肥达实验与外斐试验的临床应用.docx

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1、肥达实验与外斐试验的临床应用肥达实验1 病原体伤寒杆(1 )沙门菌属，G杆菌，有鞭毛；释放内毒素致病(2)三种抗原：菌体抗原。和鞭毛抗原H抗原性较强,可刺激机体产生相应抗体，有助于诊断表面抗原Vi抗原性不强，但有助于发现带菌者2、病原体副伤寒杆菌3种病原体：副伤寒甲杆菌、副伤寒乙杆菌、副伤寒丙杆菌每种副伤寒杆菌均有 0和 H 抗原3、肥达反应(1 )伤寒杆菌凝集试验，Widal reaction ( WR )(2)伤寒、副伤寒诊断的参考(3 )一种血清凝集反应，用已知的伤寒杆菌0、H抗原和甲、乙、丙型副伤寒杆菌H抗原，测定患者血清中相应抗体(4 ) 0抗原为伤寒、副伤寒甲、乙杆菌的共同抗原，三

2、者的鞭毛抗原(H、A、B )不同4、结果判定：“有病无病先看0,是什么菌看H”i染后1周左右出现抗体，34周阳性率可达70-80%(2)阳性结果： 0抗体之1:80,或有4倍增高者更有意义H或其他鞭毛抗体2 1:1 60 ,或有4倍增高者更有意义O抗体(IgM)-出现早，消失快；H抗体(IgG)-出现迟,维持时间长(3)临床意义：TO1HTATBTC意义+发病早期+不久前患 过伤寒/菌 苗接种/非 特异性回 忆反应+伤寒+副伤寒甲+一 +副伤寒乙一-一一 .一 -+副件寒丙(4)其他：假阴性：早期应用抗生素；营养不良者；抗体免疫功能缺陷者；免疫功能尚未完善的幼儿假阳性：其他疾病，如血吸虫，败血

3、症，结核，传染性肝炎，结缔组织病，肿瘤，溃疡性结肠炎等5、伤寒确诊不能只靠肥达(1 )临床：发热+体征+血RT/肥达伤寒临床六大特征：持续发热、相对缓脉、全身中毒症状、玫瑰 疹、肝脾肿大、白细胞减少(2)确诊：发热+特异性抗体/病原学，病原学为诊断金标准外斐试验1 病原体立克次氏体大小介于细菌与病毒之间，呈多形球杆状，Gram染色阴性，Giemsa染色紫色，寄生于真核细胞内，生物特性接近细菌,胞壁的脂多糖层有内毒素样作用2、病原体变形杆(1 ) G杆菌，无英膜，有鞭毛(2 )三个菌株：X19 , X2 , XK(3 )三种抗原：菌体抗原0，鞭毛抗原H，抗原K3、外斐反应(1 )变形杆菌0抗原凝

4、集反应，Weil-Felix reaction ( WFR )(2)变形杆菌用与立克次体有共同菌体抗原，进行非特异性凝 集反应，检测病人血清中有无立克次体抗体4、结果判定(1 )感染后5 12天出现抗体，至数月后基本消失(2)阳性结果： 普氏立克次体：0X19凝集价21:160或病程中上升4倍以 上,阳性率70-80% 莫氏立克次体：0X19凝集价低滴度升高，阳性率70-85%(进一步诊断依赖于补体结合试验和立克次体凝集试验) 恙虫病：OXK凝集价2 1:160或早晚期双份血清效价上升4 倍以上，最早第4天出现阳性，3-4周达峰5、临床意义立克次体普氏 立克 次体莫氏 立克 次体东方 立克 次

5、体疾病流行 性斑 疹伤 寒地方 性斑 疹伤 寒恙虫 病变 形 杆 菌 菌 株OX19+ox2+OXK+其他立克次体病：洛杉矶斑点热、立克次体痘、战壕热、Q热：(一)北亚婢媒立克次体病：0X19、0X2(+) , 0XK ()6、其他假阳性： 变形杆菌性泌尿系感染伤寒 钩端螺旋体病 回归热 疟疾 布氏杆菌病严重肝病妊娠（轻度升高）肥达试验wi dal test0与H抗体的诊断意义口幽体IgM,出现较早，消失快：-毗体IgG,出现较晚，持续时间长。“有病无病先看0,是什么菌看H 诊断诊断O抗体H抗体1肠热症_感染早期或与伤寒沙门菌o抗原有交一叉反应的其他沙门菌感染预防接种或非特异性可忆反应-患病可

6、能性小1.正常效价伤寒沙门菌。抗体1:80 , H抗体 1:160 ;副伤寒沙门菌H抗体 1:802、动态观W 2份血清，第二次效价增长4倍以上有意义3、O. H抗体的诊断意义O-Ab-IgM （出现早，持续短，难重现）；H-Ab-IgG （出现晚，持续长，易重现）。高H高很可能是肠热症；O不高H不高很可能不是肠热症；O不高H高一预防接种或者非特异性免疫反应；。高H不高感染早期或与其他伤寒沙门菌0抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。肥达氏反应是一种凝集反应，1 896年由法国医师肥达（Widal ） 建立并用于临床，故名。用已知的伤寒沙门菌鞭毛（H ）、菌体（0 ）抗原和甲.乙.丙型副伤寒沙门菌H

7、抗原，与待测血清作试管或微孔板凝集试验，以测定血清中有无相应抗体存在，用于 辅助诊断伤寒和副伤寒。机体感染伤寒、副伤寒沙门菌后会产生相应抗体，正常人因隐性 感染或预防接种，血清中可含有一定量的抗体。一般当H1 ： 160 , 01 ： 80 ,副伤寒凝集价N1 ： 80时，才有诊断意义。肥达反应必 须动态观察，病程中应每周复直一次，如病人H与O的凝集价 均高于参考值或较原凝集价升高4倍以上，则患伤寒的可能性很 大。若H凝集价高而O低于正常值，则可能是以往预防接种疫 苗的结果或非特异性回忆反应所致。肥达氏试验受影响因素较多， 存在一定比例假阴性和假阳性。故对结果的判断要综合分析，肥 达试验阴性，

8、亦不能排除患伤寒或副伤寒的可能。作为临床医师要结合血液、骨髓和粪便培养结果来综合分析判断。虽然肥达氏反应操作繁琐，敏感度不是很高，但作为经典的免疫 学检测方法，目前仍在临床应用（可能某些地区应用较少），暂 无替代方法。肥达氏反应主要是诊断伤寒杆菌的一种方法，其准确性较低，假 阳性略高，但其操作方便。替代方法较多： 血培养，准确性高，根据报导在病人发病710日可达90% 的阳性率； 酶联免疫、荧光免疫； 粪便标本的培养； PCR检测等。伤寒的实验室诊断最经典的方法是肥达反应，已有100多年历史, 始终伴随着争议。以往由于条件所限，肥达反应是疑似病例诊断 为伤寒的唯一的实验室手段。但肥达反应存在诸

9、多问题，在诊断 上不敏感不特异，已表现出显著的局限性，需要改用其他检测方 法以克服肥达反应在检测特异性和灵敏度、以及检测时限上存在 的问题。比如ELISA方法可以代替肥达反应来监测血清中抗原或 抗体，是一种相对既灵敏又特异的诊断方法；还有其他一些商品 化的IgM 抗体检测试剂盒，包括 Tubex test、 Typhidot/Typhidot-Ms IgM Dipstick 等，其敏感性和特异性均 优于肥达反应。但血清学方法存在共同的缺点，即存在明显的交叉反应，原因与 沙门菌属基因组90%以上为共有，拥有很多共同抗原有关。因此, 在现场条件不容许使用培养或肥达反应的地方，一些简单的血清 学方法

10、可能有用武之地，只是方法特异性低的问题还需要进一步 解决。分离培养法是最基本也是诊断伤寒病例的金标准。培养所用的标 本可有骨髓.血液.粪便和尿液。由于培养方法受标本采集时机 和抗生素应用的影响，阳性率会大大降低，而且培养所需时间较 长，因此该方法存在明显不足，但可为预防控制，预测伤寒的流 行趋势，菌株的进化关系等提供基础资料。PCR检测标本中的伤寒沙门菌核酸，是目前公认最为敏感和特异的诊断方法。但PCR方法容易受污染影响，另外，伤寒和甲型副 伤寒沙门菌是胞内寄生菌，抗生素的滥用加剧了血液中细菌数量 的减少，制备DNA模板过程中样品的损失增加PCR扩增的难度， 其特异性和敏感性目前仍存有争议。敏感性和特异性通常是一对矛盾，且快速、敏感性高且特异性好 的检测方法是临床和检验人员追求的共同目标。对发热待诊患者 进行伤寒相关实验诊断较敏感、特异的方法，除肥达氏外，有沙 门氏菌测试片、骨髓培养法、沙门氏显色培养基法。