,另外因为霍乱病人粪便也常污染人群生活邻近水体,这些水体中霍乱弧菌依附浮游生物生存。随着我国的改革开放和加入世界贸易组织(WTO,旅游、商贸活动日渐频繁,霍乱存在传入和传出的可能,可引起超越国界、洲界传播,甚至形成世界大流行。开展对水体、水产品的监测及污染状况的调

5、查,对监测霍乱弧菌在自然生存环境中的菌群变化、分析人群霍乱暴发的原因,人群生活环境中霍乱弧菌污染状况,预测霍乱的局部地区和大范围的暴发流行的危险性有重要作用。在中国,许多学者对本地区的自然水体和水生动物开展了霍乱弧菌的监测及流行病学分析,刘红露等对四川省 2004 年霍乱弧菌疫情分离株与常规监测的外环境及水产品中霍乱弧菌分离株进行了遗传相关性的研究,结果从分子水平证实受试菌株均为 O139 群霍乱弧菌,河水中分离的 6株菌是非产毒株,其余菌株均为具有致病性。环境水分离的 O139 群非产毒株之间及产毒株与非产毒株之间遗传相关性较远。产毒株之间有较高的同源性。从甲鱼分离的 O139 群霍乱弧菌与

6、同期流行的 O139群霍乱弧菌的经脉冲场凝胶电泳(PFGE 进行的菌株分子分型结果显示带型一致,提示甲鱼可能是四川省近年霍乱疫情主要来源之一。李孝权等 2004 年 6 月采集广州市 3 家较大的水产品市场的海、水产品以及广州以往水型霍乱流行沿海地区的河水和珠江入海口海水,采用 PCR 方法对样本中检出的霍乱弧菌分离株进行毒力基因的检测,用随机扩增多态性分析结合 SPSS 软件对以上菌株进行多态性分析,对霍乱弧菌毒力进行快速测定并进行分子分型,结果分离到的 34株霍乱弧菌均为 O1群霍乱弧菌非流行株,均为海南输入株,其中 31 株属于同一来源,只有 3 株菌与其他菌株的同源性有差异。但亲 缘关

7、系较近。近年来许多出入境检验检疫部门的工作人员对进口的海、水产品及出入境口岸的水体进行了霍乱弧菌的监测。厦门出入境检疫局刘光明等在对牛蛙进行霍乱菌检测鉴定中,采用了以血清免疫学为主,结合生物化学与形态特点以及基因检测综合作出判断的方法进行了调查,共检出 3 株符合 O1 群埃尔托型霍乱弧菌生物学特性的菌株。血清分析为稻叶型,噬菌体生物分型为 30K。广州出入境检疫局黄来玲等从进口活甲鱼中检出小川型霍乱弧菌。陈学军等对深圳本地、内地及进口来源的水产品进行霍乱弧菌检测,本地来源水产品未检出霍乱弧菌,内地来源水产品霍乱弧菌阳性率 0.06%,进口水产品检出霍乱弧菌阳性率 3.2%,分离的 O1 群菌

8、株为产毒株,分离的 O139 群菌株为非产毒株。于兵等对丹东口岸中朝界河(鸭绿江水体进行霍乱监测,检出 1株 O139 群霍乱弧菌。由此可以认为随着我国对外开放特别是加入 WTO后,我国通过进口的海、水产品传入霍乱弧菌的可能性越多越大。近年来,核酸脉冲电泳场技术(PFGE的发展和日益成熟,为流行病学的传染来源追踪、菌株的同源性研究提供了一种很好的研究手段。扈庆华等采用病原学方法和PFGE技术对深圳市某一霍乱疫点进行了分子流行病学调查,采集的病人和密切接触者的肛拭子标本、发生疫情的某一自然村的海鲜批发市场的污水、沙白、花蛤等标本,均检出小川型霍乱弧菌。从分子水平角度看,5 株菌株的基因型完全一致

9、,为同一克隆的流行株,也进一步证明市场是这一霍乱疫点的传染来源。霍乱是由 O1 群霍乱弧菌和 O139 群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病,也是中华人民共和国传染病防治法中规定必须实施“强制管理”的两个甲类传染病之一,本病可通过水、水(海产品的传播而引起爆发或流行。目前对水体、水(海产品霍乱弧菌的污染状况及流行病学研究已受到各地学者的关注。通过对水体、水(海产品霍乱弧菌的监测引进新技术,对分离到的菌株进行毒力基因的检测,了解菌株生物学性状,是否为产毒株,是否有致病力,建立我市霍乱弧菌生物学性状数据库,与同期霍乱病人或带菌者中分离到的菌株进行同源性研究,对制定本地区的霍乱防制策略有着重大的意义。因此

10、 对本地区的水体、水(海产品开展定期的霍乱弧菌污染状况的监测,并依据检测结果,采取相应的霍乱防制策略,能有效地防止霍乱的流行和蔓延。经资料检索和查新,目前省内无本课题的相关文献报道。为了填补省内空白,更为了有效地开展我市霍乱防制工作,拟对南昌市水体,水(海产品开展污染状况的调查和流行病学研究。本课题运用国内先进的监测手段实施,设计科学合理,创新性、实用性强。通过项目实施,可以了解我市水体、水产品中霍乱弧菌污染状况、霍乱弧菌分离株的生物学特征,为我市实施霍乱防制策略提供依据,使我市的霍乱防制工作更科学、更有效、更有针对性。将为我市乃至我省预防和控制霍乱的发生和流行积累经验,提供方法,完善策略。(

11、四申请单位及项目主要负责人的基本情况 申请单位人才资源情况的基本情况:项目负责人基本情况:本课题第一负责人,主管医师,负责我市传染病防制工作,并在国家级刊物发表多篇专业论文。第二负责人,副主任医师,为我市疾病控制专家,工作经验丰富,且在国家、省级刊物发表多篇论文。课题组人员专业职称结构:本项目的负责与主要参与人员均由专业技术人员构成,其中负责人为 1名高级职称人员、1 名中级职称人员,主要参与人员有 2 名中级职称人员,3名初级职称人员,其构成情况如下:专业类别高级职称人数中级职称人数初级职称人数合计预防医学 123临床医学22卫生检验 112 项目组人员构成情况 序号姓名 性 别 年 龄 技

12、术职称 从事 专业 单位课题分工 1 吴景文男 38 主管医师预防医学 南昌市疾控中心 设计、主持课题,调查、统计分析 2 徐丹男 43 副主任医师预防医学 南昌市疾控中心 设计、调查、统计 分析 3 蔡丹桃女 35 主管医师预防医学青山湖区卫生防疫站调查、统计分析 4 胡主花女 27 技师卫生检验南昌市疾控中心检验 5 涂正波男 24 医师临床医学南昌市疾控中心调查、汇总资料 6 况晓珊女 52主管技师卫生检验青山湖区卫生防疫站调查、检验 7 吴玉铮女 28 医师临床医学南昌市疾控中心调查、汇总资料(五有关项目的现有公众基础和支撑条件 本课题负责人为我市疾病控制专家,参与过多项课题的研究工作

13、,并在国家级、省级刊物发表多篇论文。课题组成员为从事传染病 防制和卫生检验的专业人员,业务水平高,技术力量强,具有丰富的 理论知识和实践经验,并进行了大量的前期研究工作,课题申报单位 和协作单位具备开展霍乱防制项目研究的能力,并承诺保证必要的经 费投入,提供一切技术和后勤保障,以圆满完成课题计划。二、课题实施方案(一项目的目标 本研究项目是对我市水体、水(海产品进行霍乱弧菌污染状况的调查和流行病学研究。目标是了解我市水体、水产品中霍乱弧菌的 污染状况,并对监测中霍乱弧菌分离株的毒力特征进行检测,对水体、水(海产品中检出的分离株、近期霍乱病人或带菌者检出的分离株 进行同源性分析,研究其分子特征及

14、流行病学意义。(二项目的主要研究内容 本课题针对人群中霍乱的发生、流行来自于自然水体的产毒霍乱弧菌及其污染的水体、水(海产品这一特点,应用国内先进的检测 技术进行实施。在二年的项目周期内,按照全国水系霍乱弧菌监测 点监测技术规范的要求进行监测,并采用 PCR 技术对监测中检出 的霍乱弧菌分离株进行毒力基因检测,了解菌株的生物学性状,是否 为产毒株,是否具有致病力,建立我市霍乱弧菌生物学性状数据库,采用 PFGE技术对监测中检出的分离株、同期霍乱病人或带菌者中的 分离株进行同源性研究。(三调查研究规模及地点 调查地点选择我市 9个县、区及 3 个开发区,其中青山湖去为重点区域,调查实践为每年的

15、410 月,连续调查 2 年,检品约 5264 件。(四主要技术关键及创新点 1、在霍乱可能发生流行的季节按月定期在南昌市范围内开展水 体、水产品霍乱弧菌的监测。在霍乱多发地区容易受污染,或污染后 容易造成人群感染的水体（如湖泊、水产品养殖区、沟塘、水产品码 头、渔港、城市下水道排出口、自来水厂水源水及卫生河等）区域设 立固定取水点，每点采集 2 份水样，每月一次。在霍乱高发季节，对 市售水（海）产品、餐馆内水（海）产品及养殖场的水产品进行采样 监测，每月一次。2、从所有水体、水（海）产品中检出的霍乱弧菌都进行产毒性 检测，而对从上述样本中检出的霍乱弧菌以及病人或带菌者检出的产 毒霍乱弧菌还进

16、行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析。本项目的创新点：不论是 O1 群或者 O139 群霍乱弧菌，都分为产 毒株和非产毒株，这两类菌株在致病力、分子遗传学特征和引起疾病 的流行病学特点方面均有显著的不同，产毒株的致病力强，具有引起 流行和大流行的潜力，而非产毒株存在于自然水体中，一般不致病或 仅引起散发的腹泻病例。通过本项目的实施，可以了解我市水体、水（海）产品的污染状况、菌株的生物学性状，这对于采取适宜的防制 策略有决定性的意义，避免由于在水体和水（海）产品中检出霍乱弧 菌而采取的过于严格的预防控制措施，减少人力、物力、财力的浪费，并为疾病控制部门追溯传染来源、传播途径和分析流行形式提供重要 的

17、依据。经检索国内同类研究，国内学者的研究大多为回顾性研究，且缺乏长期、系统的观察。本项目按科研课题的要求进行严格的设计 实施调查，能保证调查的合理性和实验结论的可信性。由于我市已列 为全国霍乱监测点，监测中检出的霍乱菌株产毒性检测和 PFGE 分析 有由中国疾病预防控制中心负责检测，保证了检测结果的权威性。（五）实施方案 1、选择南昌市 9 个县（区）及 3 个开发区作为监测范围，对所 有参与监测的人员进行系统的培训，规范监测技术，制订监测方案。2、本项目实施时间为二年，开展监测的时间定为每年 410 月份。3、对监测中检出的霍乱弧菌及同期病人或带菌者中检出的霍乱 弧菌及时送中国疾病预防控制中

18、心进行相关检测。（六）各阶段目标 1、2005 年 3 月确定我市水系、水产品霍乱弧菌监测方案，4 月 开始全面监测。410 月为全面监测月份。2、2005 年 6 月召开南昌市霍 乱防制技术培训班，进一步规范监 测技术。3、2005 年 1112 月把监测中检出的分离株与近年来和同期的病 人和带菌者的分离株送中国疾控中心做产毒检测和 PFGE 检测。4、2006 年 4 10 月进行全面监测。5、2006 年 1112 月把监测中检出的分离株和同期的病人及带菌 者的分离株送中国疾控中心做产毒性检测和 PFGE 检测，建立我市霍 乱弧菌生物学性状数据库。6、2007 年 24 月完成相关论文的

19、写作。7、2007 年 910 月申请课题鉴定。（七）项目预期经济效益 项目实施后，可以引进并独立开展霍乱弧菌产毒性检测技术，避 免由于在水体和水产品中检出霍乱弧菌而采取的相应的过于严格的 预防控制措施，减少人力、物力、财力的浪费，特别是减少对饮用水 加大投氯量而产生的费用，预计每年将减少费用约 20 万元。（八）项目预期社会环境效益 本项目实施后能够使我市的霍乱防制工作更科学、更有效、更有 针对性，也使我市霍乱防制工作能有序地进行，防止“谈霍乱色变”，减少社会资源和卫生资源的浪费，社会更安定，更和谐。（九）项目工作进度安排 起止年月 2005 年 3-10 月 2006 年 4-10 月 2

20、007 年 2-10 月 主要工作 确定监测点、人员培训，开展全面监测 开展全面监测 论文写作、申请课题鉴定 资金使用安排（万元）自筹资金 0.5 0.25 0.5 0.25 0.1 三项经费 0.75 0.25 0.75 0.25 0.2 2005 年 11-12 月 菌株产毒性检测、PFGE 检测 2006 年 11-12 月 菌株产毒性检测、PFGE 检测（十）项目实施风险分析 1、培训监测技术人员，保证经费地投入，对本项目的顺利实施 有重要的作用。2、由于实验技术不规范，导致监测过程中霍乱弧菌检出率低对 本项目的实施有重大的影响。参考文献：1 魏承毓 我国霍乱的流行特征和防控对策。中国

21、公共卫生，2004，20（7）：894 2 刘红露、祝小平、冯泽惠、徐跃方、罗隆泽、李燕春 脉冲场凝胶电泳分型方法追 溯霍乱传染源，预防医学情报杂志。2005，21（2）3 李孝权、王鸣、易鸿、刘于飞等，广州水产品监测中霍乱弧菌分离株的分子特征研 究。华南预防医学 2005，31（2）：35-38 4 刘光明、张人参等，从牛蛙体中分离于 O1 群霍乱弧菌的鉴定报告，J中国国境检 疫杂志，2000。5 黄素玲、叶显，从进口甲鱼中检出霍乱弧菌小川型 9K，（J）中国卫生检验杂志，2001-74-74。6 陈学军、谢昭聪，水体及水产品霍乱弧菌疫源监测研究，实用预防医学，2002，9（1）-68-70（7）于兵、麻丽丹、李劲革、曹际娟，丹东口岸国境外环境水体检出 O139 群霍乱弧 菌，中国国境卫生检疫杂志，2004,27(4-204-205。8 ChuG,D Vourath,RW Davis,etal.Sepration of large DNA moleculesy Contour-clamped homogeneous electric field J.Science,234:1582-1585 9 核酸脉冲电泳场技术在霍乱分子流行病学调查中的应用，现代预防医学-2002，29（4）-568-569。