医学专题一乙肝核心抗原的检测与应用.ppt

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1、HBcAg的检测的检测(jin c)与应用与应用 检验科检验科 胡亚远胡亚远 第一页，共四十二页。摘要(zhiyo)(zhiyo)HBcAgHBcAg存在于DaneDane颗粒的核心，是HBVHBV的结构蛋白即病毒的结构蛋白即病毒核壳蛋白，具有重要的生物学特性和临床病理意义，核壳蛋白，具有重要的生物学特性和临床病理意义，HBcAgHBcAg由由HBVHBV基因组的C C开放读码区（开放读码区（ORFORF）编码，具有高度免疫原性，对）编码，具有高度免疫原性，对HBcAgHBcAg的免疫应答在病毒清除中有重要作用。血清的免疫应答在病毒清除中有重要作用。血清HBcAgHBcAg阳性可提供肝内HBV

2、HBV合成的信息，是病毒存在的直接标志，合成的信息，是病毒存在的直接标志，HBcAgHBcAg感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞，肝细胞溶解后感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞，肝细胞溶解后HBcAgHBcAg可直接释放入血，故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。可直接释放入血，故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。检测肝组织检测肝组织HBcAgHBcAg有助于确定乙型肝炎病原学诊断和评估肝细有助于确定乙型肝炎病原学诊断和评估肝细胞坏死炎性活动的程度及病变发展的趋向，推测慢性乙型肝炎胞坏死炎性活动的程度及病变发展的趋向，推测慢性乙型肝炎的预后。血清和肝组织的预后。血清和肝组织HBc

3、AgHBcAg检测具有多种实用价值，值得(zh(zh d)d)推荐。第二页，共四十二页。0 引言(ynyn)(ynyn)乙型肝炎病毒（HBV）是嗜肝DNA病毒，完整的HBV颗粒又称Dane颗粒，球形，直径约42urn。HBV核心抗原（Hepatitis B Core Antigen，HBcAg）存在于Dane颗粒的核心，是HBV的结构(jigu)(jigu)蛋白即病毒核壳蛋白，主要存在于受感染的肝细胞核内，它反映血清中Dane颗粒的存在及肝内HBV的复制。存在于乙型肝炎患者血液和肝组织内的HBcAg具有重要的生物学特性和临床病理意义。第三页，共四十二页。1 生物学特性(txng)(txng)1

4、.1一般特性(txng)(txng)HBcAgHBcAg由由HBVHBV基因组的基因组的C开放读码区（开放读码区（ORFORF）编码，从）编码，从第二个第二个ATGATG（1 901 nt1 901 nt）起始翻译（终止密码子在）起始翻译（终止密码子在2 458 nt2 458 nt）。）。HBcAgHBcAg有保守的三维结构，可因血清型不同有保守的三维结构，可因血清型不同(b tn)(b tn)而有而有183-183-185185个氨基酸残基（个氨基酸残基（aa），相对分子质量），相对分子质量Mr21,000Mr21,000，180180个个HBcAgHBcAg形成形成27nrn27nrn的

5、正的正2020面体以构成核心颗粒。面体以构成核心颗粒。HBVHBV核心部核心部分含有环状双股分含有环状双股DNA、DNADNA聚合酶、聚合酶、HBcAgHBcAg和和e e抗原（HBeAgHBeAg），是病毒复制的主体。），是病毒复制的主体。HBcAgHBcAg包装包装HBV DNAHBV DNA，在病毒成熟过程中起重要作用。在病毒成熟过程中起重要作用。HBcAg己被证明含有己被证明含有HBVHBV特异性特异性DNA聚合酶，是聚合酶，是HBVHBV复制的标志。复制的标志。第四页，共四十二页。1.1一般一般(ybn)(ybn)(ybn)(ybn)特性特性 HBcAg可在受染的肝细胞核中查到，但它

6、主要在胞质中产生，由胞核定位序列（nuclear localization sequences，NLS）介导HBcAg进人细胞核中。胞核定位序列位于HBcAg的羧基末端区（C端区）第145-156位和第172-183位的氨基酸序列，具有与细胞核特异性结合，并将与之相连(xin(xin lin)lin)的蛋白或DNA转运到细胞核中的功能。第五页，共四十二页。1.2免疫(miny)(miny)反应 HBcAg具有高度免疫原性，在T细胞和B细胞水平上，HBcAg的抗原性较HBeAg强100倍，几乎所有HBV感染者都产生抗-HBc，同时有T细胞免疫应答。对HBcAg的免疫应答在病毒清除中可能有重要作用

7、。这对HBcAg DNA的疫苗(ymio)(ymio)研究有重要的指导意义。第六页，共四十二页。1.2免疫(miny)(miny)反应 Th细胞根据其的分泌细胞因子不同可分为Th1和Th2亚群。Th1细胞主要产生白介素-2（IL-2），干扰素（IFN）和肿瘤(zhngli)(zhngli)坏死因子（TNF）等促进细胞免疫反应；Th2细胞主要产生白介素-6（IL-6）、白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）等促进体液免疫反应。Th1和Th2细胞通过分泌的细胞因子相互下调对方的生长分化，刺激自身的增生。第七页，共四十二页。1.2免疫(miny)(miny)反应 机体的机体的Th1型免疫

8、反应可促进病原体的清除型免疫反应可促进病原体的清除(qngch)(qngch)，而，而Th2型免疫反应则可加重机体的病理损害，在型免疫反应则可加重机体的病理损害，在HBcAg诱导下，诱导下，外周血单个核细胞（外周血单个核细胞（PBMC）产生）产生Th1类细胞因子量明显类细胞因子量明显增高；在增高；在HBeAg诱导下，诱导下，Th2类细胞因子量明显增高。慢性类细胞因子量明显增高。慢性HBV感染进行免疫调节治疗的一个目标就是使感染进行免疫调节治疗的一个目标就是使HBeAg特异性特异性T细胞由细胞由Th2细胞主导型转化为细胞主导型转化为Th1细胞型，细胞型，HBcAg有望打有望打破破HBeAg诱导的

9、免疫耐受状态而增强诱导的免疫耐受状态而增强Th1细胞优势表达达细胞优势表达达到治疗的目的。慢性乙型肝炎患者和到治疗的目的。慢性乙型肝炎患者和HBV慢性携带者体慢性携带者体内针对内针对HBV的特异性的特异性CTL应答明显低下，纠正这种应答明显低下，纠正这种CTL低反应状态，对于机体有效地清除低反应状态，对于机体有效地清除HBV至关重要。至关重要。第八页，共四十二页。1.2免疫(miny)(miny)反应 DNA疫苗（基因疫苗）是近几年免疫学和分子生物学研究的新兴领域，它作为一种全新的高效免疫方法，己在许多难治性感染性疾病(jbng)(jbng)、自身免疫性疾病(jbng)(jbng)、过敏性疾病

10、(jbng)(jbng)和肿瘤性疾病(jbng)(jbng)的预防及治疗领域显示出较好的应用前景。DNA疫苗可刺激机体特异性CTL功能的特性给HBV慢性持续感染的治疗带来新的希望。第九页，共四十二页。1.2免疫(miny)(miny)反应 采用治疗性疫苗打破宿主对采用治疗性疫苗打破宿主对HBV的免疫耐受状态来治疗的免疫耐受状态来治疗慢性乙型肝炎和慢性乙型肝炎病毒携带者是一新的有效途径。慢性乙型肝炎和慢性乙型肝炎病毒携带者是一新的有效途径。HBV核心抗原区核心抗原区AA1-AA151AA1-AA151段含有多个不连续的抗原表位，段含有多个不连续的抗原表位，对刺激机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫

11、均具有对刺激机体产生特异性的体液免疫和细胞免疫均具有(jyu)(jyu)重重要作用。要作用。Kuhober和Geissier Geissier et alet al作了作了HBcAg DNA疫苗肌内注射法免疫小鼠的初步观察。该DNADNA疫苗具有良好的细胞免疫苗具有良好的细胞免疫原性，确可刺激宿主产生较强的疫原性，确可刺激宿主产生较强的CTLCTL反应。这一结果为我们反应。这一结果为我们进一步探索该进一步探索该DNA疫苗在治疗主要因机体CTLCTL功能低下所致功能低下所致HBVHBV慢性持续感染方面的应用前景奠定了初步的实验研究基础。慢性持续感染方面的应用前景奠定了初步的实验研究基础。第十页，

12、共四十二页。2 临床应用(yngyng)(yngyng)2.1血清HBcAg HBsAg、HBeAg、抗-HBc等免疫学指标都是体内存在乙型肝炎病毒颗粒的间接标志，而HBcAg则是HBV存在的直接标志。所以，HBcAg测定更能反映HBV的存在及其复制程度(chngd)(chngd)，比其他各种免疫学指标更灵敏、更特异。HBcAg是乙型肝炎病毒（HBV）的核心成分，若在血清中检出HBcAg则说明有HBV复制。第十一页，共四十二页。血中的HBcAg是作为Dane颗粒内部成分存在，极少有游离的HBcAg，故用常规方法不易检出，在血清中不能直接检出HBcAg，需加用开壳剂，使HBcAg释放于溶液中然后

13、进行测定。检测HBcAg，目前多采用间接(jin(jin ji)ji)的方法，即首先在试管内将Dane颗粒沉淀，再用裂解剂裂解Dane颗粒外壳，使HBcAg暴露游离，并经过多次洗涤处理后，用放免或酶免方法检测。如用EIA微板法检测血清HBcAg，被检标本不须任何处理，直接在微孔板内进行检测，应用于临床，可与乙型肝炎病毒标志物同步检测。检测(jin c)第十二页，共四十二页。血HBcAg与HBsAg的关系(gun x)(gun x)HBcAg出现的阳性率与HBsAgHBsAg的的出出现现密密切切相相关关，往往往往HBcAgHBcAg（）与与HBsAgHBsAg（）同时存在，而HBsAgHBsAg

14、（）时时不不一一定定(ydng)(ydng)会会出出现现HBcAgHBcAg（）。抗-HBs-HBs的出现并不标志着HBVHBV复制的中止，而是复制水平减低。不能以HBsAgHBsAg阴阴性性就就排排除除HBV感感染染，临临床床上上HBsAg阴阴性性的的患患者者，只只要要HBcAgHBcAg检检出出阳阳性性，说说明明仍仍有有乙乙型型肝肝炎炎病病毒毒复复制制。以以往往认认为为血血清清中中仅仅HBsAgHBsAg阳阳性性者者，病病毒毒为为非非复复制制相相，无无传传染染性性，但但这这种种患患者者中中，也也有有检检测测出出HBcAg、HBV DNA阳阳性性者者，故故判判断单项血清断单项血清HBsAgH

15、BsAg阳性者的传染性时应慎重。阳性者的传染性时应慎重。第十三页，共四十二页。血HBcAg与e系统(xtng)(xtng)的关系 HBeAg阳性是HBV持续高水平复制和传染性强的标志，其与HBcAg、HBV DNA密切相关，并具有明显的平行关系。多年来，一直认为e抗原是复制标记(bioj)(bioj)物，由于HBeAg是HBcAg的降解产物，以可溶性蛋白形式存在，在结构上不及HBcAg与病毒颗粒关系密切，对判断病毒复制、评估传染性不及HBcAg敏感可靠。第十四页，共四十二页。血HBcAg与e系统(xtng)(xtng)的关系 一般认为，当HBeAg/抗-HBe转换后，HBV复制趋于减少，没有传

16、染性或传染性很小。HBeAg被公认为是HBV复制的标志物。但部分阴性者HBeAg的血清中仍可检出HBcAg和（或）HBV DNA，说明HBeAg的表达可能不是HBV复制的必然结果，对HBeAg阴性感染者的带毒状态(zhungti)(zhungti)及抗-HBe表达的临床意义必须重新认识，不能忽视其具有传染性的可能。第十五页，共四十二页。血HBcAg与HBV DNA、HBV DNA-P的关系(gun x)(gun x)在慢性乙型肝炎患者中，血HBcAg与血HBV DNA有很好的相关性；而在急性期，尤其是在肝损害极期时，往往血HBcAg阳性，而血HBV DNA阴性，考虑为HBcAg从受免疫损伤的被

17、感染的肝细胞内释放入血，这种情况甚至在病毒已终止(zhngzh)(zhngzh)复制后也可出现。对HBsAg慢性携带状态患者，判断HBV复制及传染性，HBcAg的敏感性最高，HBV DNA和HBV DNA-P次之，HBeAg敏感性低。第十六页，共四十二页。不同(b tn(b tn)肝病的检出率 慢性活动性肝炎中血慢性活动性肝炎中血HBcAg阳性率明阳性率明显高于显高于ASC（无症状病毒携带者），说明血（无症状病毒携带者），说明血HBcAg阳性较多见于病变活动较重的慢性阳性较多见于病变活动较重的慢性肝炎肝炎(n yn)(n yn)而较少见于病变较静止的而较少见于病变较静止的ASC。血。血清中的清

18、中的HBcAg阳性与肝脏病变活动程度有阳性与肝脏病变活动程度有关，且对估计预后有很好价值。关，且对估计预后有很好价值。HBcAg检出结果是：肝硬化慢性乙型肝炎中型检出结果是：肝硬化慢性乙型肝炎中型慢性乙型肝炎轻型。慢性乙型肝炎轻型。第十七页，共四十二页。检测(jin c)(jin c)血HBcAg的临床意义 （1）对血液内）对血液内HBV的开壳处理，能直接检测的开壳处理，能直接检测HBcAg，能比，能比HBeAg更客观地反映血更客观地反映血HBV的存在，以的存在，以及作出数量多少的判断，可替代及作出数量多少的判断，可替代HBeAg而作为病毒复而作为病毒复制和传染性的敏感指标，是病毒存在的直接标

19、志。它与制和传染性的敏感指标，是病毒存在的直接标志。它与HBV复制标志呈正相关，可以反映复制标志呈正相关，可以反映HBV活动活动(hu dng)(hu dng)的复的复制程度。制程度。HBcAg与乙型肝炎病毒其他五项标志物相比与乙型肝炎病毒其他五项标志物相比更是反映更是反映HBV复制的直接证据。它可与其他的复制的直接证据。它可与其他的HBV血血清学标志物起到相互配合和相互补充的作用。清学标志物起到相互配合和相互补充的作用。第十八页，共四十二页。检测(jin c)(jin c)血HBcAg的临床意义 （2）有助于对乙型肝炎病情和预后的判断，）有助于对乙型肝炎病情和预后的判断，HBcAg感染的肝细

20、胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞，肝感染的肝细胞是细胞免疫效应攻击的靶细胞，肝细胞溶解后细胞溶解后HBcAg可直接释放入血，故能直接反映肝细可直接释放入血，故能直接反映肝细胞损害和病情进展的程度。在急性乙型肝炎早期胞损害和病情进展的程度。在急性乙型肝炎早期HBcAg亦达高峰值，而且病情严重者的亦达高峰值，而且病情严重者的HBcAg水平也水平也相应相应(xingyng)(xingyng)提高。慢性乙型肝炎患者，血提高。慢性乙型肝炎患者，血HBcAg阴性者阴性者比阳性者有明显的临床及生化指标的改善。比阳性者有明显的临床及生化指标的改善。HBcAg含含量与肝脏损害的情况有关，有助于抗病毒药物及免疫量与肝

21、脏损害的情况有关，有助于抗病毒药物及免疫治疗的疗效评价。治疗的疗效评价。第十九页，共四十二页。检测(jin c)(jin c)血HBcAg的临床意义 （3）从理论上讲，聚合酶链反应（）从理论上讲，聚合酶链反应（PCR）检测法）检测法比固相放射免疫法灵敏度高，但实际上可出现比固相放射免疫法灵敏度高，但实际上可出现HBcAg阳性而阳性而HBV DNA阴性的结果。因此，两种检测方法可阴性的结果。因此，两种检测方法可以互补使用，以减少漏检。在不具备以互补使用，以减少漏检。在不具备(jbi)(jbi)PCR检测条件检测条件的单位，以酶联（的单位，以酶联（ELISA）法试剂盒在检测血清）法试剂盒在检测血清

22、HBV五五项标志的同时，检测项标志的同时，检测HBcAg不仅能进一步了解病毒的不仅能进一步了解病毒的复制情况，还可了解肝细胞损害和病情进展的程度，且复制情况，还可了解肝细胞损害和病情进展的程度，且检测费用低廉，有临床实用价值。检测费用低廉，有临床实用价值。第二十页，共四十二页。检测(jin c)(jin c)血HBcAg的临床意义 （4）在在对对献献血血员员的的筛筛选选中中，单单凭凭HBsAg的的测测定定来来判判断断是是否否受受HBV感感染染也也是是不不够够的的，会会漏漏诊诊HBsAg阴阴性性而而HBcAg和和抗抗-HBc阳阳性性的的乙乙型型肝肝炎炎患患者者，只只有有(zhyu)三三者者同同时

23、时检检测测，才才能能更更好好地地诊诊断断乙乙型型肝肝炎炎并并防防止止在在输输血血中中传传播播，降降低低输输血血后后肝肝炎炎的发生率。的发生率。第二十一页，共四十二页。2.2肝组织肝组织(zzh)(zzh)(zzh)(zzh)HBcAg 分布分布 HBcAg主要存在主要存在(cnzi)(cnzi)于于HBV颗粒和受染颗粒和受染的肝细胞中，的肝细胞中，HBV复制时复制时HBcAg表达于肝表达于肝细胞内，分胞核型、胞质型和胞膜型。细胞内，分胞核型、胞质型和胞膜型。Delladetsima et al发现胆管上皮细胞也是发现胆管上皮细胞也是HBV的适合宿主，的适合宿主，HBV能够在其中复制并能够在其中

24、复制并表达表达HBcAg和和HBsAg抗原。抗原。第二十二页，共四十二页。肝内肝内HBcAg与与HBV DNA关系关系(gun x)(gun x)(gun x)(gun x)肝肝内内HBcAg与与HBV DNA的的分分布布区区域域常常较较一一致致，有有的的肝肝细细胞胞可可同同时时检检出出HBcAg和和HBV DNA，但但多多数数HBV DNA（）肝肝细细胞胞并并不不同同时时含含有有HBcAg。HBV高高复复制制期期HBcAg以以胞胞核核表表达达为为主主，无无或或很很少少在在胞胞质质内内表表达达；而而低低复复制制期期时时相相反反，HBcAg在在肝肝细细胞胞核核内内而而不不是是细细胞胞质质内内的的

25、表表达达程程度度(chngd)能能够够精精确确地地反反映映慢慢性性乙乙型型肝肝炎炎患患者者的的病病毒毒复复制制水水平平。肝肝HBcAg与与血血清清HBV DNA水水平平呈呈正正相相关关。经经干干扰扰素素治治疗疗后后的的慢慢性性活活动动性性乙乙型型肝肝炎炎患患者者，HBcAg发生从核内向胞质的转换。发生从核内向胞质的转换。第二十三页，共四十二页。肝内HBcAg与HBeAg关系(gun x)(gun x)HBcAg与与HBeAg常同时表达在肝细胞内，常同时表达在肝细胞内，但在亚细胞水平有重要差异。在病毒活跃复制的但在亚细胞水平有重要差异。在病毒活跃复制的ASC，常有较强的，常有较强的HBcAg胞核

26、表达和胞核表达和HBeAg胞胞质表达；活动性慢性乙型肝炎时常有质表达；活动性慢性乙型肝炎时常有HBcAg的的胞质表达，因免疫清除而病毒减少胞质表达，因免疫清除而病毒减少(jinsho)(jinsho)，难以，难以检出检出HBeAg。作为免疫攻击的靶抗原，。作为免疫攻击的靶抗原，HBeAg不不及及HBcAg重要。重要。第二十四页，共四十二页。肝内肝内HBcAg与肝组织炎症活动与肝组织炎症活动(hu dng)(hu dng)(hu dng)(hu dng)关系关系 血血清清HBV DNA、HBeAg和和定定位位于于核核内内的的HBcAg都都与与肝肝组组织织的的损损害害程程度度无无关关。慢慢性性(m

27、n(mn(mn(mn xng)xng)xng)xng)HBV感感染染者者肝肝组组织织中中浆浆膜膜型型HBcAg的的表表达达强强度度随随肝肝组组织织病病变变活活性性积积分分（HAI）评评分分值值的的增增高高而而增增强强，HAI评评分分值值低低者者核核型型HBcAg的的表表达达增增强强。HBcAg在在核核内内或或胞胞质质内内同同时时表表达达的的其其“炎炎症症活活动动指指数数”高高于于HBcAg在在胞胞质质内内和膜内表达。和膜内表达。第二十五页，共四十二页。肝内肝内HBcAg与肝组织炎症与肝组织炎症(ynzhng)(ynzhng)(ynzhng)(ynzhng)活动关系活动关系 光镜下发现(fxin

28、)(fxin)浆膜型HBcAg多分布于碎屑样坏死及灶性坏死区，浆膜型HBcAg阳性肝细胞常有各种变化，或明显萎缩，或肿胀变形。增生胞核抗原（PCNA）是再生肝细胞的标志，代表肝组织的炎症活性，PCNA与胞质HBcAg表达程度正相关，但不是胞核型HBcAg的独立影响因素。发生前-C区突变的HBV与未发生突变的野生株相比HBcAg在胞质内表达显著增高，并伴有较明显的肝组织炎症活动。HBcAg在胞质内表达预示预后不良。第二十六页，共四十二页。肝内肝内HBcAg与肝组织炎症与肝组织炎症(ynzhng)(ynzhng)(ynzhng)(ynzhng)活动关系活动关系 乙型肝炎引起的肝硬化肝组织中乙型肝炎

29、引起的肝硬化肝组织中HBcAg、HBV DNA的阳性率较高。的阳性率较高。HBcAg颗粒在肝组织中主要颗粒在肝组织中主要(zhyo)(zhyo)呈弥漫呈弥漫的浆膜型分布，的浆膜型分布，HBcAg和和HBV DNA呈浆、膜型分布者，呈浆、膜型分布者，其肝组织中其肝组织中HBV DNA表达程度、炎症活动度和纤维组表达程度、炎症活动度和纤维组织增生程度，明显较呈核型分布者高。织增生程度，明显较呈核型分布者高。HBcAg及及HBV DNA阳性的肝组织，炎症活动明显，界面呈碎屑坏死，阳性的肝组织，炎症活动明显，界面呈碎屑坏死，灶性坏死。灶性坏死。第二十七页，共四十二页。肝内肝内HBcAg与肝组织与肝组织

30、(zzh)(zzh)(zzh)(zzh)炎症活动关系炎症活动关系 观察肝内颗HBcAg粒的分布类型(lixng)(lixng)，有助于判断HBV在肝组织中的复制状况；肝组织病变的活动程度。这可能是由于机体对呈浆、膜型分布的HBcAg和HBV DNA具有更加强烈的免疫反应，将肝内含活跃复制的HBV DNA和靶抗原HBcAg表达的肝细胞溶解破坏，以清除病毒所致。第二十八页，共四十二页。合并丁型肝炎时，肝内合并丁型肝炎时，肝内HBcAg表达表达(biod)(biod)(biod)(biod)特点特点 HBV合并合并HDV感染者的肝组织中，感染者的肝组织中，HBcAg和和HDAg阳性细胞分布关系不密切

31、，阳性细胞分布关系不密切，HBcAg阳性阳性细胞明显少于细胞明显少于HDAg阳性细胞，阳性细胞，HBcAg主要呈主要呈核型表达，胞质中阳性颗粒较少见到，表达强核型表达，胞质中阳性颗粒较少见到，表达强度也较弱，表明度也较弱，表明HDV感染者感染者HBV是低水平复制，是低水平复制，HDV可能有抑制可能有抑制HBV基因复制或病毒抗原表达的基因复制或病毒抗原表达的作用，特别作用，特别(tbi)(tbi)是在是在HDV复制活跃的阶段，即复制活跃的阶段，即HDAg大量表达时，大量表达时，HBV复制受到的抑制最为明复制受到的抑制最为明显。显。第二十九页，共四十二页。儿童儿童(r tng)(r tng)(r

32、tng)(r tng)肝内肝内HBcAg表达特点表达特点 儿童肝内儿童肝内HBcAg主要表达于核内。肝内主要表达于核内。肝内HBcAg呈弥漫性分布者，多见于呈弥漫性分布者，多见于10岁以内的较小岁以内的较小儿童；而呈局灶性分布者，多见于儿童；而呈局灶性分布者，多见于10岁以上的较岁以上的较大儿童，大儿童，HBcAg呈局灶性分布比弥漫性分布者，呈局灶性分布比弥漫性分布者，ALT水平水平(shupng)(shupng)较高并伴有较明显的肝脏炎症活动。较高并伴有较明显的肝脏炎症活动。在儿童慢性乙型肝炎患者中，肝内在儿童慢性乙型肝炎患者中，肝内HBcAg呈弥漫呈弥漫性分布者为病毒感染早期，性分布者为病

33、毒感染早期，HBcAg呈局灶性分布呈局灶性分布并伴随并伴随HBeAg阳性者为疾病短期内进展的标志。阳性者为疾病短期内进展的标志。第三十页，共四十二页。肝组织肝组织HBcAg检测检测(jin c)(jin c)(jin c)(jin c)的应用价值的应用价值 （1）检测肝组织）检测肝组织HBcAg有助于确有助于确定乙型肝炎病原学诊断，尤其是对于血定乙型肝炎病原学诊断，尤其是对于血清乙型肝炎病毒清乙型肝炎病毒(bngd)(bngd)标志物阴性病例，标志物阴性病例，在病原学诊断中弥补血清学诊断乙型肝在病原学诊断中弥补血清学诊断乙型肝炎的不足。炎的不足。第三十一页，共四十二页。肝组织肝组织(zzh)(

34、zzh)(zzh)(zzh)HBcAg检测的应用价值检测的应用价值 （2）有助于评估肝细胞坏死炎性活动）有助于评估肝细胞坏死炎性活动的程度及病变发展的趋向，推测慢性的程度及病变发展的趋向，推测慢性(mn xng)(mn xng)乙乙型肝炎的预后。肝细胞内型肝炎的预后。肝细胞内HBcAg转阴和肝细转阴和肝细胞坏死病变减轻具有一致性。胞坏死病变减轻具有一致性。HBcAg浆膜型浆膜型者显示此种一致性，而核型则否，可能由于者显示此种一致性，而核型则否，可能由于肝细胞质、膜上的肝细胞质、膜上的HBcAg作为靶抗原易受到作为靶抗原易受到杀伤性了淋巴细胞的攻击，导致肝细胞损杀伤性了淋巴细胞的攻击，导致肝细胞

35、损害，而核型害，而核型HBcAg则不具有此种作用。则不具有此种作用。第三十二页，共四十二页。肝组织肝组织HBcAg检测的应用检测的应用(yngyng)(yngyng)(yngyng)(yngyng)价值价值 （3）HBcAg检测检测(jin c)(jin c)也是判断也是判断HBV复制状态的一项重要指标，肝组织复制状态的一项重要指标，肝组织HBcAg与与HBV DNA两种病毒复制标志物两种病毒复制标志物相关。研究结果证实肝组织相关。研究结果证实肝组织HBcAg检测具检测具有多种实用价值，值得推荐。有多种实用价值，值得推荐。第三十三页，共四十二页。2.3其他其他(qt)(qt)(qt)(qt)组

36、织的组织的HBcAg表达表达 国内学者对乙型肝炎孕妇所分娩的死国内学者对乙型肝炎孕妇所分娩的死胎进行研究，发现胎进行研究，发现HBcAg在多种脏器内均可在多种脏器内均可表达，其中以肺、肝、肾脏、脐带为最高，表达，其中以肺、肝、肾脏、脐带为最高，胸腺、心脏、脾、胎盘次之，大脑最低。胸腺、心脏、脾、胎盘次之，大脑最低。说明说明HBV有可能在多种组织内复制并表达抗原有可能在多种组织内复制并表达抗原。这可能是。这可能是HBV通过产妇传播，导致通过产妇传播，导致(dozh)(dozh)新生新生儿乙型肝炎的高发病率、新生儿发育不良和儿乙型肝炎的高发病率、新生儿发育不良和死亡的重要因素。死亡的重要因素。第三

37、十四页，共四十二页。3 3 小结小结(xioji)(xioji)(xioji)(xioji)总之，充分认识总之，充分认识HBcAg的生物学特点和其在的生物学特点和其在血液、肝组织内表达血液、肝组织内表达(biod)(biod)的规律，有助于我们通的规律，有助于我们通过对过对HBcAg的检测而正确判断是否有的检测而正确判断是否有HBV的复制的复制以及复制的强度，正确评估肝病活动及肝组织损以及复制的强度，正确评估肝病活动及肝组织损害的程度，从而指导制定有效的治疗方案。对害的程度，从而指导制定有效的治疗方案。对HBcAg的强免疫原特性的认识，可以指导我们研的强免疫原特性的认识，可以指导我们研制更有效

38、的预防或治疗乙型病毒性肝炎的疫苗。制更有效的预防或治疗乙型病毒性肝炎的疫苗。第三十五页，共四十二页。4 HBcAg的ELISA法检测(jin c)(jin c)4.1试剂 HBcAg ELISA试剂(shj)(shj)由北京美迪科生物技术有限公司提供，试剂(shj)(shj)主要包括HBsAb包被板、HBcAg包被板、开壳剂、HBcAb-HRP结合物、底物液TMB等。第三十六页，共四十二页。4.2 步骤(bzhu)(bzhu)（1）标本处理：取血清检测。（2）乙肝病毒Dane颗粒的分离。将HBsAb包被板用蒸馏水洗2次并拍干，每孔加样本、阴阳(yn(yn yn)yn)性对照血清各100ul（空

39、白对照孔不加），用封片纸封好，45温育30分钟，弃去孔内液体并用蒸馏水洗7次并拍干。（3）加开壳剂释放出HBcAg。将上述的HBsAb包被板每孔加入100ul开壳剂（空白对照孔不加），置45温育30分钟。第三十七页，共四十二页。4.2 步骤(bzhu)(bzhu)（4）中和抑制法检测HBcAg。将上述的HBsAb包被(bo(bo bi)bi)板每孔中的开壳液转移50ul至相应的已用蒸馏水洗2次并拍干的HBcAg包被板中（注意每份样品要更换一个吸头，以防交叉污染），然后每孔加入HBcAb-酶结合物50ul（空白对照孔不加），混匀并封板，置45温育30分钟，弃去孔内液体并用蒸馏水洗7次并拍干。第三

40、十八页，共四十二页。4.2 步骤(bzhu)(bzhu)（5）显色。将上述的HBcAb包被板每孔中加底物液A、B各50ul，混匀，室温放置10-20分钟。每孔中加入终止(zhngzh)(zhngzh)液（2MH2SO4）50ul，混匀，选择波长450nm，空白孔调零，上酶标仪测OD值。（6）结果判定。Cutoff值（界限值）=阴性对照OD均值/2.1。标本OD值Cutoff值，为阳性；OD值Cutoff值，为阴性。第三十九页，共四十二页。4.2 步骤(bzhu)(bzhu)（5）显色。将上述的HBcAb包被板每孔中加底物液A、B各50ul，混匀，室温放置10-20分钟。每孔中加入终止(zhng

41、zh)(zhngzh)液（2MH2SO4）50ul，混匀，选择波长450nm，空白孔调零，上酶标仪测OD值。（6）结果判定。Cutoff值（界限值）=阴性对照OD均值/2.1。标本OD值Cutoff值，为阳性；OD值Cutoff值，为阴性。第四十页，共四十二页。第四十一页，共四十二页。内容(nirng)总结HBcAg的检测与应用。HBcAg出现的阳性率与HBsAg的出现密切相关，往往HBcAg（）与HBsAg（）同时存在，而HBsAg（）时不一定会出现HBcAg（）。不能以HBsAg阴性就排除HBV感染，临床上HBsAg阴性的患者，只要HBcAg检出阳性，说明仍有乙型肝炎病毒复制。一般(ybn)认为，当HBeAg/抗-HBe转换后，HBV复制趋于减少，没有传染性或传染性很小第四十二页，共四十二页。