重医大查新项目委托书及科技查新报告范例.docx

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1、查新项目委托书编号查新项目名称中文：肾脏纤维化发病的细胞分子机制及药物防治研究英文：Study on the cellular-molecular mechanisms of renal fibrosis and therapeutic drug单位名称通讯地址邮政编码负责人电话传真联系人电话电子信箱机构名称通讯地址邮编：电子信箱：负责人电话传真联系人电话传真一、查新目的、查新范围及查新级别1. 科研立项成果鉴定口申报奖励 申请专利 口技术引进 口其他（请注明）2. 国内查新口国外查新口国内外查新3. 国家级口部委口省（直辖市）级口其他_、查新项目的科学技术要点：说明查新项目内容要点、技术关键

2、（路线、工艺、方法等），主要指 标及水平、新颖性、先进性等，并简明扼要列出须进行查新检索分析对比评价的要点。（一）动物实验部分1、巨噬细胞浸润与肾脏病变：我们的研究发现，肾炎初期巨噬细胞的浸润先于基质成分增多。肾组 织巨噬细胞浸润与蛋白尿、Scr、肾小球基质成分FN、IV型胶原之间有直接相关性。在肾炎30天和90 天，部分大鼠发生肾纤维化病变，尤其是肾间质有FN、1 1 1和IV型胶原沉积和巨噬细胞明显浸润，且 巨噬细胞与III型胶原及Scr的变化呈正相关，表明巨噬细胞可能通过使III型胶原生成增多并沉积而 使肾间质纤维化。2、肾小球病变与细胞因子和信号分子：（1）我们的研究提示在DN发病过程

3、中，高血糖作为始动因 素诱导了肾小球PKC。表达，使肾小球滤过率和膜通透性增高，参与了蛋白尿的发生机制，同时将信号转 入细胞，促进TGF-Bi和a-SMA的表达,使肾小球肥大和纤维化；（2）肾小球内TGF-B1的表达增加可 能促进了肾小球细胞内VEGF的表达，VEGF可能通过与系膜细胞表面VEGF受体结合，活化细胞内信号转 导系统（如MAPK信号系统），从而促进系膜细胞合成胶原、FN等，导致ECM沉积。本研究表明，在糖尿 病发病过程中，肾小球内VEGF表达增加，可能是DN大鼠高滤过，蛋白尿和肾小球肥大以及纤维化的一 个重要的致病因素。3、肾小管-间质病变与细胞因子和信号分子：（1）本研究表明T

4、GF-B1的表达先于a-SMA的表达和 ECM沉积增多，可推测TGF-储参与了 a-SMA表达的调控并进而使肾间质ECM的生成及沉积更增多，而 且糖尿病初期肾小管内MAPK1/3信号通路激活，可能直接调控了细胞生成FN增多，同时通过促进TGF-8 I生成而间接促进FN生成和沉积，使肾小管基底膜增厚和肾小管间质ECM增生，在糖尿病大鼠肾脏肥大 及肾小管间质纤维化中可能起重要作用；（2） PKCa还可能是CTGF促进FN生成的信号转导物，使肾小管12 .郭兵；肖瑛;张翠（贵阳医学院病理生理学教研室）报道了糖尿病大鼠肾小球转化生长因 子B 1和血管内皮生长因子的表达，观察了糖尿病大鼠肾小球转化生长因

5、子B 1 （TGF- P 1） 和血管内皮生长因子（VEGF）表达的动态变化，探讨其与细胞外基质沉积以及肾损害之间的关 系，认为大鼠糖尿病状态诱导肾小球内TGF-8 1和VEGF表达增力口，可能在糖尿病肾病大鼠高滤 过、蛋白尿和肾小球肥大以及纤维化发病中起作用（贵阳医学院学报2005.08. 30;30（4） 298-301）.肖瑛;石明隽；张国忠；郭兵;桂华珍;万昌武;杨勤（贵阳医学院病理生理学教研室，贵阳医 学院病理学教研室）报道了糖尿病大鼠肾小管PKCa和CTGF表达的动态变化，随机将SD 大鼠分为正常对照组（A组）、糖尿病2周组（B组）、糖尿病4周组（C组）、糖尿病8周组（D组）、 糖

6、尿病12周组（E组）。用免疫组织化学方法检测CTGF、PKCa、FN的表达;用Western印迹法检 测CTGF蛋白表达水平;PAS染色,光镜观察肾组织的形态改变;生化方法测定血糖、血肌酎、甘 油三酯、总胆固醇及24h尿蛋白。结果:随着糖尿病病程的进展，出现肾小管和间质病变，肾小 管表达PKCa和CTGF增多，表达部位一致,与此同步，小管间质FN表达也增加，三者之间呈显著 正相关2周组大鼠血糖高于其余糖尿病组,血脂和血肌好明显高于正常对照组;蛋白尿十分 显著，并且与CTGF和PKCa呈显著正相关。结论:糖尿病状态促进CTGF分泌增多从而使肾小管 间质FN等细胞外基质沉积增多，使肾脏肥大和纤维化

7、,而PKCa参与该过程的信号转导。（中 国病理生理杂志2007;23（1） 183-185）13 .张翠；田陈;郭焕；肖瑛;郭兵;张国忠（贵阳医学院病理生理学教研室）报道了糖尿病大鼠 肾小管VEGF表达的动态观察及其与Angll、PKC、ERK关系的研究，,将大鼠随机分为3d、1 周、2周、4周、8周组,每组均设相应正常对照组。用链版佐菌素复制糖尿病模型；免疫组化 法检测肾小管AngII、VEGF、PKCa、ERK、FN（纤维连接蛋白）的表达，Western blot检测VEGF 蛋白质;PAS染色光镜观察肾组织形态改变;生化法测定血糖、血肌酎及尿蛋白。结果:DM大鼠 肾小管Ang II的表达

8、从3d、VEGF和PKCq的表达从1周、ERK和FN的表达从2周开始均显著升高, 并随着病程发展而逐渐增高,DM4周和DM8周时,AngH、VEGF、PKCa . ERK和FN的表达相互间 均呈正相关,且均与24h尿蛋白、肾重体重比呈正相关。结论:糖尿病状态诱导肾小管PKCa激 活后介导VEGF生成增多，从而促进蛋白尿及肾脏肥大的发生；高糖-AngH-VEGF-ERK通路可能 参与糖尿病肾脏纤维化过程。（中国现代医学杂志2008;18（3） 313-317, 320）.金剑虹;洪郁芝;魏燕；叶迅;付莉萍;胡卫芬（浙江省中医学院附属二院）报道了2型糖尿 病肾病患者尿VEGF、TGF-B 1、Co

9、-W的变化及意义，将符合1999年WHO诊断标准的108例（男 55例，女53例）2型糖尿病患者,根据24h尿白蛋白排泄量分为3组,采用酶联免疫法（ELISA）,分 别测定四组研究对象尿VEGF、TGF-8 1、Co-W水平。认为VEGF、TGF-B 1和Co-IV与糖尿病肾 病的发生发展有关；并且尿VEGF可能为早期糖尿病肾病的预示指标，而尿TGF-B l、Co-IV可能 为判断糖尿病肾病严重程度的指标。（医学研究通讯2004.11.25:33（11） 16-19）14 .戎健;邱鸿鑫;汪恕萍（第三军医大学大坪医院野战外科研究所内分泌科）报道了晚期糖 基化终末产物和蛋白激酶C对糖尿病大鼠肾脏

10、的影响，给予糖尿病大鼠胰岛素和氨基胭治 疗,测定血糖,糖化血红蛋白人院（死人10、肾小球A6（6丁-八6）、蛋白激酶C（PKC）、肾小球基 底膜厚度（GBMT）和尿Pr/Cr比值。结果:糖尿病大鼠在血糖、HbAlC和AGE水平增高的同时,PKC 活性、尿Pr/ Cr比值和GBMT都显著增加（P值小于0.01）;胰岛素可减少HbAlC和AGE形成，恢复 PKC活性,氨基月瓜可减少AGE形成，但对PKC活性无影响。两种药物均可减缓尿Pr/Cr比值和GBMT 增加（P0.01或P0. 05） o结论:慢性高血糖可增高肾小球PKC活性,非酶促糖基化可能未直接参与PKC活性改变，但PKC可加强AGE对肾

11、脏的影响。减少AGE形成，改善PKC活性对糖尿病肾病 的防治尤为重要。(中华肾脏病杂志1999.04. 15; 15(2) 102-106).姚丽君;王剑青;毛艳;邓安国;刘建社;朱中华(华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内 科)报道了蛋白激酶C-。、蛋白激酶C-B I和蛋白激醵C-8 II在糖尿病肾病患者肾小球中 的表达及其意义，探讨了蛋白激酶C(PKC)-q、PKC-B I PKC- 3 II在人正常肾组织以及糖尿 病肾病患者(DN)肾小球中的表达及其与肾小球内转化生长因子(TGF-B I和血管内皮细胞生 长因子(VEGF)的关系。认为PKC-a、PKC-B I PKC-8 II在正常人

12、以及DN患者肾小球中的表达 不同；PKC-a可能通过增强肾小球内VEGF的表达，而PKC-B I能通过增强肾小球内TGF-8 I 表达参与DN的发病过程。(临床内科杂志2007;24(7)： 464-466)15 .石明隽；罗化；肖瑛;郭兵；张国忠(贵阳医学院病理生理学教研室)报道了阿魏酸钠对高 糖诱导下原代系膜细胞增殖的影响，原代培养肾小球系膜细胞,分为正常组、甘露醇组、高 糖组、高糖加不同浓度SF组,分别于处理后24 h、48 h收集细胞。用4-甲基偶氮嗖蓝(MTT) 法检测细胞增殖;免疫细胞化学检测P53和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的表达。结 果:48 h内，高糖促进GM

13、C增殖并上调p38MApK蛋白的表达,抑制p53的表达,SF能明显对抗高糖 的这种作用，其作用随SF浓度的增加、作用时间的延长而加强。结论:SF可能是通过抑制 P38MAPK通路,促进p53的合成,从而抑制高糖诱导的GMC增殖。(贵阳医学院学报 2008;33(3)： 259-262).桂华珍罗华石明隽肖瑛郭兵 张国忠(贵阳医学院多媒体机能实验室)报道了阿魏酸 钠抑制高糖诱导系膜细胞表达PAIT和P38MAPK，原代培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常 组、甘露醇组、高糖组、高糖加不同浓度SF组，分别于处理后24h、48h收集细胞。用免疫细 胞化学检测各组细胞P38MAPK的表达，流式细胞术检测P

14、AI-1蛋白。结果：48h内，高糖促进 PAI-1和p38MApK蛋白的表达，而SF能明届抑制高糖的这种作用，其作用随SF浓度的增加和作 用时间的延长而加强。结论：SF能拈抗高糖诱导的GMC表达PAI-1增多和抑制p38MAPK信号通 路(贵阳医学院学报.2009, 34(1)： 26-29)16 . Menne J, Park JK, Boehne M等报道了Diminished loss of proteoglycans and lack of albuminuria in protein kinase C-alpha-def icient diabetic mice，认为PKC a 通过

15、下 调基底膜中的蛋白聚糖，以及VEGF表达介导葡萄糖诱导的蛋白尿。因此PKCa是预防糖尿病 蛋白尿的一种可能靶点。(Diabetes. 2004 Aug;53(8) :2101-9). Menne J, Meier M, Park JK等报道了 (Nephrin loss in experimental diabetic nephropathy is prevented by deletion of protein kinase C alpha signaling in-vivo，认为PKC &激活可能是一个调节糖尿病状态去氧肾上腺素表达和肾小球白蛋白通透性的重要细胞内 信号通路(Kidney

16、 Int. 2006 Oct; 70 (8) : 1456-62.)17 . Thallas-Bonke V, Thorpe SR, Coughlan MT等报道了Inhibition of NADPH oxidase prevents advanced glycation end product-mediated damage in diabetic nephropathy through a protein kinase C-alpha-dependent pathway，发现糖尿病诱导的PKC Q 易位与 NADPH超氧化物产品及提高的肾、血清、尿VEGF浓度相关，认为糖尿病肾病中NAD

17、PH氧化酶通 过PKCa 激活是AGE受体的下游区。(Diabetes. 2008 Feb;57(2) :460-9).桂华珍;刘启兰;张国忠(贵阳医学院)报道了“慢肾康”抗肾纤维化的实验研究，动态 观察了中药提取物“慢肾康”抗3/4肾切除大鼠肾纤维化的作用。结果显示，“慢肾康”治疗 组动物的蛋白尿、血尿素氮和肌酢值显著低于对照组，肾小球纤维化程度较对照组明显减轻,肾小管和肾间质病变亦比对照组轻，而两组血压差异不大,均显著升高。研究表明，“慢肾康” 有抗肾纤维化及延缓慢性肾衰进展的作用。其作用机制可能是药物对肾组织的直接影响，而 非通过降低血压使肾病变得以改善（贵州医药1998. 08. 25

18、;22（4）： 250-252）.郭兵，万昌武，桂华珍，张国忠（贵阳医学院病理生理教研室）报道了慢肾康延缓大鼠 慢性肾功能衰竭的实验研究，采用肾3/4切除法复制实验性慢性肾衰大鼠模型,用慢肾康加 入饮水中进行用药，观察肾功能和肾组织形态及基质成分的变化。结果：与对照组比较，治疗 组大鼠的尿蛋白、血尿素氮和肌酎值均显著降低；肾小球纤维化程度明显减轻，肾小球内纤维 连接蛋白沉积减少。结论:慢肾康有减轻肾小球纤维化及延缓慢性肾衰进展的作用。（中国中 西医结合杂志,2001,21 （5）:92-4）18 .李福民符磊（苏州医学院附属第一医院）报道了活血养阴合剂对大鼠肾小管间质损害所 致慢性肾功能衰竭作

19、用的实验，采用口饲腺喋吟方法制成大鼠肾小管一间质病理损害为主 的慢性肾衰模型，观察活血养合剂（丹参，益母草，山楂，生地，乌梅等）对该模型的防治 作用。结果表明：治疗组动物血清尿素氮，肌醉，血磷和胆固醇均明显低于病理对照组，而 血清白蛋白，血钙明显高于病理对照组，尿渗透压也高于病理对照组，肾组织病理损伤程度 明显减轻（上海中医药杂志.1海中医）:42-44）.任志强 刘运良（湖南省益阳市中心医院）报道了三黄肾康丸治疗大鼠慢性肾衰的实验研 究，连续喂养0.75%腺喋吟使Wister大鼠产生类似于人慢性肾误的症状。2周后，治疗组大 鼠每天用中药三黄肾康丸（大黄、熟地、黄黄等14味中药组成，12.0g

20、/kg、6. Ok/kg）灌胃， 连续6周，并于第4、8周测定大鼠血尿素氮（BUN）、肌酎（Scr）、RBC、HGB、HCT及肾脏病理 学检查.结果：三黄肾康丸明显改善大鼠肾衰的症状，与模型组大鼠比较，肾重量减轻（P 0.01）,纤维化程度降低，肾组织内结晶沉积物减少。（中国药房.2001, 12（1）： 20-21）19 .孔昭东（上海市徐汇区中心医院）报道了活血益肾排浊法治疗慢性肾功能衰竭38例，采 用中药（刘寄奴,六月雪，泽兰叶,益母草，黄芭，熟地黄，牡蛎，土茯苓，生大黄等）活血为主，益肾 排浊为辅治疗CRF38例，经2个以上疗程（4个月）治疗，结果：显效13例，有效15例，无效 10例

21、，总有效率73.68%,实验室指标观察以内生肌酎清除率（Ccr）改善较明显，尿素氮（BUN）, 肌酎（Cr）亦下降。提示活血益肾排浊法既能改善肾内微循环以延缓肾单位纤维化，又能排 除体内肾毒素而缓解病情（上海中医药杂志素而1,35（10）： 28-29）.桂华珍;郭兵;万昌武;张国忠（贵阳医学院）报道了中药“糖尿康”对糖尿病大鼠肾脏保 护作用的研究（福建中医学院学报2001.04. 20;ll（S）： 43-44）20 .郭兵，桂华珍，张国忠，万昌武（贵阳医学院）报道了依那普利和丹芭复方对糖尿病大 鼠肾小球MAPK和PKC_a途径的影响，Wistar大鼠随机分为正常对照组（A组）和糖尿病组 （

22、B、C、D组）。用链胭菌素复制糖尿病模型，B组为糖尿病对照组，C组为糖尿病依那普利组， 按2mg/kg.d给药，D组为糖尿病中药组，按1 8g/kgd中药浸膏给药，持续6 0天。用免 疫组化检测MAPK、PKCa、TGFB 1和FN在肾小球的表达；用生化方法测定大鼠血糖、血脂、 血肌酎和尿蛋白；光镜观察肾小球形态。结果糖尿病各组肾小球MAPK、PKCa、TGFB1和FN 的表达明显高于正常对照组，但用药组（C、D组）的表达则低于未用药组（B组）。形态观 察显示，C、D组肾小球病变比B组轻。B组血糖与C、D组无明显差异，但血脂、血肌酊和尿蛋 白则高于C、D组。结论依那普利和丹芭复方可抑制糖尿病大

23、鼠肾小球MAPK和PKC a信号途径， 从而改善肾小球的形态和功能（贵州医药,2004, （8）： 683-6）21 .沈雯 陆福明顾勇 林善镂（复旦大学附属华山医院肾内科200040）报道了黄苓素对高糖诱导近端肾小管上皮细胞外基质及转化生长因子B 1表达的影响，将LLC-PK1细胞分为(1) 正常对照组(NG)； (2)高糖组(HG)； (3)田+蛋白激酶抑制剂但迎1)组(101111101/ Lchelerythrine chloride) ； (4)HG+黄苓素组(50 u mol / L) ； (5)HG+黄苓素组(100 U mol / L)； (6)HG+黄苓素组(200 umol

24、/L)。检测各组PKC活性，并采用原位杂交法和细胞免疫化学 技术(ABC法)分别检测细胞胶原(Col) IV、纤连蛋白(FN)及TGF-BlmRNA和蛋白的表达。结果 在高糖培养基中加入黄苓素100 nmol / L及200 umol / L后可显著抑制细胞膜PKC活性 (P0. 01),分别使细胞膜PKC活性下降42 %、68%； 200 nmol/L黄苓素能使高糖组细胞Col IV、FN及TGF-B ImRNA表达均显著下降，分别达55%、51%、46%,并显著抑制TGF-B 1蛋白 表达达51%(P0.05) o结论 黄苓素可通过抑制细胞PKC活性而阻止高糖诱导近端小管细胞 过度表达EC

25、M及TGF-B 1。(中华肾脏病杂志.2003, 19(3)： 173-176).沈雯陆福明顾勇林善镂(复旦大学附属华山医院肾内科)报道了黄苓素对高糖诱导近 端肾小管上皮细胞外基质及转化生长因子B 1表达的影响,LLC-PK1细胞分为(1)正常对照组 (NG)； (2)高糖组(HG)； (3)HG+蛋白激酶抑制剂(PKCI)组(lOumol / Lchelerythrine chloride)； (4)HG+黄苓素组(50 u mol / L) ； (5)HG+黄苓素组(100 u mol / L) ； (6)HG+黄苓素 组(200 nmol/L)。检测各组PKC活性，并采用原位杂交法和细胞

26、免疫化学技术(ABC法)分别 检测细胞胶原(Col) IV、纤连蛋白(FN)及TGF-B IniRNA和蛋白的表达。结果 在高糖培养基中 加入黄苓素100 u mol / L及200 u mol / L后可显著抑制细胞膜PKC活性(P0. 01),分别使细胞 膜PKC活性下降42%、68%； 200 -mol/L黄苓素能使高糖组细胞ColW、FN及TGF-B ImRNA 表达均显著下降，分别达55%、51%、46%,并显著抑制TGF-B 1蛋白表达达51 % (P20036810#7 ：Search Protein Kinase C Limits: PY200335972#6 ：Search Diabetic Nephropathies Limits: PY200310626#5Search (#1 OR #2) AND #3 AND #4 Limits: PY200339#4Search collagen128611#3Search Macrophages”Mesh109536#2Search Kidney Fibrosis8247#1Search Renal Fibrosis7667五、检索结果：1. 张雅丽;万昌武;桂华珍;郭兵;张国忠（贵阳中