罗氏试剂盒说明书 B-CrossLaps 12143534001V8.docx

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1、B -CrossLaps/serum （血清 B -CTx）11972308 122100测试本试剂盒适用的分析仪Elecsys1010EIecsys2010MODULARANALYTICS E170cobase 411cobase 601 将反响液吸入测量池中，通过电磁作用将磁 珠吸附在电极外表。未与磁珠结合的物质通 过ProCel I被去除。给电极加以一定的电 压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器 测量发光强度。 Elecsys软件自动通过定标曲线计算得到检测结果。a） Tr i s （2, 2-b i pyr idyl）ruthen i um（I I） -comp I ex2+（Ru（

2、bpy） （三联批噫钉3主要用途用于体外定量检测人体血清或血浆中的I型胶 原降解产物。该检测适用于绝经期后妇女和骨 量减少个体抗骨重吸收治疗（如二磷酸盐类和 激素替代治疗）的疗效评估。Elecsys和cobas e免疫分析仪的工作原理是 电化学发光免疫分析“ECU A”。临床应用骨基质的有机成分中，I型胶原的含量超过 90%1o I型胶原受骨基质合成和分解的调控， 因此，骨代谢的过程中成熟的I型胶原被降解 成小分之片段进入血循环，并通过肾脏进行排 泄。通过检测骨吸收指标，可了解骨转换的程 度。生理或病理性骨吸收增强时（如老年人或 骨质疏松症），I型胶原的降解也增高，血中 的分解片段含量随之也相

3、应升高。I型胶原降解产物的主要分子片段是较基端肽 （CTx）o在骨成熟过程中，C端肽的a-天冬氨酸转变成B型天冬氨酸（3-CTx） 2,3o此类 较基端的异构肽是I型胶原降解的主要特异 性产物。血清CTx水平的增高说明患者的 骨吸收程度增加，骨吸收抑制治疗后血清B -CTx水平会恢复正常4 5, 6, 7。检测血清CTx适用于监测骨质疏松症或其它 骨疾病的抗吸收治疗（如二磷酸盐类和激素替 代治疗）。疗效一般几周后就能表达“8。血清EI ecsys 3 -CrossLaps检测针对特异的 I型胶原交联异构肽片段，与天然的骨交联成 份（如毗咯，喀唉等）不反响。由于采用了针 对线性8AA八肽（EKA

4、HD-B-GGR）的两种 单克隆抗体，能检测出所有包含B-8AA双体 的I型胶原降解片段（B-CTx）。检测原理双抗体夹心法，总检测时间：18分钟 第一次孵育：50 口 I样本和生物素化的单克隆ant i - B -CrossLaps抗体一起孵育， 血清中的抗原与抗体结合形成复合物。 第二次孵育：添加好复合物标记,的单克隆anti- B -CrossLaps抗体和包被链霉素的 磁珠微粒进行孵育，形成双抗体-抗原夹心 复合体与磁珠通过生物素和链霉素的作 用结合。试剂一工作溶液M包被链霉素的磁珠微粒（透明瓶盖），每瓶 6.5ml ；包被链霉素的磁珠微粒， 0. 72mg/ml ;防腐剂。R1生物素

5、化的ant i- 3 -CrossLaps抗体（灰 色瓶盖），每瓶10ml:生物素化的anti-B -CrossLaps 抗体（鼠源）约 2. 5mg/L,磷 酸盐缓冲液100 mmol/L, Ph7. 2；防腐剂。R2锌复合物标记 2 的anti- B -CrossLaps抗体 （黑色瓶盖），每瓶10ml:行复合物标记, 的 anti- B -CrossLaps 抗体（鼠源） 2. 4mg/L；磷酸盐缓冲液 100mmol/L, Ph7. 2； 防腐剂。警告和考前须知仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操 作的考前须知。所有废弃物必需按照当地法规进 行处置。专业人员可要求获

6、得安全数据报告。防止试剂和样本（样本、定标液和质控品）产 生气泡。试剂处理试剂盒（M,R1和R2）为即用型,不能分开使用。 试剂相关信息可以通过试剂条形码阅读获取。储存及稳定性存放于2-8o请垂直摆放Elecsys B-CrossLaps试剂盒，确 保仪器的自动搅拌器能够完全混匀磁珠微粒。 稳定性：未开封试剂，2 8有效期内均可使用开封试剂，2-812周放置分析仪MODULARANALYTICS E170 和 cobas e 601 上8周放置分析仪EI ecsys2010 和 cobas e 411 上8周放置分析仪EI ecsys1010 上4周（试剂交替放置于 冰箱和20-25的分 析仪

7、中，持续开盖的情况下至多20小时)样本的采集和准备以下类型的样本符合检测要求，并且样本量要 充足。血清样本须用标准试管收集。肝素钠和K3-EDTA抗凝的血浆都适用。标准：回收率90710%,斜率0.97.1,截距 士2倍分析灵敏度(LDL),相关系数0.95。建议使用早晨空腹采血的标本，由于血清B -CTx的释放具有节律性，因此长期随访的标本 采集应在相同的条件下进行。K3-EDT A抗凝血浆的稳定性优于血清。血清稳定性：20-25可保存8小时,4-8可 保存8小时。肝素抗凝血浆稳定性：20-25可保存24小时， 4-8可保存24小时。K3-EDTA抗凝血浆稳定性：20-25可保存24 小时,

8、4-8可保存8天。上述标本-20可保存3个月。长期保存建议-70, 一次冻融。溶血标本(Hb0.5g/dL)会引起B-CTx浓度的 增高。选择合适的试管进行不同类型样本的采集，不 是所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本 采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会 影响检测结果。如果使用原始管进行检测(样 本前处理系统)时，应遵循生产商所提供的指 导。有沉淀的样本检测前必须先作离心处理。防止 使用热灭活的样本。添加叠氮化合物的样本和 质控品均不能使用。检测前，样本、定标液及质控品须室温平衡 (20-25) o由于蒸发因素的影响，样本、定标液及质控品 在分析仪上的检测必须2小时内完成。提供的物品参

9、阅“试剂一工作溶液”章节。需要的物品(未提供)货号 11972316, 3-CrossLaps Cal Set,规格4 x1 ml货号11972227, Preci Control Bone,规格2 x2 ml,分别为PreciControI Bone 1,2 和3 实验室基础设备 Elecsys 1010/2010、MODULAR ANALYTICSE170或cobas e分析仪Elecsys 1010/2010和cobas e 411 分析仪所需 材料： 货号 11662988, ProCel I, 6 x 380 mL ,系统缓冲液 货号 11662970, CleanCel I, 6

10、x 380 mL, 测量池洗液 货号11930346, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL附加洗液货号 11933159, SysClean 适配器 货号 11706829, Elecsys 1010分析杯，12x 32反响管或者货号11706802, Elecsys 2010分析杯，60 x 60反响管货号 11706799, Elecsys 2010 分析吸头，30 x 120移液管吸头MODULAR ANALYT I CS E170和cobas e 601 分析 仪所需材料：货号04880340, ProCel I M, 2 x 2 L 系统缓冲液货号04880293

11、, CleanCel I M, 2 x 2 L测量池洗液货号03023141, PC/CC杯，12个用于在检测前预热Procell M及Cleancell Mo货号03005712, ProbeWash M, 12 x 70 mL清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时 清洗试剂针。 货号12102137,反响杯/吸头 组合装，X84反响杯/吸头组合装48盒，废物袋货号03023150, WasteLiner,废物袋 货号03027651,系统清洁适配器M所有分析仪需要： 货号11298500, Elecsys SysCIean, 5 x100 mL系统清洗液检测要优化检测性能，请遵照本说明书中有

12、关分析 仪的相关指导，并参照分析仪操作手册。试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处 于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动 读取，在特殊情况下，分析仪无法自动读取条 码信息时，请输入条码标签上的15位数字序 列。MODULAR ANALYTICS E170、 Elecsys2010和 cobas e分析仪,将冷藏试剂室温平衡至20。 左右，放置分析仪的试剂盘(20)内。防止 泡沫产生。分析仪能自动调节试剂温度和开、 关各试剂盒瓶盖。Elecsys 1010分析仪：将冷藏试剂室温平衡 至20-25。0左右,放置分析仪的试剂盘(20- 25)内。防止泡沫产生。使用前后手动开关 试剂盒瓶盖。使用

13、后保存于2-8。0冰箱。定标.溯源性：该检测方法可溯源至合成肽称量法的 参考标准。每套Elecsys 3 -CrossLaps试剂的条码标签 上均含有其批号特异的定标信息。使用 EIecsys 3 -CrossLaps定标液可调整定标曲 线。定校频率:新批号试剂必须进行定标（新试剂盒在分析仪 上放置不能超过24小时）。以下情况建议重新进行定标：MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 和 cobas e分析仪： 使用同一批号试剂，1月后（28天）7天后（同一试剂盒在分析仪上使用）EI ecsys 1010 分析仪： 每盒试剂7天后（室温20-25） 3天后（室温

14、25-32）所有仪器 根据需要：如失控。质控室内质控可使用Elecsys PreciControI Bone 1,2和3。也可以使用其他合适的质控品。各浓度质控至少每24小时内检测一次，每次更 换试剂盒或定标后也须进行质控。每个实验室 可根据各自的情况设定合适的控制限和质控 周期。质控值必须处于规定的控制限内。假设失控每个试验室必须采取相应的纠正措施。计算仪器会自动计算每个样本中的分析物浓度（单 位是ng/mL或pg/mL）。干扰因素检测结果不受黄疸（胆红素1112umol/L或 65mg/dL），溶血（血红蛋白0. 3mmo I/L或 0.5g/dL）,脂血（脂肪乳剂 1500mg/dL）和

15、生 物素（368 nmoI/L或90ng/mL）的影响。标准：回收实验回收率在10010%之内。 对于接受高剂量生物素治疗的患者（ 5mg/ 天），必须在末次生物素治疗8小时后采集样 本。浓度达15001 U/mL的类风湿因子对检测无影 响。浓度达 150ng/mL的 B-CrossLaps不产生HOOK 效应的影响。体外对17种常用药物进行试验，未发现会影响 检测结果。由于使用鼠源性的单克隆抗体，接受鼠源性单 克隆抗体诊疗过程的病人会造成错误结果。 试剂添加了额外物质减少这些影响。个别案例报道高滴度地风湿性抗体和生物素抗体会干扰检测结果。某些临床状况可能会混淆结果的解释，如甲状 旁腺功能亢进

16、和甲状腺功能亢进等。注意肾功能不良的病人由于血清3 -CTx排泄 量的减少引起检测结果的变化。血清CTx浓度的增高可引起B -CTx浓度的增 高。对于伴有甲状旁腺功能亢进和甲状腺功能亢 进的骨质疏松症患者检测血清3 -CTx不适用 于疾病的预后和骨折的风险评估。作为诊断指标，必须结合患者病史，临床检查 和其他临床资料来综合评估检测结果。不能作为终止和修正治疗方案的指标。检测范围0.010-6. 00 ng/mL或 10-6000 pg/mL （通过最 低检出限和厂商定标曲线的最高值确定）。低 于检出限的值报告0. 010ng/mL 10pg/mL）o 超过检测范围的值报告6. 00 ng/mL

17、 （6000pg/mL）o稀释检测范围较宽，不需要稀释检测。期望值以下参考范围通过EI ecsys B -CrossLaps检 测健康个体得到：NMeanSDMean + 2SDng/mLpg/mLng/mLpg/mLngmLpg/mLMen 30-50 years1650.3003000.1421420.584584 50-70 years1090.3043040.2002000.704704 70 years3650.3943940.2302300.854854Women premenopausal2540.2992990.1371370.573573 postmenopausal4290

18、.5565560.2262261.0081008Status: Men, MCE study, 2;2000; Women, follow-up measurements of samples from the OFELY study.11-12每个实验室应通过实验确定参考范围的适用 性，必要时建立本实验室的参考范围。抚慰剂对照组的监测个体生物变异的数据来源于Elecsys B-CrossLaps检测36个月的抚慰剂对照组（11 例绝经期后女性，500mg钙）血清CTx浓度 （ng/mL）获得。36个月的个体生物差异（CV%） 均值为17.9%。Subject No.Months0612182

19、43036MeanSDCV%10.330.280.250.220.310.400.290.300.05719.320.520.370.430.410.500.440.520.450.05913.030.340.250.360.220.230.290.270.280.05519.740.450.380.430.380.480.490.400.43OOM10.350.250.230.280.270.210.190.240.240.03213.360.170.150.180.100.140.150.190.150.03019.570.350.430.370.270.340.340.480.370.0

20、6617.980.35一0.260.190.210.240.310.260.05922.890.400.330.290.260.270.310.350.320.04915.4100.110.15一0.150.130.160.140.02014.1110.220.350.120.330.220.170.150.220.08839.2Median CV 17.9%抗吸收治疗组的监测抗吸收治疗的CTx浓度变化数据来源于绝经期 后女性的临床研究，包括以下2部份 a）二磷酸盐治疗b）激素替代治疗（HRT）疗效评估根据血清B-CTx的Elecsys检测结果 与个体基础值（治疗前的B-CTx浓度）的变化 进

21、行判断。所有结果与CrossLaps” ELI SA一 步法检测结果进行相关性比拟。a）二磷酸盐治疗（阿仑磷酸钠）：研究对象为女性，年龄4059岁，停经6个月 3年。相关的EI ecsys检测血清3 -CTx的浓度变化：Treatment6Subjects No.Relative change (%) from baseline after3 months6 months12 monthsPlacebo11Mean8-4-7SD#3228221 mg dose8Mean16-35-27SD+A2518255 mg dose11Mean-58-77-74SD+A35212310 mg dose9

22、Mean-73-78-79SD+A282518b) Placebc treatment: 500 mg calcium; active trearent 500 rng calcium plus indicated dose of Alendronate相关性（Passing/Bablok13）结果来源于EI ecsys B -CrossLaps检测和CrossLaps1” ELISA一步法检测39例年龄4059岁，停经6 个月3年的女性，监测时间为36个月。x: Serum CrossLaps One Step ELISA, % change y: Elecsys p-CrossLaps/s

23、erum assay, % changeSlopeInterceptCorrelation coefficientSD (y-x residuals)SlopeInterceptCorrelation coefficientSD (y-x residuals)1.22 (95% confidence range: 1.18-1.27)4.16 (95% confidence range: 2.24-6.37)0.88318.76b）激素替代治疗（HRT）相关性（Pass i ng/Bab I ok13）结果来源于EI ecsys 0 -CrossLaps检测和CrossLaps- ELISA一

24、步法检测24例年龄75岁，停经超过10 年的女性，监测时间为24个月。x: Serum CrossLapsM One Step ELISA. % change y: Elecsys p-CrossLapsiserum assay, % changeSlopeInterceptCorrelation coefficient SD (y-x residuals) 特殊的性能指标1.05 (95% confidence range: 0.99-1.11)-1.52 (95% confidence range: -3.72-0.89)0.862试剂在分析仪上的性能试验数据如下。各实验室由于具体情况不同

25、，所得出的数据可能会稍 有差异。精密度应用EIecsys试剂盒、人混合血清/血浆样本和 质控品验证重复性，按照CLSI的EP5-A2执行： 每天6次，共10天（60）。批内精密度由 MODULAR ANALYTICS E170分析仪完成,n=21 下面是获得的结果。17.59分析灵敏度（最低检出限）0.01 ng/mL （10 pg/mL）最低检出限指能检测出的分析物最低浓度，区 别于零浓度。通过最低浓度的标准品+2SD得 到（厂商定标品1+2SD,批内精密度，片21） o方法学比拟使用Elecsys 3 -CrossLaps检测和CrossLapsEL I SA 一步法检测人血清标本比拟EI

26、 ecsys B-CrossLaps检测（y）和CrossLaps” ELISA一 步法检测（X）o 标本数：96比拟样品的浓度Eecsys B -CrossLaps检测约 为0.072.2 ng/mL;比拟实验的约为620 18900 pmol/Lox: CrossLaps comparison test (pmol/L y = 0.0001 x + 0.048 y: Elecsys P-CrossLaps/serum assay (ng/mL) r = 0.983不同的检测结果取决于不同的标准品的使用。 且不能进行单位间的换算。分析特异性EI ecsys B -CrossLaps检测使用的

27、单克隆抗体 识别任何包含B -8AA肽双体的I型胶原片段。 与骨钙素，甲状旁腺素（PTH）和骨特异性碱 性磷酸酶（b-ALP）无交叉反响。功能灵敏度0. 07 ng/mL (70 pg/mL)功能灵敏度指重复性检测CV20%所对应的分 析物最低浓度。参考文献Burgeson RE. New collagens, new concepts. Ann Rev Cel I Biol 1988;4:551-577.1. Bonde M, Qv i st P, FI ede I i us C, Riis BJ, Chr i st i ansen C. Immunoassay for Quant ify

28、i ng Type I Co I Iagen Degradat i on Products i n Ur i ne Evaluated. Cl in Chern 1994；40 (11):2022-2025.2. FledeI ius C, Johnsen A, Cloos P, Bonde M, Qv i st P. Identification of a p-i somer i zed aspartyl residue within the c-terminaI telopept ide a 1 cha i n of type I col Iagen. Possible relation

29、to aging of bone. J Bone Miner Res 1996;11 (Suppl.1) Abstract No. 113. 4. Bonde M, Qv i st P, FI ede I i us C, Riis BJ, Christiansen C. Applicat ions of an Enzyme Immunoassay for a New Marker of Bone Resorption (CrossLaps) : Fo I I ow-up on Hormone Rep I acement Therapy and Osteoporos i s R i sk Ass

30、essment. J Clin Endocr i no I Metab 1995;80:864-868.5. Ravn P, Clemmesen B, Riis BJ, Christiansen C. The Effect on Bone Mass and Bone Markers of Different Doses of Ibandronate: A NewBi sphosphonate for Prevent ion and Treatment of PostmenopausaI Osteoporos i s. A 1-year, Randomi zed, DoubIe-BI i nd,

31、 PIacebo-ControI Ied Dose-Finding Study. Bone 1996;19(5):527-533.6. Rosenquist C, FledeI ius C, Chr istgau S, Pedersen BJ, Bonde M, Quist P, et a I. Serum CrossLaps One Step ELISA. Fi rst appl i cat ion of monocIonaI ant i bod i es for measurement i n serum of bone-re Iated degradat i on products fr

32、om C-termi naI teIopet ides of type I co I Iagen. Cl in Chem 1998;44(11)：2281-2289.7. Chr i stgau S, Rosenqui st C, Alexandersen P, Bjarnson NH, Ravn P, FledeIius C, et a I.Cl inical evaluation of the Serum CrossLaps One Step ELISA, a new assay measur ing the serum concentration of bone-der i ved de

33、gradation products from type I col Iagen C-teIopetides. Cl in Chem 1998；44(11)：2290-2300.8. Seibel MJ. Biochemi sche Marker des Knochenstoffwechse I s: KI i ni sche Wert igke it in der Prax i s. Ther Umsch 1998;55(11):676-684.9. Te Koppele JM. European patent appl i cat ion, EP 0829724A1. Europai sc

34、hes Patentamt, Builetin 1998/12.10. Pagan i F, Bonett i G, Stef ini F, Panteghini M. Eva Iuat ion of a Fully Automated Assay to Measure C-Telopept ide of Type 1 Col Iagen in Serum. Clin Chem Lab Med 2000;38(11) :1111-1113.11. Garnero P, Sornay-Rendu E, Duboeuf F, De Imas F. Markers of Bone Turnover

35、Predict PostmenopausaI Forearm Bone Loss Over 4 Years: The OFELY Study. J Bone Miner Res 1999;14:1614-1621.12. Ganero P, Bore I 0, Delmas PD. Eva Iuat ion of a Fu I Iy Automated Serum Assay for C-Termi na I Cross-Linking Telopept ide of Type I Col Iagen i n Osteoporos i s. Clin Chem 2001； 47 (4)： 69

36、4-702.13. Bab I ok W, et a I. A Genera I Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Cl in Biochem 1988;26:783-790.要了解更多信息，请参见分析仪有关的操作手 册、各自的应用信息单、产品信息和所有必需 部件的包装插页。用户告知：有限许可罗氏诊断提醒用户在特定的场所使用本产品, 并根据标签的提示在有效期内正确使用。COBAS, COBAS E, ELECSYS和MODULAR是罗氏集团的商标。其 他商标或产品是其所有者的商标。INTRALIPID是 Fresenius Kabi AB的商标。页面空白处的变化栏显示明显的添加物或变化。已读入的 试剂条形码参数的变化需手工编辑。2008罗氏诊断C 0123罗氏诊断产品（上海）