2022年免疫组化评分-前列腺癌免疫组化评分标准.docx

《2022年免疫组化评分-前列腺癌免疫组化评分标准.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2022年免疫组化评分-前列腺癌免疫组化评分标准.docx（2页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、免疫组化试剂1 10XPBS 80g Nacl, 2g Kcl, 14.4g Na2HPO4, 2.4g KH2Po4,力口水 至IL,调pH至7.42 漂洗液 lXPBS+0.1%Tween-20（2ml 50%Tween-20）3lOmM柠檬酸钠溶液：2.94g柠檬酸三钠钠二水合物6出3。7.2或0）加于1L水中，调pH至6.043%H2O2,用30%出。2稀释（4避光保存） 5 封闭液-10%山羊(goat)血清 血清溶于PBST,稀释10倍。步骤：1 .脱蜡/脱二甲苯(提示：在此过程中任何时候都不能干片)1.1 二甲苯 15min1.2 二甲苯 25min1.3 二甲苯 35min1.

2、4 第一次无水乙醇5min1.5 第二次无水乙醉5min1.6 95% 乙醇 5min1.7 自来水洗2次，5min/次.3%H2O 浸泡 lOmin置于PBST洗片5min.抗原修复10mM柠檬酸钠95 15min,在室温放凉，PBST洗片5imn.2 .封闭4.1100-400ul 10%goat 血清室温封闭 lh2.1 PBST洗片,滴加100-4003一抗（用封闭液稀释）一抗浓度1:400/1:1000, 室温孵育lh或4c过夜2.2 回收一抗，PBST洗片3次,5min/次2.3 滴加100-4003二抗（用10%goat血清稀释1:200稀释）,室温30min2.4 除去二抗，用

3、PBST洗片3次，5min/次2.5 滴加三抗,2滴/片，室温30min （三抗:5ml PBST, 2滴Reagent A, 2滴 Reagent B）2.6 除去三抗，用PBST洗片3次，5min/次2.7 滴加 100-400DAB 于片上（DAB:2.5ml 0.1%Tween 水，1 滴或 50ul Buffer, 1 滴或50ul过氧化物试剂，2滴或1003 DAB,每加一次需混匀）2.8 立即镜检，约染lmin2.9 浸泡于PBST中.苏木精复染2.10 苏木精染色lmin2.11 自来水冲洗2次2.12 脱水（注意:不要让二甲苯挥发干）2.13 脱乙醇.树脂封片（黄枪头剪粗开口）3 .过夜晾干