胶体金检测技术优秀PPT.ppt

《胶体金检测技术优秀PPT.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《胶体金检测技术优秀PPT.ppt（26页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、免疫胶体金快速检测技术免疫胶体金快速检测技术农业部部饲料料质量量监督督检验测试中心（西安）中心（西安）培训资料培训资料 主要内容主要内容 一、免疫胶体金技术的发展历史一、免疫胶体金技术的发展历史 二、胶体金检测卡的基本原理及构造二、胶体金检测卡的基本原理及构造 三、免疫胶体金层析法检测原理及应用三、免疫胶体金层析法检测原理及应用 四、四、-激烈剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍激烈剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍 五、常见问题分析与留意事项五、常见问题分析与留意事项 六、免疫胶体金技术的发展的方向六、免疫胶体金技术的发展的方向 培训资料培训资料一、免疫胶体金技术的发展史一、免疫胶体金技术的发展史1.

2、1939年（英，植物）年（英，植物）Kausche和和Ruska把烟草把烟草叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下视察呈叶病毒吸附在金颗粒上，在电子显微镜下视察呈现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技现高电子密度的细状颗粒，开启了免疫胶体金技术的探讨。术的探讨。2.1971年（美，微生物）年（美，微生物）Faulk和和Taylor首先将兔首先将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。沙门菌的表面抗原。3.1974年（奥）年（奥）Romano等将胶体金标记在马抗等将胶体金标记在马抗人人IgG上，实现了间接免疫金染色法。同年上，实现

3、了间接免疫金染色法。同年Bauer等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。培训资料培训资料4.19784.1978年年GeogheganGeoghegan等应用免疫金技术检测等应用免疫金技术检测B B淋巴淋巴细胞表面抗原。细胞表面抗原。5.19815.1981年年DanscherDanscher建立了银显影液增加光镜下金颗建立了银显影液增加光镜下金颗粒的免疫金银染色方法粒的免疫金银染色方法 （Immunogold-silver staining,IGSSImmunogold-silver staining,IGSS）。）。6.19866.1986年年FritzF

4、ritz（美，生物）等人在（美，生物）等人在IGSSIGSS法基础上成法基础上成功地进行了彩色功地进行了彩色IGSSIGSS的染色法的染色法,使得检测结果更加明使得检测结果更加明丽夺目丽夺目这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！这是免疫金检测技术诞生的一次历程碑！培训资料培训资料二、二、胶体金的概念、原理及结构胶体金的概念、原理及结构 1.1.胶体金概念及来源：胶体金概念及来源：胶体金又称金溶胶，是由金胶体金又称金溶胶，是由金盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。盐还原成金后形成的金颗粒悬浊液。2.2.胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围胶体金颗粒结构：由一个基础金核即金原子与包围在外的离子层

5、构成，离子层为氯金酸负离子在外的离子层构成，离子层为氯金酸负离子（AuClAuCl2 2-)，外层为外层为H H+，分散在溶液中。呈球形，分散在溶液中。呈球形(小颗粒小颗粒)或椭圆形或椭圆形(大颗粒大颗粒)。培训资料培训资料图图1 金颗粒示意图金颗粒示意图 在在溶溶液液中中金金颗颗粒粒呈呈圆圆形形,表表面面带带有有负负电电荷荷,由由于于静静电电的的排排斥斥力力,使使其其在在水水中中保保稳稳定定状状态态，形形成成稳稳定定的胶体状态。的胶体状态。培训资料培训资料 3.胶体金试纸条的构造胶体金试纸条的构造样品垫样品垫PVC底板底板层析方向层析方向胶体金垫胶体金垫测试线测试线（T线）线）限制线（限制线

6、（C线）线）NC膜（硝酸纤维素膜）膜（硝酸纤维素膜）吸水滤纸吸水滤纸培训资料培训资料 4.4.免疫层析法检测原理（双抗体夹心免疫层析法检测原理（双抗体夹心)4.1 4.1（以（以HCGHCG检测为例）检测为例）培训资料培训资料4.2 4.2 免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）（以吗啡检测为例）（以吗啡检测为例）培训资料培训资料4.3 4.3 免疫层析法检测的原理（应用免疫层析法检测的原理（应用proteinAproteinA金标）金标）（以（以HIVHIV检测为例）检测为例）阴性阴性阳性阳性培训资料培训资料 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层

7、析法的应用克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析法的应用 接受竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成确定直径的金溶胶颗粒，标记接受竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成确定直径的金溶胶颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦特罗在流淌的过程中与为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦特罗在流淌的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NCNC）膜检）膜检测线上盐酸克伦特罗测线上盐酸克伦特罗BSABSA偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相像）的结偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相像）的结合

8、，使检测线不显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。合，使检测线不显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于猪、牛尿液规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml3ng/ml。培训资料培训资料 -结果判定依据结果判定依据 阴性比照出现红色条带，阳性比照不出现红色条带，说明检测卡有效。如阴性比照不出现红色条带，或阳性比照出现红色条带，出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。待检尿样检测区出现红色条带为阴性 待检

9、尿样检测区不出现红色条带为阳性阳性结果样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸克伦特罗。培训资料培训资料 四、四、-激烈剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍激烈剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例一适用范围：一适用范围：主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只须要尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只须要510510分钟左右，灵敏度为分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)3 ng/ml(3ppb)。也就是说当。也就是说当尿液中

10、盐酸克伦特罗的残留大于或等于尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml3 ng/ml时，检测时，检测卡才能检测到。卡才能检测到。培训资料培训资料二二 、包装、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡，每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡，滴管滴管1 1个、干燥剂个、干燥剂1 1片。片。三、现场筛查步骤三、现场筛查步骤1 1在进行测试前先完整阅读运用说明书，运用前将检测卡在进行测试前先完整阅读运用说明书，运用前将检测卡和待检样本溶液复原至室温。和待检样本溶液复原至室温。2 2从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时

11、内就地运用。运用。培训资料培训资料3 3将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂直滴加直滴加3 3滴（约滴（约80ul80ul）于加样孔中，加样后起先计时。）于加样孔中，加样后起先计时。培训资料培训资料4 4结果应在结果应在510510分钟读取，其他时间判读无效，依据示意分钟读取，其他时间判读无效，依据示意图判定结果。图判定结果。培训资料培训资料A A、阴性（、阴性（-）：）：C C、T T线均出现。表示样品中不含有克伦线均出现。表示样品中不含有克伦特罗或其深度低于检测限。特罗或其深度低于检测限。培训资料培训资料B B、阳性（、阳性（+）

12、：检测）：检测T T线不出现，则表示样品中克伦特罗浓线不出现，则表示样品中克伦特罗浓度高于检测限。度高于检测限。培训资料培训资料C C、无效：未出现质控、无效：未出现质控C C线，表明操作过程不正确或检测卡已线，表明操作过程不正确或检测卡已失效，重新运用新卡。失效，重新运用新卡。培训资料培训资料 经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似样品，必需经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似样品，必需进行确证后，才能精确推断，不能提前作结论。进行确证后，才能精确推断，不能提前作结论。因此，对于出现阳性结果的样品，应按官方抽样程序分瓶封装样品，因此，对于出现阳性结果的样品，应按官方

13、抽样程序分瓶封装样品，并于并于0-40-4保存，尽快送到我中心进行确证检测。保存，尽快送到我中心进行确证检测。培训资料培训资料 五、常见问题及留意事项五、常见问题及留意事项 1.1.运用前将检测卡和待检样本复原至室温运用前将检测卡和待检样本复原至室温 2.2.保持干燥，避开受潮，打开包装请尽快运用保持干燥，避开受潮，打开包装请尽快运用 试纸条中的试纸条中的NCNC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而

14、失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必需保持干燥，从包装袋中取出后要尽快运用。此，试纸条必需保持干燥，从包装袋中取出后要尽快运用。3.3.检测时，避开阳光直射和电风扇、空调的风直吹检测时，避开阳光直射和电风扇、空调的风直吹 尿样一起先在尿样一起先在NCNC膜上泳动时，是利用毛细管作用，假如风吹太阳晒，膜上泳动时，是利用毛细管作用，假如风吹太阳晒，NCNC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避开阳光直射和电风扇、膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避开阳光直射和电风扇、空调的风直吹。空调的风直吹。培训资料

15、培训资料4.4.尽量不要触摸检测卡中心的白色膜面尽量不要触摸检测卡中心的白色膜面 这主要是人手掌的汗这主要是人手掌的汗液中有钾、钠离子存在，影响液中有钾、钠离子存在，影响NCNC膜上泳动时的毛细管作用。膜上泳动时的毛细管作用。5.5.尿样滴管不行混用，以免交叉污染尿样滴管不行混用，以免交叉污染 每一类检测卡的抗体每一类检测卡的抗体都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相像的样品组都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相像的样品组成会产生干扰。成会产生干扰。6.6.加样量为加样量为70-80l70-80l左右（垂直加三滴）左右（垂直加三滴）假如加样量太大或太小，将会影响试验结果。如样品特别假

16、如加样量太大或太小，将会影响试验结果。如样品特别粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴粘稠，有可能导致样品爬不上去，此时可适当多滴1212滴。滴。7.7.以以T T线的条带为观测点线的条带为观测点,C,C线为质量控质线线为质量控质线 由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测由于动物个体的差异使尿样样本中的成分组成不同，检测时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就时，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要条带出现，就可判定为阴性结果。可判定为阴性结果。培训资料培训资料 8.8.假如尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再检测；假如尿样出现沉淀或浑浊物，请离心后或静置后再

17、检测；9.9.试纸条应常温保存，防止温度过高或过低试纸条应常温保存，防止温度过高或过低 放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱最好，温度限制在放在冰箱中要防止温度过低，检测卡受潮，一般风泠冰箱最好，温度限制在88左右较为志向。避开在燥热高湿的环境中保存。左右较为志向。避开在燥热高湿的环境中保存。10.10.阳性疑似样品应在阳性疑似样品应在0 0-4-4冷冻保存冷冻保存 冷藏和常温条件下，尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下降，表出现最为突出的是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此冷藏和常温条件下，尿中的瘦肉精在尿酸和酶的作用下易发生降解，含量会大幅下降，表出现最为突出的

18、是盐酸克伦特罗和莱克多巴胺，因此需确证的尿样必需冷冻保存。需确证的尿样必需冷冻保存。11.11.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性比照自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性比照 自来水、蒸馏水或去离子水离子浓度较低，会影响抗原和抗体的反应，不能作为阴性比照。自来水、蒸馏水或去离子水离子浓度较低，会影响抗原和抗体的反应，不能作为阴性比照。培训资料培训资料六、发展方向六、发展方向(D(Developing)eveloping)1.1.标记技术的探究标记技术的探究顺磁粒子标记、量子点标记顺磁粒子标记、量子点标记 免疫反应信号转化为电子信号模式免疫反应信号转化为电子信号模式培训资料培训资料2.2.生物传感器生物传感器感谢！