新型冠状病毒样本保藏要求(T-CPMA 019—2020).pdf

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1、 ICS 11.020 CCS C 04 团体标准 T/CPMA 0192020 新型冠状病毒样本保藏要求 Requirements for preservation of SARS-CoV-2 samples 2020-12-30 发布 2021-05-01 实施 中华预防医学会 发 布 T/CPMA 0192020 目 次 前言.3 1 范围.4 2 规范性引用文件.4 3 术语和定义.4 4 基本要求.6 5 新冠样本保藏信息.6 6 新冠样本保藏条件.9 附录 A(资料性)临床样本描述示例.10 附录 B(资料性)环境样本描述示例.11 附录 C(资料性)新冠痰液、粪便样本采集及处理程

2、序.12 附录 D(资料性)新冠环境样本采集及处理程序.13 参考文献.14 T/CPMA 0192020 前 言 本文件按照 GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由中华预防医学会归口。本文件起草单位：中国疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心传染病预防控制所、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所、首都医科大学附属北京地坛医院、北京市疾病预防控制中心。本文件主要起草人：姜孟楠、武桂珍、魏强、王多春、侯雪新、王衍海、赵莉、王雅杰、陈丽娟、崔淑娟、李振军。T/CPMA 0192020 新型冠状病毒样本保藏要求 1 范围 本文件规定了新型

3、冠状病毒样本（简称“新冠样本”）保藏的基本要求、保藏信息与保藏条件。本文件适用于各级病原微生物菌（毒）种保藏中心、保藏专业实验室等保藏机构，病原微生物菌（毒）种及样本的保存、保管和使用等机构规范内部新冠样本的保藏与保存，也适用于相关监管部门评价该机构保藏/保存新冠样本的能力。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。WS 315 人间传染的病原微生物菌（毒）种保藏机构设置技术规范 T/CPMA 0112020 病原微生物菌（毒）种保藏

4、数据描述通则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 病原微生物 pathogenic microorganisms 可以侵犯人、动物，引起其感染甚至传染病的微生物。注：注：主要包括病毒、细菌、真菌、立克次体、寄生虫等。3.2 菌（毒）种 microorganism strain 可培养的病毒、细菌、真菌、立克次体等具有保存价值的，经过鉴定、分类并给予固定编号的病原微生物。3.3 样本 samples 可能含有病原微生物，具有保存价值的人和动物的体液、组织、排泄物等物质，以及环境样本等。3.4 T/CPMA 0192020 新型冠状病毒 severe acute respirato

5、ry syndrome coronavirus 2；SARS-CoV-2 引起新型冠状病毒肺炎的病原体，为冠状病毒属的一个种。注：注：2020 年 2 月 11 日，国际病毒分类委员会将新型冠状病毒命名为严重急性呼吸综合征冠状病毒 2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）。3.5 新型冠状病毒肺炎 coronavirus disease 2019；COVID-19 由新型冠状病毒引起的以发热、乏力、干咳、肺炎为主要临床表现的传染性疾病，少数患者有鼻塞、流涕等表现。约半数患者多在一周后出现呼吸困难，严重者快速进展为

6、急性呼吸窘迫征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。注注 1 1：临床将新型冠状病毒肺炎分为轻型、普通型、重型、危重型。注注 2 2：2020 年 2 月 11 日，世界卫生组织将该疾病命名为 2019 冠状病毒病（COVID-19），2020 年 2月 21 日，我国国家卫生健康委员会统一命名的中文名称为新型冠状病毒肺炎，英文与世界卫生组织一致采用 COVID-19。3.6 保藏 preservation 保藏机构以适当的方式收集、鉴定、编目、储存菌（毒）种或样本，维持其活性和生物学特性，并向合法从事病原微生物相关实验活动的单位提供菌（毒）种或样本的活动。3.7 保藏机构 p

7、reservation organization 按照规定接收、集中储存与管理菌（毒）种或样本，并能向合法从事病原微生物实验活动的实验室供应菌（毒）种或样本的机构。3.8 保存单位 preservation institution 按照国家有关要求，以保存为目的的保存、保管、使用病原微生物菌（毒）种或样本的机构，包括被省级卫生健康行政部门指定的新冠样本保存机构。4 基本要求 4.1 具有保存高致病性病原微生物样本的设施设备条件，并符合 WS 315 中的高致病性病原微生物保藏区域的相关规定。4.2 保藏/保存新冠样本的机构应有符合要求并经备案的生物安全二级（BSL-2）实验室，满足样本的接收、

8、分装和制备等工作需要。应有符合操作新冠样本的个人防护装备，并能保障人员健康安全。4.3 原则上应经省卫生健康行政部门指定。T/CPMA 0192020 4.4 从业人员应获得相关的培训、技能证明，具有一定工作经验，通过生物安全培训，并获得培训有效性证明。4.5 应制定新冠样本保藏/保存相关工作制度，主要包括人员准入要求、出入库、个人防护、消毒、样本接收、提供与运输审批等。4.6 新冠样本出入库、制备、销毁等应有记录，归档管理并符合相关规定。4.7 应建立生物安全风险评估报告、意外事故应急预案与应对措施。4.8 新冠样本处理、运输、废物管理以及实验室生物安全操作失误或意外的处理等参见 新型冠状病

9、毒实验室生物安全指南。4.9 新冠相关数据描述信息，应符合 T/CPMA 011-2020 的规定。5 新冠样本保藏信息 5.1 临床样本信息 临床样本信息应符合表 1 的规定，临床样本描述示例参见附录 A，动物样本信息可参考使用。表 1 临床样本信息 信息信息 说明说明 基本信息a 中文名称 新型冠状病毒临床样本 外文名称 SARS-CoV-2 clinical samples 样本描述信息 样本编号a 描述该样本在保存单位内部的唯一编号 原始编号 描述该样本在采集或保存单位内部的最原始的编号 样本名称a 包括但不限于患者鼻拭子、咽拭子、肺泡灌洗液、血液、粪便、尿液等 样本量a 描述每份样本

10、的量，液体，单位为毫升（mL）；固体，单位为克（g）来源历史 描述该样本在保存单位之间的转移情况。保存单位前以左指向箭头“”开头，保存单位之间用左指向箭头连接，如没有转移情况，填写“无”保存时间a 样本入库保存时间描述。格式均为 YYYY-MM-DD，其中YYYY 为年，MM 为月，DD 为日 病例信息 患者基本信息 患者姓名 描述患者的姓名，如“张三”“李四”“Tom Cruce”等 患者性别a 描述患者的性别，如“男”“女”患者年龄a 描述患者的周岁年龄，如“50”“不详”病例类型a 按照新型冠状病毒感染的肺炎疫情防控工作方案（现行版本）对于病例类型的描述，包括疑似病例、确诊病例、无症状感

11、染者等。若为确诊病例请注明：轻型、普通型、重型和危重型 发病时间a 患者发病时间描述。格式均为 YYYY-MM-DD，其中 YYYY为年，MM 为月，DD 为日 T/CPMA 0192020 就诊时间 患者就诊时间描述。格式均为 YYYY-MM-DD，其中 YYYY为年，MM 为月，DD 为日 采集 信息 采集时间a 样本采集时间描述。格式均为 YYYY-MM-DD，其中 YYYY为年，MM 为月，DD 为日 采集地址a 描述样本采集地点，指明采集的国家、省份、市、区县。如有采集点海拔单位为米（m）、经纬度（东经（E），北纬（N），单位为度（）、采集时温度单位为摄氏度（），则注明 采集区域 描

12、述样本采集的具体地理位置或单位名称，如武汉金银潭医院、武汉体育中心方舱医院、北京地坛医院等 采集单位 描述实施样本采集的具体单位名称，如武汉金银潭医院、北京地坛医院、北京市疾病预防控制中心等 检测 信息 检测时间a 对该样本进行检测的时间描述。格式均为 YYYY-MM-DD，其中 YYYY 为年，MM 为月，DD 为日 检测方法 对该样本检测方法的描述，包括但不限于核酸检测、抗体检测等 检测结果 对应检测方法而得到的结果，如阴性/阳性、CT 值或滴度等 检测单位 对该样本实施检测的单位名称，如武汉金银潭医院、北京地坛医院、北京市疾病预防控制中心等 保存单位联系信息a 联系人 描述保存单位的具体

13、联系人姓名 联系电话 描述保存单位联系电话 联系人邮箱 描述保存单位具体联系人的电子邮箱 联系人所在单位 描述保存单位的具体名称 a样本保藏必要信息，其余为非必要信息。T/CPMA 0192020 5.2 环境样本信息 环境样本信息应符合表 2 的规定，环境样本描述示例参见附录 B。表 2 环境样本信息 信息信息 说明说明 基本信息a 中文名称 新型冠状病毒环境样本 外文名称 SARS-CoV-2 environmental samples 样本信息 样本编号a 描述该样本在保存单位内部的唯一编号 原始编号 描述该样本在采集或保存单位内部的最原始的编号 样本名称a 描述样本采集地的环境位置，如

14、水产品、肉食品、活禽、果蔬涂抹物/拭子样本以及污水样本等 采集样本数量 描述样本采集的每个样本的具体份数，如水产品涂抹物，5 管 采集样本量 描述每份样本的量：液体，单位为毫升（mL）；固体，单位为克（g）保存时间a 样本入库保存时间描述。格式均为 YYYY-MM-DD，其中 YYYY 为年，MM 为月，DD 为日 采集信息a 采集时间 样本采集时间描述。格式均为 YYYY-MM-DD，其中YYYY 为年，MM 为月，DD 为日 采集地址 描述样本采集地点，指明采集的国家、省份、市、区县。如有采集点海拔单位为米（m）、经纬度（东经（E），北纬（N），单位为度（）、采集时温度单位为摄氏度（），则

15、注明 采集区域 描述样本采集的具体地理位置，如华南海鲜市场、新发地农产品批发市场、京深海鲜市场等 检测信息a 检测时间 对该样本进行检测的时间描述。格式均为YYYY-MM-DD，其中 YYYY 为年，MM 为月，DD为日 检测方法 包括但不限于核酸检测、抗体检测等 检测结果 对应检测方法而得到的结果，如阴性/阳性、CT 值或滴度等 联系信息 联系人a 描述保存单位的具体联系人姓名 联系电话a 描述保存单位联系电话 联系人邮箱 描述保存单位具体联系人的电子邮箱 联系人所在单位a 描述保存单位的具体名称 a样本保藏必要信息，其余为非必要信息。T/CPMA 0192020 6 新冠样本保藏条件 6.

16、1 新冠样本保存应选择容量适宜，安全可靠并满足要求的容器，应充分考虑容器反复冻融安全性对样本质量的影响。6.2 新冠样本至少分装两份，备份保存。6.3 保存不同类型新冠样本，应符合表 3 的规定。表 3 不同类型新冠样本保存要求 样本类型样本类型 样本量样本量 保藏条件保藏条件 血清、血浆 不少于 200 L 长期保存于-80冰箱 鼻咽拭子、咽拭子、肛拭子 不少于 200 L 长期保存于-80冰箱 支气管灌洗液、肺泡灌洗液、尿液 不少于 1 mL 长期保存于-80冰箱 痰液、粪便a 不少于 200 L 长期保存于-80冰箱 外周血细胞 不少于 1 mL 保存于-196液氮 人体组织（含尸检样本

17、）固定后室温保存，未经固定的保存于-80冰箱 环境样本b 不少于 1 mL 长期保存于-80冰箱 动物样本组织 固定后室温保存，未经固定的保存于-80冰箱 a 新冠痰液、粪便样本，应先进行处理，其样本采集及处理程序参见附录 C。B 新冠环境样本采集及处理程序参见附录 D。6.4 新冠实验室检测临床样本的采集程序参见新型冠状病毒肺炎实验室检测技术指南开展，因痰液及粪便样本需要制备及处理，因此，将新冠痰液、粪便样本采集及处理程序与环境样本采集及处理程序单独介绍，参见附录 C 和附录 D。T/CPMA 0192020 附录 A(资料性)临床样本描述示例 临床样本描述示例见表 A.1 表 A.1 临床

18、样本信息示例 信息信息 说明说明 基本信息a 中文名称 新型冠状病毒临床样本 外文名称 SARS-CoV-2 clinical samples 样本描述信息 样本编号a FZ20LG0179 原始编号 Fk0001 样本名称a 咽拭子 样本量a 咽拭子，1 mL 来源历史 福建省疾病预防控制中心福州市疾病预防控制中心福建省福州肺科医院 保存时间a 2020-2-5 病例信息 患者基本信息 患者姓名 张一 患者性别a 男 患者年龄a 50 病例类型a 确诊病例；轻型 发病时间a 2020-1-22 就诊时间 2020-1-26 采集信息 采集时间a 2020-1-27 采集地址a 中国福建省福州

19、市仓山区 采集区域 福建省福州肺科医院 采集单位 福建省福州肺科医院 检测信息 检测时间a 2020-1-28 检测方法 核酸检测 检测结果 阳性 检测单位 福州市疾病预防控制中心 保存单位联系信息a 联系人 李 XX 联系电话 0591-XXXX 联系人邮箱 XXXX 联系人所在单位 福州市疾病预防控制中心 a为样本保藏必要信息，其余为非必要信息。T/CPMA 0192020 附 录 B(资料性)环境样本描述示例 环境样本描述示例见表 B.1 表 B.1 环境样本信息示例 信息信息 说明说明 基本信息a 中文名称 新型冠状病毒环境样本 外文名称 SARS-CoV-2 environmenta

20、l samples 样本信息 样本编号a XFD.1 原始编号 XFD.1 样本名称a 水产品涂抹物 采集样本数量 3 管 采集样本量 1mL 保存时间a 2020-2-20 采集信息a 采集时间 2020-2-15 采集地址 北京市丰台区 采集区域 新发地农产品批发市场 检测信息a 检测时间 2020-2-15 检测方法 核酸检测 检测结果 阳性 联系信息 联系人a 张 XX 联系电话a 010-XXXX 联系人邮箱 XXXX 联系人所在单位a 北京市疾病预防控制中心 a为样本保藏必要信息，其余为非必要信息。T/CPMA 0192020 附 录 C(资料性)新冠痰液、粪便样本采集及处理程序

21、C.1 痰液样本 要求将病人咳出的痰液收集于含 3 mL采样液的采样管中。如果痰液未收集于采样液中，可在检测前，加入 2 mL3 mL 采样液，或加入痰液等体积的痰液消化液。痰液消化液的储存液配方见表 1（可使用商品化储存液）。表C.1 痰液消化液的储存液配方 成分成分 质量质量/体积体积 二硫苏糖醇 0.100 g 氯化钠 0.780 g 氯化磷 0.020 g 磷酸氢二钠 0.112 g 磷酸二氢钾 0.020 g 水 7.500 mL pH值 7.40.2（25）使用时将储存液用去离子水稀释至 50 mL，与痰液等体积混合使用，或者参照试剂说明进行使用，也可采用痰液等体积的含 1g/L

22、蛋白酶 K 的磷酸盐缓冲液将痰液消化。C.2 粪便样本 取 1 mL 样本处理液，挑取黄豆粒大小的粪便样本加至管中，轻轻吹吸 3 次5 次，室温静置 10 min，以 8000 r/min 离心 5 min，吸取上清液进行检测。粪便样本处理液可自行配制，配方见表 2。表C.2 粪便样本处理液配方 成分成分 质量质量/体积体积 Tris 1.211 g 氯化钠 8.500 g 无水氯化钙（或含结晶水的氯化钙）1.100 g（1.470 g）水 800 mL 用浓盐酸调节pH为7.5，以去离子水补充至1000 mL 也可使用 HANKS 液或其他等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液溶解便样本制备便

23、悬液。如患者出现腹泻症状，则留取粪便样本 3 mL5 mL，轻轻吹打混匀后，以 8000 r/min 离心 5 min，吸取上清液备用。T/CPMA 0192020 附 录 D(资料性)新冠环境样本采集及处理程序 D.1 从事新冠环境样本采集的技术人员应经生物安全培训并考核，且具备相应的专业技能。D.2 采集前，按要求准备好个人防护用品，并做好样本标识、记录以及运输等准备。D.3 样本采集时，应使用病毒采样管配套用棉拭子，手指握住棉拭子杆上部，蘸取病毒采样液，使棉拭子充分湿润，在需要采集的环境样本适当部位来回均匀擦拭，同时转动棉拭子。D.4 将擦拭过的棉拭子的棉签部分放入病毒采样管中，去除棉拭

24、子手接触部分，盖好病毒采样管管帽，在采样管上贴标签，标注样本编号。D.5 将病毒采样管分别放入相应分类级别的运输包装容器当中，填写信息记录等。D.6 采样过程中，应避免其他因素对样本的污染，采样人员应勤更换手套。D.7 环境样本分装及灭活等处理程序应至少在生物安全二级实验室的生物安全柜中进行，人员应按照规定配备个人防护装备，将样本从辅助容器取出时应注意样本主容器包装完整性，在确保编号等信息完全的情况下，进行外表面擦拭消毒。D.8 进行样本分装，应选择适当容量的螺口内有垫圈的冻存管，如进行分离培养操作应及时冻存，如进行核酸检测应在核酸提取前进行灭活处理。T/CPMA 0192020 参考文献 1

25、 中华人民共和国生物安全法(中华人民共和国主席令第 56 号).2 病原微生物实验室生物安全管理条例（中华人民共和国国务院令第 424 号）.3 人间传染的病原微生物菌（毒）种保藏机构管理办法（中华人民共和国卫生部令第 68 号）.4 国家卫生健康委办公厅关于印发新型冠状病毒实验室生物安全指南（第二版）的通知（国卫办科教函202070 号）.5 刘剑君,魏强病原微生物保藏管理与技术手册M.北京:北京大学医学出版社，2019.6 关于修订新型冠状病毒肺炎英文命名事宜的通知（国卫医函202070 号）.7 中国疾病预防控制中心关于印发新型冠状病毒肺炎防控方案相关技术文件的通知（中疾控传防发202020 号）.8 关于印发农贸（集贸）市场新型冠状病毒环境监测技术规范的通知（联防联控机制综发2020221 号）._