血球计数板使用资料优秀PPT.ppt
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1、血球计数板运用血球计数板运用一、血球计数板的规格 举荐运用1mm1mm0.1mm方格 计数室计数室两种规格 11625型的计数板 将计数室放大,可见它含16中格,一般取四角:1、4、13、16四个中方格(100个小方格)计数。细胞个数1mL100个小方格细胞总数/100 40010000稀释倍数 22516型的计数板 中心大方格以双线等分成25个中方格,每个中方格又分成16个小方格,供细胞计数用(见图三)。一般计数四个角和中心的五个中方格(80个小方格)的细胞数。细胞个数1mL80个小方格细胞总数/80 40010000稀释倍数 二、血球计数板的运用方法步骤 1镜检计数室。在加样前,先对计数板
2、的计数室进行镜检。若有污物,则需清洗,吹干后才能进行计数;2加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻片,用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液,滴于盖玻片边缘,让培育液自行缓缓渗入,一次性充溢计数室,防止产生气泡,充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与盖玻片之间的矩形边缘为宜。多余培育液可用滤纸吸去;3计数。稍待片刻(约5min),待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部后,将计数板放在载物台的中心,先在低倍镜下找到计数室所在位置后,再转换高倍镜视察、计数并记录。三、血球计数板的运用留意事项1每天定时取样计数,记录数据。2从试管中吸出培育液进行计数之前,要将试管轻轻震荡几下,这样使酵母菌分布匀整。3
3、假如一个小方格内酵母菌过多,难以数清,应当对培育液进行稀释以便于酵母菌的计数。具体方法是:摇匀试管,取1mL酵母菌培育液,加入成倍的无菌水稀释,稀释n倍后,再用血球计数板计数,所得数值乘以稀释倍数。以每小方格内含有45个酵母细胞为宜。特殊是在培育后期的样液须要稀释后计数。4活酵母有芽殖现象,若芽体达到母细胞大小的一半时,即可作为两个菌体计数,若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。5对于压在方格界线上的酵母菌应当计数同侧相邻两边上的菌体数,一般可实行“数上线不数下线,数左线不数右线”的原则处理,另两边不计数。6计数一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算,对每个样品可计数三次,再取其平均值。
4、计数时应时常调整焦距,才能视察到不同深度的菌体。按公式计算每1ml(或10mL)菌液中所含的酵母菌个数。7血球计数板的清洁血球计数板运用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检视察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净,则必需重复清洗直到干净为止。例题例1:用血球计数板对培育液中酵母菌进行计数,若计数室为1mm1mm0.1mm方格,由400个小方格组成,假如一个小方格内酵母菌过多,难以计数,应先 后再计数。若多次重复计数后,算得每个小方格中平均有5个酵母菌,则10mL该培育液中酵母菌总数有 个。稀释 21
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