皮肤性病科麻风杆菌及麻风检查技术操作规范.docx

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1、皮肤性病科麻风杆菌及麻风检查技术操作规范一、皮肤切刮涂片检查二、组胺试验三、出汗试验四、立毛肌试验一、皮肤切刮涂片检查【适应证】麻风病【禁忌证】无特殊禁忌。【操作方法及程序】1.皮肤取材法取材部位皮肤经碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，左手捏紧皮肤，使之缺血， 右手持消毒的11号手术刀切长约5 mm,深263mm切口。以刀尖来回3-4次刮取切口边缘和底部组织液，在刀尖上见到少量组织液 时，立即涂抹在干净载玻片上成直径5s7mm圆形涂膜。面部切口创面仅用消毒棉球止血5min,肢体部位可加胶布固定或用创可 贴止血。皮肤取材部位一般取46处，常规部位为左右眶上、左右耳垂加两处 皮损，皮损应取病情最活动处

2、。取材完毕后，涂片在火焰上烘干固定，送实验室染色镜检。2.染色方法染色时可用加温法或不加温法，加温法用时较短。加温法将已固定的载玻片放在染色架上，滴加苯酚复红染液覆盖整个涂膜，用酒 精灯在载玻片背面加温15min,以染液勿沸腾为度，载玻片上染液干涸时要随时 添加染液。倾去苯酚复红染液，用自来水从载玻片的一端轻轻冲洗（勿直接冲洗涂膜）, 再加1%盐酸乙醇作用15s30s,轻轻晃动载玻片使之脱色。如涂膜较厚，脱色 时间可稍延长，待涂膜呈淡红色为度。在玻片上加0. 3%亚甲蓝(美蓝)染液30-60s,用自来水从载玻片的一 端轻轻冲洗。待载玻片干后镜检。亚甲蓝复染的时间应视涂膜的厚薄而定。涂膜 厚时染

3、色时间应短，防止背景过深，镜检时视野透光不良，难以检出红染的抗酸 杆菌而影响镜检结果。应使涂膜的背景为浅蓝色为宜。(2)不加温法在室温条件下，在第一步染色中，滴加苯酚复红染液30min,无须加温, 余染色步骤与加温法同。不加温法染色，染色条件和结果都比较稳定，值得提倡。理想的染片，应该是背景浅蓝色，在一个油镜视野内有数个炎症细胞，提示 组织液取材符合真皮深度，抗酸杆菌呈现鲜红色。3.细菌密度标准计算Ridley推荐的一种10倍分级法，可大体反映皮损内 细菌密度，在现场防治和科研中被广泛应用。阴性:检查100个以上油镜视野未 查到菌。1十：平均100个视野查到条菌。2十：平均10个视野查到10条

4、菌。3十：平均每个视野查到条菌。4十：平均每个视野查到10-100条菌。5十：平均每个视野查到100-1000条菌。6十：平均每个视野查到1000条以上菌。4.细菌密度指数(BI)的计算Bl=各涂膜细菌密度(+ )数的总和/涂膜数【注意事项】1 .取材部位要选取活动性皮损，如结节、斑块、红斑、弥漫性浸润等。2 .取材的深度一定要够，一般为2s3mm,要捏紧皮损，防止出血，刀尖要 确认刮到组织液后再涂片。因取材深度不够而取组织液太少，不能形成符合规定 的涂膜是产生杳菌假阴性的主要原因。3 .组织液取材勿含血液，否则会影响镜检结果，也是出现查菌假阴性的主要 原因。4 .抗酸染液一定要新鲜配制，一般

5、勿超过1年。麻风诊断中已经有因染液过 期出现查菌假阴性而漏诊的情况。5 .染色要按规定操作方法进行，要根据涂膜的厚薄调整染色的时间。涂膜太 厚，亚甲蓝染色时间太长是涂片蓝色背景太深而出现假阴性结果的常见原因。6 .完整菌指菌体完整、染色均匀的正常形、超过1/2的短杆形及延仲形细菌。 非完整菌为菌体断裂、染色不均匀的颗粒形、小于1/2的断裂形、双球形、念珠 形等。7 .细菌形态对判断麻风早期疗效和复发很有用，在疑似复发的患者的涂片 中见到较多的完整菌，则基本可确定麻风复发。经过有效治疗的患者，麻风菌均 呈现颗粒状，无完整菌存在。二、组胺试验【适应证】麻风病。【禁忌证】对所试药物高度过敏者。【操作

6、方法及程序】1 .用碘酒、75%乙醇或碘伏消毒后，在正常和麻风皮损处分别皮内注射1 : 1 000的磷酸组胺溶液各0. lmlo2 .约30s后，于正常皮肤注射处周围出现第一个红斑，直径约10mm；再过 30s,在上述红斑周围出现第二个红斑，直径30s40mm,边缘弥漫；最后在红 斑中央出现风团a此为完整的三联反应。表明受试皮肤的神经功能正常。3 .三联反应的原理是最初出现的红斑是皮肤毛细血管受组胺刺激而扩张所 致，最后出现的风团是继毛细血管扩张后，血浆渗出引起的局部水肿。重要的是 第二个红斑，是小动脉扩张所致。由于小动脉扩张的前提是支配其血管的末梢神 经要正常，并能通过轴突反射而传导冲动才能

7、完成，因此特别有意义。在神经切 断，或用普鲁卡因封闭神经后，就不会有第二个红斑。麻风患者由于皮损处末梢 神经受到破坏，所支配的小动脉不能扩张，也不出现第二个红斑，称三联反应不 完整。【注意事项】1 .在炎性红斑处不宜做此试验，以免判断失误。2 .组胺三联反应的不完整，不是麻风病所特有的，许多周围神经病变都町出 现。3 .皮损处的改变要与正常皮肤处对照观察。三、出汗试验【适应证】麻风病。【禁忌证】对所试药物高度过敏者。【操作方法及程序】L淀粉法在正常皮肤和皮损处用碘酒和75%乙醇消毒后，再各涂碘酒，待干后，分 别皮内注射1:1000的毛果芸香碱溶液各0.1mL擦干针尖处渗液，立即撒上薄 层干燥淀

8、粉。(2)35min后，正常皮肤部位淀粉处出现蓝色小点或小片，表示出汗正常。如果皮损处汗腺破坏或泌汗神经破坏，泌汗功能障碍，则碘无法与淀粉 发生作用，不出现蓝点或蓝色小片。2.试纸法(1)皮内注射毛果芸香碱后，用棉球擦去针眼处渗液，2mm后，将漠酚蓝纸 按在针眼处，轻轻加压，15s后将纸取下，如有出汗则在滨酚蓝纸上显示针尖或 稍大的蓝色小点。(2)此法的试验结果比较精确(3)漠酚蓝纸的制备。取漠酚蓝0.1g溶于9 5%乙醇溶液10 ml内配成 1 %漠酚蓝溶液；用滴管将1 %漠酚蓝溶液滴在滤纸上，待自然干燥后成黄 色的滤纸，剪成lcmXlcm大小备用。【注意事项】官在对侧相应或邻近的正常皮肤处作对照，皮损处的变化要与正常皮肤处仔 细观察对比。四、立毛肌试验【适应证】麻风病。【禁忌证】对所试药物高度过敏者。【操作方法及程序】1 .在正常和皮损处先以碘酒和75%乙醇消毒后，分别于皮内注射1 : 10万的 苦味酸烟碱溶液0. lmlo2 .正常皮肤的末梢神经未受损害，立毛肌会收缩，引起鸡皮现象。3 .麻风皮损因神经末梢受到破坏而无此现象。【注意事项】1 .立毛肌试验时没有鸡皮现象不是麻风皮损所特有的，也见于所有末梢神经 功能在受到阻断或损伤的情况下。2 .宜在对侧相应或邻近的正常皮肤处作对照，皮损处的变化要与正常皮肤处 仔细观察对比。