罗氏试剂盒说明书 Anti-HAV IgM.docx

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1、11820591 122100 个测试试剂盒适用于以下分析仪Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601主要用途：用免疫学方法定性测定人血清或血浆中的针对甲型 肝炎抗原IgM抗体，用来检测过去的或目前存在的甲 型肝炎感染，以及观察接种HAV疫苗之后的免疫反 应。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏 EI ecsys和cobas e免疫测定分析仪。临床应用：甲型肝炎病毒是一种无包膜RNA病毒，属于小RNA病 毒科。目前只发现了一种人类血清型和7种基因 型。病毒外壳体包含3种蛋白质（VP1-VP3）,构成病 毒颗粒外表免疫调节的结构

2、，此结构在所有基因型 中高度保守。1在接种疫苗或自然感染后，会发生针 对该结构的免疫反响。甲型肝炎是急性病毒性肝炎中最常见的类型，经由 粪-口途径传播，此病并不会转成慢性，病毒也不会 持续存在肝中。2一旦抗HAV IgM抗体检测阳性，即可考虑急性甲型 肝炎病毒感染。感染甲型肝炎一旦发病，HAV IgM抗体即为阳性 （IgM）,通常在34个月后转阴。少数患者体内HAV IgM抗体存在时间略长。极少数患者接受疫苗后体 内可产生IgM抗体。抗HAV IgM抗体的测定可用于 急性肝炎的鉴别诊断，检测甲型肝炎的感染。原理：N-捕获检测原理：总分析时间：18分钟第1步：以抗FdY试剂前处理10 pl已自动

3、稀 释400倍的标本（使用Elecsys通用稀释液），在钉 化物标记的抗HAV单克隆抗体的存在下阻断特异性 抗体I gGo第2步：加入生物素化h-IgM特异性单克隆抗 体、HAV抗原以及以链霉亲和素包被的微粒子，如此 存在于标本中的抗HAV IgM和HAV抗原以及经钉标 记的抗HAV抗体形成了一个夹心复合物。然后就通 过生物素以及链霉亲和素间的反响结合到微粒上。反响混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到 电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压 后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 EI ecsys程序自动将标本反响生成物得到的信号 值与先前由抗HAV IgM定标液获得的cutoff值

4、信 号进行比拟得到测定结果。试剂：.M链霉亲和素包被的微粒（透明盖），1瓶,6. 5 ml : 链霉亲和素包被的微粒，0.72 mg/mI ;含防腐剂 R1钉标记的HAV抗体（灰盖），1瓶，10 ml:钉标记的HAV抗体（鼠）0. 15|iig/ml ;抗人FdY抗体 （羊）0. 04mg/mlHPEPS缓冲液50 mmol/l, pH 7. 2;含防腐剂R2生物素化的抗HAV IgM抗体；HAV抗原（黑盖），1 瓶,10ml;生物素化抗-h-IgM抗体的单克隆抗体（老鼠）0.4 pg/mI ; HAV抗原（细胞培养物），25U/ml （罗氏单 位）；HEPES 缓冲液 50 mmol/l,

5、pH 7.2;含防腐 剂Cal 1阴性定标液（白盖），2瓶，0.67ml/瓶HAV 抗体为阴性的人血清，含防腐剂Cal 2阳性定标液（黑盖），2瓶，0. 67ml /瓶， 含HAV抗体（人类）约5 U/ml （罗氏单位）的人血清, 含防腐剂。警告和考前须知仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注 意事项。所有废弃物必需按照当地法规进行处置。专业人员可要求获得安全数据单。所有人来源材料必须视为有潜在感染性的物质。来源于人血液的所有产品由捐赠者血液单独特殊制 备而成,并经检测HBsAg、HCV抗体、HIV抗体，均 为阴性。所应用的检测方法经F D A认可或符合欧洲法令 98/

6、79/EC附件I I列表A。含有HAV抗体 9212）和皿丫抗原的血清（人类，阳）以3 -prop i o I actone和紫外线杀菌。但由于任何实验方法都不能绝对地排除潜在感染的 危险，故该产品仍需视作病人标本一样仔细处理。 接触者必须遵循健康专业机构相应的法规9弋 假设试剂超过保质期，那么不能再使用。防止试剂和标本（标本、校准液和质控液）产生泡 沫C试剂处理校正液置于与系统相容的瓶内即可立即使用.货号11662988, mL系统缓冲液 货号11662970,mL测量池洗液 货号11930346, mL附加洗液检测步骤Elecsys 2010和cobas e分析仪：在20 25。0定标过

7、程中定标液应放在分析仪上。使用后，应尽快关闭 瓶盖，并将其储存在2 8。确保翻开的瓶盖中未 积存定标液。因为可能会发生蒸发，每瓶定标液定 标次数不宜超过5次。MODULAR ANALYTICS E170 和 cobas e 601 分析仪: 除非定标需要全部量，否那么将即用型定标液装入空 的有盖小瓶，并将提供的标签贴在分装的其余小瓶 上，储存在2 8。1每瓶分装定标液只可用一次。正确操作的有关信息请参见各试剂条形码。储存和稳定性：存放在2-8 C,请垂直摆放试剂盒，以确保使用 前微粒自动混合完全有效。未开封，可稳定至标明的保质期。M, RI , R2试剂开封后，2-8 C, 8周；20 -25

8、 C 在仪器上(Elecsys 2010 cobas e4)，8 周20 -25 C 在仪器上(MODULAR ANALYT ICS E170 和cobas e 601), 8 周Cal 1, Cal 2 开瓶后，2 8。C, 8 周20 -25 C 在仪器上(Elecsys 2010 和 cobas e4), 5小时在仪器上(MODULAR ANALYT I CS E170 cobas e601),只能使用一次。注意：请勿倒置定标液，保证瓶盖未积存定标液。标本采集和准备：只有以下标本可以用来检测：血清：使用标准标本管或含别离胶管采集。血浆：肝素锂、肝素钠、EDTA-K3、枸檬酸钠抗 凝。标准

9、：再现性在血清测量值的90710%之内。标本在28。C可稳定5天，-20 C可稳定3个 月。标本可冻融5次。所示标本种类均和商品化标本采集管一起进行测 定。不同生产商制造的标本采集管含不同材料可能 会影响测定结果。在样品采集管中处理样品过程 中，谨遵标本采集管生产商的操作规程。注意：冻融过的标本、有沉淀的标本、反复测定过 的标本使用前需离心。不要使用加热灭活的标本。 请勿使用叠氮化物稳定的标本或对照。确保患者标本、定标液和质控液在测定前预温至室 温20 -25。C预温。因为可能会发生蒸发，标本和定标液需在2小时内 完成测定。提供的材料：参见“试剂一工作液”章节2x6瓶标签 4个带标签的有盖小瓶

10、需要的材料(未提供)： 货号11876368, Preci Control Ant i -HAV I gM规格 8x 0. 67 ml,各含Prec iContro I Ant i- HAV Ig M 1和 2货号11732277,通用稀释液，2 x 16 mL样本稀释货号03183971,通用稀释液，2 x 36mL样本稀释普通的实验室设备Elecsys 2010 、 MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析仪Elecsys 2010和cobas e 411分析仪所需材料:Elecsys ProCeI 1, 6 x 380Elecsys CleanCelI, 6 x

11、380Elecsys SysWash, 1 x 500货号 11933159, SysClean 适配器 货号 11706802, Elecsys 2010 分析杯，60 x60反响管 货号 11706799, Elecsys 2010 分析吸头，30x 120移液管吸头MODULAR ANALYT I CS E170和cobas e 601 分析仪所 需材料： 货号04880340, ProCe I I M, 2 x 2 L 系统缓冲液货号04880293, CleanCel I M, 2 x 2 L测量池洗液货号03023141, PC/CC杯，12个用于在检测前预热Procell M及C

12、leancell Mo货号03005712, ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗试 剂针。货号12102137,反响杯/吸头 组合装，X84反响杯/吸头组合装48盒，废物袋货号03023150, WasteLiner,废物袋 货号03027651,系统清洁适配器M所有分析仪需要： 货号 11298500, Elecsys SysClean, 5 x 100mL系统清洗液检测方法：为了到达最正确的分析状态，请按仪器操作说明进行 操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微 粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动榆入测试所需的特异性参数，不需手工输

13、入。如果特殊情况下仪器无 法阅读条形码，可以手工输入15位数字。MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 and cobase：将冷藏试剂预温到20 C后放置于仪器的试剂盘上， 防止产生泡沫。系统自动控制试剂温。C和开/关试剂 瓶盖。将Cal 1和Cal 2放在分析仪的标本测试区。只在定标 时翻开瓶盖。条形码自动提供定标所需的数据资料。 定标完成后，将Cal 1和Cal 2放回2 8 C保存或直 接弃去（MODULAR ANALYT I CS E170 and cobas e 601o定标：.溯源性：该方法已经过罗氏参考标准标准化。标本为 随机抽样。定标频率：每

14、批试剂盒必须用新试剂和Cal 1, Cal 2 定标一次（如试剂盒在分析仪上运作不超过24小 时）。另外，以下情况需要再次定标： 一个月（同一批号试剂）7天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；根据规定进行屡次标定。质控使用Elecsys PreciControl HAV抗体，货号 04855043进行质控。当此项检查有持续运作，质控液1和2每24小时至少 应该单独测定一次，每个试剂组以及每次定标后也 都要测定一次。质控区间和限制应该合乎每个实验 室个别的须求。所取得的质控值应位于制定的范围 内。各实验室应制定质控值位于范围外时的修正措 施。假设有需要,请重复测量

15、。注意：请参阅assay/pr eci control试剂盒内附测定 值参考表，并检查是否需要手工输入靶值。计算*仪器会自动根据Cal 1和Cal 2的测定值计算Cut-off 值。每一个标本的结果以有反响性或无反响性以及 结果解释：在Elecsys HAV IgM抗体试验中标本浓度 1.0有 反响性，可认为抗HAV IgM抗体阳性。在Elecsys HAV IgM抗体试验中标本浓度 1.0没 有反响性可认为抗HAV IgM抗体阴性。干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素855|jmol/L或50mg/dL）、 溶血（血红蛋白 1.09 mmo I /L或1.75g/dl）、脂血（脂质2000mg/

16、dl）和生物素 （生物素205nmol/L或50ng/ml ）等干扰。标准：合理分配阳性和阴性标本。接受高剂量生物素（5mg/天）治疗的病人，至少要等 最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（3200IU/ml） o 高剂量钩状效应可能会导致检测结果的假阴性。 18种常用药物经试验对本测定无干扰。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人可能会出现假阳性 反响。在罕见病例中由于存在高滴度的抗链酶亲和素抗体和 钉抗体可能会对结果有所干扰。检测中的添加剂可最大程度地减少影响。HAV抗体测定结果应结合病人病史、临床其他检查结 果综合起来进行诊断。如结果判定有困难，特别当测 定值在cut of f

17、值附近时，应考虑受测者曾注射甲肝疫 苗。稀释标本中HAV IgM抗体浓度超过测量范围可以Elecsys 甲肝稀释液进行稀释。期望值*制定cutoff值，即为使急性甲型肝炎的抗HAV IgM 浓。C高于cutoff值。在曾感染甲型肝炎的病例， 抗HAV IgM的浓度低于cutoff值1.0。在大多数急性 甲型肝炎感染过程中，在病症初次发生的3-4个月 内抗HAV IgM的浓度会逐渐下降，然后无法再检测 到。抗HAV IgM抗体只有例外的情况下才会持续存 在，在过了这段期间仍然可以测得。特异性参数：以下所列举为Elecsys分析仪具代表性资料。各实验室 所测结果可能有所差异。精密度：利用Elecs

18、ys试剂，重复检测人类混合血清和质控液 （批内n = 21,批间n = 10）,按照修正NCCLS（NationaI Committee for ClinicaI LaboratoryStandards）公布的实验方法（EP5-A）执行：每天测 试6次，进行10天（60）,在E170上测试一次运转内 的精确。C,重复21次，得到以下结果：Elecsys 2010 and cobas e 411 分析仪批内精密。C加匕间精密。C样品均值 corSDC0ICV%均值C0ISDC0ICV%HSd, 阴性0. 280.0062.00.210. 0083.8HS, cutoff 附近1. 100.037

19、3.41.050.0292.8HS,阳11.70. 3613. 111.80. 6435.4性抗HAV IgM质 控品10.250. 0052.00. 220.0062.8抗HAV IgM质 控品22. 300. 1064.62.210.0592.7c) cutoff值d) HS二人血清分析特异性：MODULAR ANALYTICS E170和 cobas e 601 分析仪批内精密。C批间精密。C样品均值C0ISDC0ICV%均值C0ISDC0ICV%血清10.310.0041.30. 310. 0082.5血清20.960.0202. 10.970. 0495.0血清 32.540. 05

20、92.32. 550. 1415.5抗HAV IgM质 控品10.280.0062.00. 290. 0082.6抗HAV IgM质 控品21.700.0714. 21.940. 1547.9未检测到与抗HAV IgG抗体，HBV, HCV, CMV, EBV;HSV,弓形虫，风疹病毒和梅毒螺旋体的交叉反 应。以上各抗原均至少使用9份针对该抗原的抗体阳性 或含自身抗体（ANA,SLE）血清或血浆样品检测。临床灵敏度：使用Elecsys HAV抗体和相应检测方法，检测97个 来自于目前存在（HAV IgM抗体阳性）或过去曾罹患 甲型肝病人的标本的HAV抗体（浓度 20IU/ml）, o使用EI

21、ecsys HAV抗体以及商品化对照试验，检测 165个来自46位接受甲肝疫苗受试者的标本。所有标本的H A V抗体浓度都在各自的最低检测限值 之上。临床特异性：HAV感染急性期病人口勺标本：211个来自于急性HAV感染具有临床病症患者的标本 中，211个经Elecsys抗HAV IgM检测和对照试验可 测得抗HAV IgM抗体。敏感度的95%置信区间为 98.3-100%o来自于急性HAV感染后监控病情病人的标本：来自于45个急性HAV感染后监控病情病人的147个标 本，利用Elecsys抗HAV IgM检测和对照试验全部进 行抗HAV IgM的检测。122个标本呈持续阳性，14个 标本为持

22、续阴性。剩下的11个结果有矛盾的标本中 有10个是取自恢复期（距离第一个病症出现的时间 长于4个月）。这10个标本中的9个以Elecsys抗HAV I gM检测测为阴性而以对照试验测得阳性或呈现边 缘值；1个以Elecsys抗HAV IgM检测测得为弱阳性， 以对照试验检测得到边缘值。有1个以Elecsys抗 HAV I gM检测检测为阳性，以对照试验检测呈现阴性 的标本来自于HAV血清转换初期，用第三种抗HAV IgM检测方法确定为阳性。临床特异性：利用来自于随机献血员的标本进行特异性的测定。 全部1032个标本以Elecsys抗HAV IgM检测均为 阴性。280个来自于没有任何感染HAV

23、迹象住院病人、孕 妇、透析病人以及吸毒者的标本，以Elecsys抗 HAV IgM检测和对照试验检测均呈阴性；1例孕妇标 本用两种方法都呈现弱阳性。二项研究的特异性都 是100%, 95%的置信区间为99. 7- 100%o参考文献：1. Robertson BH, Nai nan 0V. Genetic and antigenetic var iants of hepatitis Av i rus. In: Viral Hepatiti s and Liver Disease. Eds: R i zzeto M, Puree I I RH,Ger in JL, Verme G, Edizio

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