第四章-固相析出分离法2013.优秀PPT.ppt

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1、第四章第四章 固相析出分别法固相析出分别法n通过变更溶液条件，使溶质以固体形式通过变更溶液条件，使溶质以固体形式从溶液中分出的操作技术。从溶液中分出的操作技术。n盐析法盐析法n有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法n等电点沉淀法等电点沉淀法n结晶法结晶法2第一节第一节 盐析法盐析法 (salt precipitation)定定义义：是是利利用用各各种种生生物物分分子子在在浓浓盐盐溶溶液液中中溶溶解解度度的的差差异异，通通过过向向溶溶液液中中引引入入确确定定数数量量的的中中性性盐盐，使使目目的的物物或或杂杂蛋蛋白白以以沉沉淀淀析析出出，达达到到纯纯化化目目的的方法。的的方法。优点：简洁、经济、较少变性优点

2、：简洁、经济、较少变性缺点：辨别率不高，要除盐缺点：辨别率不高，要除盐3两种现象：两种现象：盐盐溶溶：低低盐盐状状况况，盐盐离离子子强强度度的的增增高高，蛋蛋白白质质溶溶解度增大。解度增大。盐盐析析：高高盐盐，盐盐离离子子强强度度增增加加，蛋蛋白白质质溶溶解解度度减减小。小。4溶溶解解度度盐浓度盐浓度Salting-outSalting-in一、基本原理一、基本原理6原理原理n形形成成离离子子对对，部部分分中中和和了了蛋蛋白白质质的的电电性性，排排斥斥作用减弱而能相互靠拢，聚集起来。作用减弱而能相互靠拢，聚集起来。n中中性性盐盐的的亲亲水水性性比比蛋蛋白白质质大大，使使蛋蛋白白质质脱脱去去了了

3、水化膜水化膜，使其沉淀。，使其沉淀。7在盐析区，符合公式在盐析区，符合公式loglogS S=-K Ks s S S蛋白质溶解度蛋白质溶解度，g/Lg/L；盐离子强度盐离子强度,C Ci ii i离子浓度，离子浓度，mol/Lmol/L；Z Zi ii i离子化合价；离子化合价；常数常数,为纵坐标上的截距为纵坐标上的截距;K Ks s盐析常数盐析常数。8、K KS Sn 为为纵纵坐坐标标上上的的截截距距，是是外外推推截截距距，与与无无机机盐盐种类无关种类无关,与蛋白质的性质有关。与蛋白质的性质有关。nKSKS是是盐盐析析常常数数，与与蛋蛋白白质质和和盐盐的的种种类类有有关关，但但与温度和与温度

4、和pHpH无关。无关。n两种类型：两种类型：n（1 1）在在确确定定的的pHpH和和温温度度下下变变更更离离子子强强度度（盐盐浓度）进行盐析，称作浓度）进行盐析，称作KsKs盐析法。盐析法。n（2 2）在在确确定定离离子子强强度度下下仅仅变变更更pHpH和和温温度度进进行行盐析，称作盐析，称作盐析法。盐析法。9方法方法:A“Ks”A“Ks”分分段段盐盐析析法法：在在确确定定pHpH值值及及温温度度下下，变变更更盐盐浓浓度度（即即I I）达到沉淀的目的。达到沉淀的目的。B“”B“”分分段段盐盐析析法法：在在确确定定I I下下，变变更更溶溶液液的的pHpH值值及及温温度度达达到到沉淀的目的。沉淀的

5、目的。C C、应应用用：一一般般初初步步分分别别用用第第一一种种方方法法，进进一一步步纯纯化化时时用用其其次次种种方法。方法。（一）盐的性质（一）盐的性质 盐析实力：半径小的高价离子在盐析时的盐析实力：半径小的高价离子在盐析时的作用较强，阴离子的盐析效果比阳离子好，作用较强，阴离子的盐析效果比阳离子好，尤其以高价阴离子更为明显。尤其以高价阴离子更为明显。PO4 3-PO4 3-SO42SO42CH3COOCH3COOClClNO3NO3II NH4+NH4+K+K+Na+Na+Li+Li+盐析用盐要考虑几个因素：常用硫酸铵盐析用盐要考虑几个因素：常用硫酸铵11二、影响盐析的因素几种盐在不同温度

6、下的溶解度（克几种盐在不同温度下的溶解度（克/100毫升水）毫升水）n盐种类盐种类 0 20 80 100（NH4)2SO4 70.6 75.4 95.3 103 Na2SO4 4.9 18.9 43.3 42.2 NaH2PO4 1.6 7.8 93.8 101n n硫酸铵在硫酸铵在0 0时的溶解度，远远高于其它盐类。时的溶解度，远远高于其它盐类。（二）蛋白质浓度（二）蛋白质浓度n n蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质浓浓浓浓度度度度提提提提高高高高，盐盐盐盐用用用用量量量量削削削削减。减。减。减。13（三）温度（三）温度n温度的变更会影响温度的变更会影响值。值。n在无盐或稀盐溶液中，在无盐或稀盐溶液

7、中，大多数蛋白质溶解度是大多数蛋白质溶解度是随温度上升而增大的，随温度上升而增大的，但在高盐溶液中常相反。但在高盐溶液中常相反。14（四）（四）pHpH值值n n当当当当溶溶溶溶液液液液的的的的pHpHpHpH在在在在蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质等等等等电点旁边时，电点旁边时，电点旁边时，电点旁边时，值最小。值最小。值最小。值最小。n n利利利利用用用用 值值值值最最最最低低低低点点点点时时时时pHpHpHpH的的的的不不不不同同同同，可可可可以以以以分分分分级级级级沉沉沉沉淀淀淀淀蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质.15三、盐析操作三、盐析操作 （一）盐析用盐的浓度表示（一）盐析用盐的浓度表示 固体粉末固

8、体粉末工业常用工业常用 硫酸铵饱和溶液硫酸铵饱和溶液试验室、小规模试验室、小规模 常常用用“饱饱和和度度”来来表表征征硫硫酸酸铵铵在在溶溶液液中中的的最最终终浓浓度度，2525时时(NH4)2SO4(NH4)2SO4的的饱饱和和浓度为浓度为4.1 mol4.1 molL L，定义它为，定义它为100%100%饱和度。饱和度。16n n 17（二）盐析方法和留意事项（二）盐析方法和留意事项 1 1、分部盐析法、分部盐析法2 2、重复盐析法、重复盐析法 3 3、反抽提法、反抽提法 确确定定的的盐盐浓浓度度下下将将目目的的蛋蛋白白夹夹带带确确定定量量的的杂杂蛋蛋白白一一同同沉沉淀淀。将将沉沉淀淀用用

9、较较低低浓浓度度盐溶液平衡，溶出其中的杂蛋白。盐溶液平衡，溶出其中的杂蛋白。18分部盐析法19反抽提法(RNA聚合酶)20留意事项留意事项n n“局部过浓局部过浓”n n温度温度（室温）（室温）n n分别方法分别方法 21 其次节其次节 有机溶剂沉淀法有机溶剂沉淀法 (Organic Solvent (Organic Solvent Precipitation)Precipitation)n n定定义义：向向水水溶溶液液中中加加入入确确定定量量亲亲水水性性的的有有机机溶溶剂剂，降降低低溶溶质质的的溶溶解解度度，使使其其沉沉淀淀析析出的分别纯化方法。出的分别纯化方法。221 1、降降低低了了介介

10、质质的的介介电电常常数数，使使溶溶质质分分子子之之间间的的静静电引力增加，聚集形成沉淀。电引力增加，聚集形成沉淀。2 2、水水溶溶性性有有机机溶溶剂剂本本身身的的水水合合作作用用降降低低了了自自由由水水的的浓浓度度，压压缩缩了了亲亲水水溶溶质质分分子子表表面面原原有有水水化化层层的厚度的厚度，降低了它的亲水性，导致脱水凝集。，降低了它的亲水性，导致脱水凝集。23一、基本原理一些溶剂的介电常数 24n n优点：优点：n n 乙乙醇醇等等有有机机溶溶剂剂易易除除去去，产产品品更更纯纯净净；密度差较大，离心收集。密度差较大，离心收集。n n缺点：缺点：n n 简简洁洁使使蛋蛋白白质质变变性性，操操作

11、作常常需需低低温温，成本高，需防火防爆。成本高，需防火防爆。25二、影响沉淀效果的因素 （一）有机溶剂种类及用量 常用的溶剂有乙醇、丙酮、甲醇等。（二）pH的影响 很多蛋白质在等电点旁边时溶解度最低，溶液pH应在等电点旁边，还须考虑蛋白质的稳定性。26（三）温度（低温沉淀）有机溶剂存在下，大多数蛋白质的溶解度随温度降低而显著地减小。（四）无机盐的含量 低盐：有利于沉淀，还有爱护蛋白质，防止变性。高盐：增大蛋白质在有机溶剂水溶液中的溶解度，沉淀物中可能夹带盐。27 多价阳离子，如多价阳离子，如多价阳离子，如多价阳离子，如CaCaCaCa2+2+2+2+、ZnZnZnZn2+2+2+2+能与蛋白质

12、结合能与蛋白质结合能与蛋白质结合能与蛋白质结合形成复合物，使蛋白质溶解度降低。形成复合物，使蛋白质溶解度降低。形成复合物，使蛋白质溶解度降低。形成复合物，使蛋白质溶解度降低。胰岛素精制：胰岛素精制：胰岛素精制：胰岛素精制：28（五）某些金属离子的助沉淀作用（六）样品浓度 浓度小时，增加溶剂投入量和损耗。浓度小时，增加溶剂投入量和损耗。浓度小时，增加溶剂投入量和损耗。浓度小时，增加溶剂投入量和损耗。浓度大时，增加共沉作用，降低辨别率。浓度大时，增加共沉作用，降低辨别率。浓度大时，增加共沉作用，降低辨别率。浓度大时，增加共沉作用，降低辨别率。蛋白质浓度蛋白质浓度蛋白质浓度蛋白质浓度0.5%0.5%

13、0.5%0.5%2%2%2%2%；粘多糖浓度粘多糖浓度粘多糖浓度粘多糖浓度1%1%1%1%2%2%2%2%。29第三节第三节 其他沉淀法其他沉淀法 一、等电点沉淀法一、等电点沉淀法 对对于于两两性性物物质质，等等电电点点时时净净电电荷荷为为零零，分分子子间间排排斥斥电电位位降降低低，吸吸引引力力增增大大，能能相相互互聚聚集集起起来来，发生沉淀。发生沉淀。30胰岛素纯化：胰岛素纯化：胰岛素纯化：胰岛素纯化：胰岛素胰岛素胰岛素胰岛素 pH8pH8 除去碱性杂蛋白除去碱性杂蛋白除去碱性杂蛋白除去碱性杂蛋白 pH3pH3 除去酸性杂蛋白除去酸性杂蛋白除去酸性杂蛋白除去酸性杂蛋白 31金金属属离离子子沉

14、沉淀淀：与生物分子的酸性功能团作用的金属复合盐法；有有机机酸酸类类复复合合盐盐沉沉淀淀:与生物分子的碱性功能团作用的有机酸复合盐法（如苦味酸盐、苦酮酸盐、丹宁酸盐等）。32二、成盐沉淀法二、成盐沉淀法 1 1金属离子沉淀：金属离子沉淀：Mn2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Zn2+、Ca2+、Ba2+、Mg2+等；2 2有机酸类复合盐沉淀有机酸类复合盐沉淀（1）丹宁即鞣酸（2）雷凡诺（3）三氯乙酸（TCA）33雷凡诺雷凡诺 n n 34猪心提取液猪心提取液 洗脱液洗脱液 上清液上清液 上清上清 细胞色素细胞色素C C 沉淀（去除）沉淀（去除）35吸附人造沸石盐析45%饱和硫酸铵沉淀TCA透析

15、三、亲和沉淀 利利利利用用用用亲亲亲亲和和和和反反反反应应应应原原原原理理理理，将将将将配配配配基基基基与与与与可可可可溶溶溶溶性性性性的的的的载载载载体体体体偶偶偶偶联联联联后后后后形形形形成成成成载载载载体体体体-配配配配基基基基复复复复合合合合物物物物（亲亲亲亲和和和和沉沉沉沉淀淀淀淀剂剂剂剂），该该该该复复复复合合合合物物物物可可可可选选选选择择择择性性性性地地地地与与与与蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质结结结结合合合合，在在在在确确确确定定定定条条条条件件件件下下下下沉沉沉沉淀淀淀淀出出出出来。来。来。来。中性可溶，酸性沉淀。中性可溶，酸性沉淀。中性可溶，酸性沉淀。中性可溶，酸性沉淀。36

16、37四、高分子聚合物沉淀四、高分子聚合物沉淀 水水溶溶性性非非离离子子型型高高分分子子聚聚合合物物，如如不不同同分分子子量量的的聚聚乙乙二二醇醇（PEGPEG）、葡葡聚聚糖糖、右右旋旋糖糖苷苷硫硫酸酸酯酯等等，能能使使蛋蛋白白质质水水合合作作用用减减弱弱而而发发生生沉沉淀。淀。五、表面活性剂五、表面活性剂 十六烷基三甲基季胺溴化物（十六烷基三甲基季胺溴化物（CTABCTAB）十六烷基氯化吡啶（十六烷基氯化吡啶（CPCCPC）38酸性多糖39六、选择性变性沉淀法六、选择性变性沉淀法n n热变性沉淀法热变性沉淀法n n酸碱变性沉淀法酸碱变性沉淀法n n利用试剂（氯仿）利用试剂（氯仿）40第四节第四

17、节 结晶结晶(crystallization)(crystallization)n溶溶液液中中的的溶溶质质在在确确定定条条件件下下，因因分分子子有有规规则则的的排排列列而而结结合合成成晶晶体体，晶晶体体的的化化学学成成分分均均一一，具具有有各各种种对对称称的的晶晶体体，其其特特征征为为离离子子和和分分子子在在空空间间晶晶格格的结点上呈规则的排列。的结点上呈规则的排列。n固体有结晶和无定形两种状态。固体有结晶和无定形两种状态。n结结晶晶：析析出出速速度度慢慢，溶溶质质分分子子有有足足够够时时间间进进行行排排列，粒子排列有规则列，粒子排列有规则n无定形固体：析出速度快，粒子排列无规则无定形固体：析

18、出速度快，粒子排列无规则-沉淀。沉淀。n 41n只只有有同同类类分分子子或或离离子子才才能能排排列列成成晶晶体体，因因此此结结晶晶过程有良好的选择性。过程有良好的选择性。n通通过过结结晶晶，溶溶液液中中大大部部分分的的杂杂质质会会留留在在母母液液中中，再通过过滤、洗涤，可以得到纯度较高的晶体。再通过过滤、洗涤，可以得到纯度较高的晶体。n结结晶晶过过程程具具有有成成本本低低、设设备备简简洁洁、操操作作便便利利，广广泛泛应应用用于于氨氨基基酸酸、有有机机酸酸、抗抗生生素素、维维生生素素、核核酸等产品的精制。酸等产品的精制。AFMAFM（原子力显微镜）下的抗生素晶体（原子力显微镜）下的抗生素晶体 A

19、FMAFM下的抗生素晶体层下的抗生素晶体层一、结晶过程一、结晶过程n饱饱和和溶溶液液：当当溶溶液液中中溶溶质质浓浓度度等等于于该该溶溶质质在在同同等等条件下的饱和溶解度时，该溶液称为饱和溶液。条件下的饱和溶解度时，该溶液称为饱和溶液。n过过饱饱和和溶溶液液：溶溶质质浓浓度度超超过过饱饱和和溶溶解解度度时时，该该溶溶液称之为过饱和溶液。液称之为过饱和溶液。n溶质只有在过饱和溶液中才能析出。溶质只有在过饱和溶液中才能析出。n溶溶质质溶溶解解度度与与温温度度、溶溶质质分分散散度度（晶晶体体大大小小）有有关。关。凯尔文（Kelvin）公式：指溶质自动从过饱和溶液中析出形成新相的过程。指溶质自动从过饱和

20、溶液中析出形成新相的过程。指溶质自动从过饱和溶液中析出形成新相的过程。指溶质自动从过饱和溶液中析出形成新相的过程。C2 C2 C2 C2 小晶体的溶解度；小晶体的溶解度；小晶体的溶解度；小晶体的溶解度；C1 C1 C1 C1 一般晶体的溶解度；一般晶体的溶解度；一般晶体的溶解度；一般晶体的溶解度；晶体密度；晶体密度；晶体密度；晶体密度；M M M M 晶体质量；晶体质量；晶体质量；晶体质量；晶体与溶液间的界面张力；晶体与溶液间的界面张力；晶体与溶液间的界面张力；晶体与溶液间的界面张力；2 2 2 2 小晶体的半径；小晶体的半径；小晶体的半径；小晶体的半径；1 1 1 1 一般晶体的半径；一般晶

21、体的半径；一般晶体的半径；一般晶体的半径；46结晶过程的实质结晶过程的实质n结晶是指溶质自动从过饱和溶液中析出，形成新结晶是指溶质自动从过饱和溶液中析出，形成新相的过程。相的过程。n这一过程不仅包括溶质分子凝合成固体，还包括这一过程不仅包括溶质分子凝合成固体，还包括这些分子有规律地排列在确定晶格中，这一过程这些分子有规律地排列在确定晶格中，这一过程与表面分子化学键力变更有关。与表面分子化学键力变更有关。n因此，结晶过程是一个表面化学反应过程。因此，结晶过程是一个表面化学反应过程。晶体的形成晶体的形成n形形成成新新相相（固固体体）须须要要确确定定的的表表面面自自由由能能。因因此此，溶溶液液浓浓度

22、度达达到到饱饱和和溶溶解解度度时时，晶晶体体尚尚不不能能析析出出，只只有有当当溶溶质质浓浓度度超超过过饱饱和和溶溶解解度度后后，才才可可能能有有晶晶体析出。体析出。n首首先先形形成成晶晶核核，由由KelvinKelvin公公式式，微微小小的的晶晶核核具具有有较较大大的的溶溶解解度度。实实质质上上，在在饱饱和和溶溶液液中中，晶晶核核是是处处于于一一种种形形成成溶溶解解再再形形成成的的动动态态平平衡衡之之中中，只只有有达达到到确确定定的的过过饱饱和和度度以以后后，晶晶核核才才能能够够稳稳定定存在。存在。n过饱和度过饱和度S：最先析出的微小颗粒是以后晶体的中心，称为晶核。最先析出的微小颗粒是以后晶体

23、的中心，称为晶核。晶体的形成过程：晶体的形成过程：过饱和溶液的形成过饱和溶液的形成 晶核的形成晶核的形成 晶体生长晶体生长其中，其中，溶液达到过饱和状态是结晶的前提；过溶液达到过饱和状态是结晶的前提；过饱和度是结晶的推动力。饱和度是结晶的推动力。温度与溶解度的关系温度与溶解度的关系n由于物质在溶解时要吸取热量、结晶时要由于物质在溶解时要吸取热量、结晶时要放出结晶热。因此，结晶也是一个质量与放出结晶热。因此，结晶也是一个质量与能量的传递过程，它与体系温度的关系特能量的传递过程，它与体系温度的关系特别亲密。别亲密。n溶解度与温度的关系可以用饱和曲线和过溶解度与温度的关系可以用饱和曲线和过饱和曲线表

24、示。饱和曲线表示。l l将将能能够够与与固固相相处处于于平平衡衡的的溶溶液液称称为为该该固固体体的的饱和溶液饱和溶液。对于一个平衡体系温度对于一个平衡体系温度和浓度之间有一个确定的关和浓度之间有一个确定的关系，这种关系用温度系，这种关系用温度浓度浓度图来表示，就是一条图来表示，就是一条饱和曲饱和曲线。线。（饱和区）溶解度溶解度-温度图温度图53 饱和曲线和过饱和曲线饱和曲线和过饱和曲线稳定区介稳区不稳定区区域名称不饱和区（溶解区）亚稳区 过饱和区区域范围曲线0下方曲线0和2之间曲线2上方溶液特点不饱和溶液 略过饱和溶液过饱和溶液液相与溶质晶体关系无晶体析出现象，外加晶体溶解晶核不会自动形成，但

25、诱导可以产生，若有晶体存在可以长大可以自然产生大量晶核，晶体也可长大表表 各区域内溶液特性及其与溶质晶体关系各区域内溶液特性及其与溶质晶体关系二、过饱和溶液的形成二、过饱和溶液的形成（一）蒸发法（二）冷却法（三）化学反应结晶法（四）盐析结晶法（五）等电点法（六）复合法（七）共沸蒸馏结晶法 55l蒸发法蒸发法n n是是借借蒸蒸发发除除去去部部分分溶溶剂剂的的结结晶晶方方法法，在在常常压压或或减减压压下下加加热热蒸蒸发发除除去去一一部部分分溶溶剂剂，以以达达到到或或维维持溶液过饱和度。持溶液过饱和度。n n此此法法适适用用于于溶溶解解度度随随温温度度变变更更不不显显著著的的物物质质或或随温度上升溶

26、解度降低的物质。随温度上升溶解度降低的物质。n n要求物质有确定的热稳定性。要求物质有确定的热稳定性。n n适用于小分子化合物的结晶，蛋白质和酶类不适用于小分子化合物的结晶，蛋白质和酶类不n n 宜接受。宜接受。l盐析结晶法盐析结晶法l 是是生生化化制制药药中中应应用用最最多多的的结结晶晶方方法法。其其作作用用是是通通过过向向结结晶晶溶溶液液中中引引入入中中性性盐盐，渐渐渐渐降降低低溶溶质质的的溶溶解解度度使使其其过过饱饱和和，经经过过确确定定时时间后晶体形成并渐渐长大。间后晶体形成并渐渐长大。l 引入中性盐的方法：引入中性盐的方法：l 1 1、向溶液中加固体盐粉末、向溶液中加固体盐粉末l 2

27、 2、向溶液中加饱和盐溶液、向溶液中加饱和盐溶液盐析结晶法盐析结晶法58l 等电点法等电点法 利用蛋白质、酶、核酸等生物大分子在PI时其溶解度最小易沉淀的原理而设计的结晶法称为等电点结晶法。生物制药中，常依据已知大分子溶质的pI，调整被结晶溶液的PH在其pI旁边，而后与盐析法、有机溶剂法相结合，便可得到较满足的结晶。等电点法等电点法60三、晶核的形成三、晶核的形成(1)(1)初级成核初级成核:过饱和溶液中的自发成核现象。过饱和溶液中的自发成核现象。a a 均相成核：没有外来表面的均相溶液中。均相成核：没有外来表面的均相溶液中。b b 非均相成核：外来表面的溶液中。非均相成核：外来表面的溶液中。

28、(2)(2)二二次次成成核核：向向介介稳稳态态过过饱饱和和溶溶液液中中加加入入晶晶种种，会有新晶核产生。会有新晶核产生。机机理理:附附着着在在晶晶体体表表面面的的微微小小晶晶体体受受到到剪剪切切作作用用，或碰撞而脱离晶体，形成新的晶核。或碰撞而脱离晶体，形成新的晶核。四、晶体的生长四、晶体的生长n在在过过饱饱和和溶溶液液中中已已有有晶晶核核形形成成或或加加入入晶晶种种后后，以以过过饱饱和和度度为为推推动动力力，晶晶核核或或晶晶种种将将长长大大，称为晶体的生长。称为晶体的生长。n是是以以浓浓度度差差推推动动力力的的扩扩散散传传质质和和晶晶体体表表面面反反应（晶格排列）的两步串连过程。应（晶格排列

29、）的两步串连过程。三、提高晶体质量的途径三、提高晶体质量的途径 工工业业上上通通常常希希望望得得到到粗粗大大而而匀匀整整的的晶晶体，便于过滤与洗涤。体，便于过滤与洗涤。（一）晶体大小（一）晶体大小 影影响响晶晶体体大大小小的的主主要要因因素素有有过过饱饱和和度度、温度、搅拌速度、晶种等。温度、搅拌速度、晶种等。63（二）晶体形态（二）晶体形态 变变更更晶晶体体外外形形，可可用用:选选择择不不同同的的溶溶剂剂、限限制制过过饱饱和和度度、结结晶晶温温度度、调调整整溶溶液液的的pHpH和和有目的地加入某种能变更晶形的杂质等。有目的地加入某种能变更晶形的杂质等。（三）晶体纯度（三）晶体纯度 晶体表面具

30、有确定的物理吸附实力。晶体表面具有确定的物理吸附实力。重重结结晶晶：即即将将晶晶体体用用合合适适的的溶溶剂剂溶溶解解再再次次结晶。结晶。64（四）重结晶（四）重结晶(recrystallization)(recrystallization)n n溶解度受温度影响较大的物质，将产品溶解在热溶解度受温度影响较大的物质，将产品溶解在热溶解度受温度影响较大的物质，将产品溶解在热溶解度受温度影响较大的物质，将产品溶解在热的溶剂中，缓慢降低温度析出晶体。的溶剂中，缓慢降低温度析出晶体。的溶剂中，缓慢降低温度析出晶体。的溶剂中，缓慢降低温度析出晶体。n n将溶质溶于一种溶剂中，然后将其次种溶剂加热将溶质溶于一种溶剂中，然后将其次种溶剂加热将溶质溶于一种溶剂中，然后将其次种溶剂加热将溶质溶于一种溶剂中，然后将其次种溶剂加热后缓缓地加入，放置一段时间使结晶完全后缓缓地加入，放置一段时间使结晶完全后缓缓地加入，放置一段时间使结晶完全后缓缓地加入，放置一段时间使结晶完全 。65红霉素重结晶红霉素重结晶66用于生物物质重结晶的溶剂一般用于生物物质重结晶的溶剂一般有有蒸馏水、丙酮、石油醚、乙酸蒸馏水、丙酮、石油醚、乙酸乙酯、低级醇乙酯、低级醇等。等。思索题：1.什么是盐析作用？盐析的原理是什么？如何选择盐析所用的中性盐？2.有机溶剂沉淀的原理是什么？影响沉淀效果的因素有那些？