病原微生物评估报告.docx

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1、病原微生物评估报告病原微生物风险评估报告模板1、 生物风险评估依据1） 病原微生物试验室生物安全治理条例2） 试验室生物安全通用要求3） 人间传染的病原微生物名录4） WHO 试验室生物安全手册2、生物风险评估要素1） 病原微生物特征；2） 病原微生物相关试验活动；3） 试验活动人员；4） 试验活动的设施、设备和环境；5） 风险认定和评估结论。3 生物风险评估实施3.1 病原微生物特征的评估 1一般生物学特性：病原微生物起源、基因组及编码、产物形态特征、培育特性、细菌或病毒属别和型 别内容或技术鉴定。 2致病性：临床病症、埋伏期、病程、感染剂量、入侵部位、宿主类型、否产生毒素等。 3感染途径：

2、呼吸道、消化道、血液、媒介、皮肤感染等。 4环境中的稳定性：是指其抵抗外界环境的存活能力，不同的微生物的稳定性不同，对病原微生物的稳 定性评估除考虑其在自然界中的稳定性外，还应考虑其对物理因素与化学消毒剂的敏感性。 5致病性和感染剂量：不同病原的致病性不同，即使同类病原不同菌毒株也有不同强度的致病力； 另微生物的致病性与被感染者的免疫状态、易感性有关；暴露后果取决于病原微生物的致病性和机体的抵抗力；不同属、种、亚种、型的病原微生物，甚至不 同株的病原微生物，其致病性各异； 还取决于所感染病原微生物的剂量，当大量病原微生物侵袭人体 时，埋伏期一般较短，而病情则较为严峻；不同个体 被传染后，可产生

3、各种不同的结局。 6传播途径：传播方式包括呼吸道传播、通过水和食物等消化道传播、接触传播、血液传播、母婴垂直 传播、媒介传播等；传播结果包括一种病原可有多种 传播途径和多种病原可以引起一样的病症。 7试验动物争论、试验室感染。8有效的预防和治疗措施：有效的药物、有效疫苗、疾病监测手段、有效的预防掌握措施手段。3.2 病原微生物试验活动的评估1） 试验活动：是指试验室从事与人病原微生物的菌毒种、样本有关的争论、教学培训、检测等活动。2） 试验活动的类型包括：标本或样品处理、离心、匀浆、超声、移液操作、锐器的使用、生物安全柜使 用、医疗废物消毒或高压灭菌处理等。 3试验活动风险影响因素：3a.气溶

4、胶产生：离心、旋转、匀浆、接种环等。b.潜在损害：注射器等锐器、酒精灯、玻璃器皿等。 c.标本的浓缩：来自临床、现场、培育、浓缩等。 d.毒株和细胞：野毒、减毒、疫苗株、毒素产生等。 e.操作指导书。4) 病原微生物动物试验风险因素a.标准的试验室废弃物处理程序。b.化学消毒剂选择、配置和使用。 c.物理消毒设备的使用和维护。d.各种试验材料、器具，尤其是锐器处理。 e.动物试验动物及其排泄物处理。5) 废弃物处理风险影响因素:a.标准的试验室废弃物处理程序。b.化学消毒剂选择、配置和使用。c.物理消毒设备的使用和维护。d.各种试验材料、器具，尤其是锐器处理。 e.动物试验动物及其排泄物处理。

5、3.3 试验活动人员要求评估 1安康状况和安康历史、耐药和过敏。2人员资质和心里素养。3） 生物安全学问。4） 微生物学专业学问。5） 操作设施设备技能。6） 免疫状况。7） 培训状况。8） 应急大事处理力量。3.4 设施、环境和设备因素要求评估 1生物安全试验室相应等级的设施。2试验室生物安全的设备。 3试验室检测相关设备。 4应急设施。 5设施设备治理、维护、校准和检验。3.5 风险评估结论降低风险的措施：1） 病原微生物风险分类2） 试验活动与相应的设施设备要求3） 个人防护装备要求4） 人员生物安全和专业技术资质要求5） 人员安康和素养要求6） 预防和治疗措施要求7） 菌毒种和试验活动

6、等风险治理要求8） 应急预案和措施要求4、生物安全委员会负责审核病原微生物风险评估报告的适宜性与科学性，并做出评估结论。生物因子生物危害评估报告模板*菌危害评估报告一、危害程度分类(一)分类等级(二)不同试验操作生物安全试验室级别要求二、背景资料(一)一般生物学特性1. 形态染色2. 培育特性(二)在外界环境的稳定性 1在自然环境中的稳定性与对温度的敏感性2. 对日光与紫外线的敏感性3. 对化学因子的敏感性 (三)致病性和感染数量(四)传播途径及暴露的后果1. 传播途径2. 暴露后后果(五)*菌的宿主范围(六)*菌的预防、诊断和治疗1预防2. 诊断3. 治疗三、试验室试验活动及其危急性与预防措

7、施(一)试验室试验活动背景资料1. 试验活动内容2. 试验涉及的*菌菌毒种背景资料3. 试验室*菌感染动物与培育物最高存量 (二)可能造成不良后果的因素与预防措施1试验样品的接收与开启拟实行防护措施： 2试验样品涂片拟实行防护措施： 3*菌接种培育拟实行防护措施：4. *菌培育物与动物器官细菌再分别样品制备拟实行防护措施：5. 试验样品的研磨6. *菌的攻击 拟实行防护措施： 7感染动物的饲养8. 感染动物的解剖9. 动物血清标本与未经灭活组织标本采集10. 病理观看用组织标本的采集11. 试验仪器设备12 试验动物的病原微生物埋伏感染13. 培育物与试验废弃物销毁14. 室内空气、试验用品以

8、及操作台面污染15. 菌种以及培育物保藏(三)试验室试验活动危害评估四、工作人员素养五、评估结论附表*菌试验室试验活动风险评估*试验室工作人员个人素养评价表金黄色葡萄球菌的生物危害评估报告一、金黄色葡萄球菌的传播与致病金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，在空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可 找到。因而，食品受其污染的时机很多。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题， 在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的 33%，加拿大则更多，占 45%，我国每年发生的此类中毒大事也格外多。金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种 类多，如奶、肉、

9、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒 大事也有报道；上呼吸道感染患者鼻腔带菌率 83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人 员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了 肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎 或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。而肠毒素形成条件包括：存放温度，在 37内，温度越高，产毒时间越短；存放地点， 通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含肯定量淀粉的食物，肠毒素易生成。

10、金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起 肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。葡萄球菌性菌血症可发生于任何与血管内导管或其他异物有关的局限性葡萄球菌脓肿 或感染,它是严峻烧伤病人死亡的常见缘由。持续性发热常见,而且可伴有休克。葡萄球菌性心内膜炎特别好发于静脉注射给药者和装有人工心脏瓣膜的病人。突然出 现心脏杂音,脓毒性栓子和其他经典体征便可作出可疑诊断,确诊需依据超声心动图和血培育。葡萄球菌性骨髓炎主要见于儿童,可引起寒战,发热和受累骨苦痛,继之消灭红肿。关节 四周感染常引起关节积液,提示为化脓性关节炎而不是骨髓炎。白细胞计数常15000

11、/l 并且血培育常阳性。X 线变化在 1014 日内不明显,骨质疏松和骨皮质反响甚至更长时间仍不能测出,而放射性核素骨扫描则常能较早消灭特别。现在葡萄球菌性小肠结肠炎很罕见,但假设住院病人消灭发热,肠梗阻,腹痛和腹胀,低血 压或腹泻,特别是近作过腹部手术或承受过抗生素者,可提示本病。假设粪便镜检觉察大 片的嗜中性白细胞和革兰氏阳性球菌,则可能作出诊断,但必需排解产毒性困难梭状芽胞 杆菌感染,这是抗生素相关性结肠炎最常见的缘由。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：a.溶血毒素：外毒素，分 、 四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏

12、人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体外表或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬 作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素： 金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为 A、B、C、D、E 及 F 五种血清型。肠毒素可耐受 100C 煮沸 30 分钟而不被破坏。它引起的食物中毒病症是呕吐和腹泻。此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、 肽酶等。二、金黄色葡萄球菌的生物学特性典型的金黄色

13、葡萄球菌为球型，直径 0.8m 左右，显微镜下呈单个、成双以及排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌属于葡萄球菌属，无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染 色阳性年轻、死亡和被白细胞吞噬后的菌体革兰染色呈阴性。金黄色葡萄球菌养分要求 不高，在一般培育基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度 3537、最适生长 pH7.47.6。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在 10-15%NaCl 肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反响阳性，VP 反响弱阳性。很多菌株可分解精氨酸，水解尿素，复原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等

14、高度敏感。三、金黄色葡萄球菌的检测与诊断1. 标本采集 采自不同感染部位的各种标本，包括血液、脑脊液、穿刺液；痰液、脓液、创伤分泌物、尿液、粪便和呕吐物等。2. 直接涂片镜检 直接涂片检查在正常状况下呈无菌状态的体液标本如血液、脑脊液、穿刺液等，假设有检出革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列、无芽胞、荚膜，直径0.5-1m 的球菌。即具有重要的临床价值。3. 分别培育 可以选用一般养分琼脂平板、血平板和高盐甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉汤增菌培育基。该菌在一般肉汤中呈均匀快速混浊生长；假设接种于琼脂平板上 35培育，每隔半小时观看一次，连续观看 6 小时，消灭凝固，马上小试管倾斜或倒置时，内容物不流

15、淌，判为阳性。（2） 耐热核酸酶试验：将 24 小时肉汤培育物沸水浴处理 15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA 平板，35培育 24 小时，在刺种线四周消灭淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。（3） 甘露醇发酵试验 金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇。（4） Staphaurex 胶乳凝集试验 是鉴定金黄色葡萄球菌的一种快速、简便的商品化直接凝集试验。其根本原理是在纸片上滴加包被有纤维蛋白原和 IgG 抗体的聚苯乙烯胶乳， 然后用接种环挑取待鉴定菌株的颖培育物参加混匀，假设消灭凝集块现象即为阳性。5. 生化鉴定 如上述，留意与其他凝固酶阳性的葡萄球菌的鉴别要点：PYR吡咯烷酮- 萘基

16、酰胺试验阴性；VP 试验阳性；鸟氨酸脱羧酶试验阴性。6. 免疫学方法 用酶联免疫吸附试验和对流免疫电泳方法可检测金葡菌的磷壁酸抗体。7. 分子生物学方法 包括 PFGE 脉冲场凝胶电泳以及酶切图谱分析等。四、金黄色葡萄球菌的防治及生物安全防护一、细菌的防治金黄色葡萄球菌的掌握主要包括：1） 防止金黄色葡萄球菌污染食品，防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进展安康检查，患局部化脓性感染如疥疮、手指化脓等、上呼吸道感染如鼻 窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等的人员要临时停顿其工作或调换岗位。防止金黄色葡 萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺 炎的牛奶；

17、奶挤出后，要快速冷至-10以下，以防毒素生成、细菌生殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，留意低温保存。对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除 去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进展加工生产。2） 防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成 应在低温顺通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过 6 小时，并且食用前要彻底加热。3） 无菌措施(如检查病人前后彻底洗手和消毒合用的器械)至关重要。已被感染的病人应与其他易感病人隔离,患有活动性葡萄球菌感染,即使是局部性的感染(如疖)的医护人员,在其感染治愈前不得接触病人或器械。无病症的鼻腔带菌者,除非所带菌

18、株格外危急或被疑心为爆发流行的传染源,一般不必隔离。治疗包括脓肿引流,抗生素(重症病人需肠外给药)和全身支持疗法。培育标本应在开头治 疗前或更换抗生素之前猎取。抗生素的选择和剂量取决于感染的部位,疾病的严峻程度和 细菌对药物的敏感性。医院获得的葡萄球菌和大多数社区获得的菌株,通常对青霉素 G,氨苄青霉素和抗假单胞菌青霉素有耐药性。大多数菌株对耐青霉素酶青霉素(甲氧苯青霉素,苯甲异噁唑青霉素, 乙氧萘青霉素,邻氯青霉素,双氯青霉素),头孢菌素(头孢菌素,头孢唑啉,头孢菌素,头孢拉定,头孢羟唑,头孢西丁和第三代头孢菌素),卡巴培南类(亚胺培南,美罗匹宁),庆大霉素,万古霉素,替考拉宁,林可霉素和氯

19、林可霉素,是敏感的。虽然头孢菌素和万古霉素都有效,但通常首选一种耐青霉素酶的青霉素。很多葡萄球菌菌 株对红霉素,四环素类药物,氨基糖苷类,杆菌肽和氯霉素也敏感,但因有更好更安全的药可用,故很少使用氯霉素和杆菌肽。目前耐甲氧苯青霉素金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株日益增多，这种细菌虽可从社区获得感染的病人中分别得到,但多数是从感染的静脉吸毒者和重症监护室的病人中分别获得。MRSA 菌株通常对耐 -内酰胺酶青霉素,头孢菌素和卡巴培南类有耐药性。这些细菌对氨基糖苷类和大环内酯类(红霉素,克拉霉素,阿齐霉素,林可霉素和氯林可霉素)的耐药性 也很普遍。虽然亚胺培南-西拉司丁或喹诺酮类对某些 MRSA 感染

20、是有效的,但静脉注射万古霉素为首选。肾功能正常成人的通用剂量是每 6 小时静脉注射 500mg 或每 12 小时静滴注1000mg,至少在 1 小时内滴完。肾功能受损时,剂量应依据血清中药物的浓度加以调整,疗程视感染部位及病人的反响而定,但一般为 24 周。某些严峻的或有并发症的感染, 可能需要静脉给药治疗 68 周,然后再口服治疗 1 个月或更长时间。可用于替代万古霉素治疗 MRSA 感染的药物有：TMP-SMZ,成人剂量为 TMP1015mg/(kg.d)加 SMZ5075mg/(kg.d),分剂口服或肠外给药,每次间隔 8 小时或 12 小时,连续 24 周；利福平(600mg/d)口服

21、或肠外给药；肠外给亚胺培南-西拉司丁(500mg 每 6 小时 1 次)或美罗匹宁(0.51.0g 每 8 小时 1 次。但利福平不要单独应用,由于细菌很易产生抗药性。在治疗异物相关性 MRSA 感染或浆膜腔 MRSA 感染时,利福平和氨基糖苷类是有用的关心药物。邻氯青霉素,双氯青霉素,TMP-SMZ,环丙沙星及局部用莫匹罗星(mupirocin)可用于治疗 MRSA 带菌状态,但 MRSA 对这些药物可产生抗药性。 抗万古霉素的肠球菌(VRE)菌株的流行日益增加, 这种菌株在试验室中可将引起抗万古霉素的基因转为凝固酶阳性的金黄色葡萄球菌菌株,而在感染的病人中则转变为凝固酶 阴性葡萄球菌分别株

22、。可是这些葡萄球菌很简洁对治疗这类感染的其他药物产生抗药性。 杆菌肽,假设有的话,可试用于治疗抗万古霉素的葡萄球菌感染。对这些病人应严格隔离,以防他们的细菌传播。二、细菌的生物安全防护依据病原微生物生物试验室生物安全治理条例中的有关规定，人间传播的微生物名 录待公布金黄色葡萄球菌属于三类，BSL-2。相关的防护事宜包括：（1） 操作要求1、试验时，未经试验室主任同意，限制或制止进入试验室。2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化装。食物应存放在工作区域以外专 用橱柜或冰箱中。3、全部的操作过程应尽量细心，避开产生和溅出气溶胶。4、对于污染的锐器，必需时刻保持高度的警觉，包括针、注射器、玻

23、片、加样器等。5、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器即注射器和针头是一体的。用过的一次性针头必需弯曲、切断、裂开、重套上针头套、从一次性 注射器上去掉，或在丢弃前进展人工处理，要不将之留神放入不会被刺穿的、用于收集 废弃锐器的容器中。非一次性锐器必需放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高 压杀菌。6、打碎的器皿不能直接用手处理，必需用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。 盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应依据相关的规定进展消毒。7、全部的培育物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进展消毒，如高压灭菌。转移到就近试验室消毒的物料应置于

24、耐用、防漏容器内，密封运出 试验室。离开该系统进展消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。8、溅出或偶然大事中，明显暴露于传染源时，要马上向试验室主任报告。进展适当的 医学评估、观看、治疗，保存书面记录。9、按日常程序、在有关传染源的工作完毕后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，试验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送 去修理、维护前，要依据相关的规定消毒；在离开设施转移前，要依据相关的规定打包 运输。（2） 安全设备1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他适宜的人员防护设施、 或物理遏制装置。2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出

25、物的试验过程，包括离心、研磨、匀浆、猛烈震 荡或混匀、超声波裂开、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。3、涉及高浓度或大体积的传染源时，假设选用密封转头或带安全罩的离心机，假设转头或 安全罩仅在生物安全柜中翻开，则可在开放试验室内离心。4、当必需在生物安全柜外处理标本时，需实行面部保护措施跟镜、口罩、面罩、或 其他防溅装置，以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。5、在试验室内，必需使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非试验室区域时，防护服必需留在试验室内。防护服可以在试验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤， 但不能带回家中。6、可能接触潜在传染源、被污染的外表或设备时，要戴手套。一次性手

26、套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“干净”的外表键盘、 等，也不应当戴着到试验室 外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。淋病奈瑟菌的生物危害评估报告一、淋病奈瑟菌的传播与致病淋病奈瑟菌又称淋球菌，是淋病的病原菌，人类是本菌的唯一自然宿主和传染源。淋病 是淋菌性尿道炎的简称，是由淋球菌引起的泌尿生殖系统化脓性炎性疾病，它是人类很 古老的，也是当前世界范围内流行格外广泛的一种性传播疾病。淋病患者是主要传染源，有病症或无病症的患者均可通过性接触传播，其中轻症或无病症的淋病患者是重要的传染源。其传播途径主要包括性交传染，还可通过非性接触传播， 如通过接触患者分泌物污染的用品衣裤、床上用

27、品、毛巾、浴盆、马桶等间接感染； 孕妇淋病患者当羊膜裂开，可继发羊膜腔内及胎儿感染；生儿经过患淋病的母体产道时常可引起淋菌性眼炎；另外尚可通过医护人员的手和器具引起医源性感染。本病最初多侵害尿道、宫颈内膜，继而可涉及前列腺、精囊、副睾、子宫内膜及输卵管。 有时肛门、直肠、咽粘膜、眼结膜也可受染。尚可经血行播散引起菌血症、关节炎、心内膜炎及脑膜炎，可引起死亡或不育、不孕、失明及尿道狭窄等后果。由于本病埋伏期短、传染性强、后果严峻，因此它是我国当前重点防治的性病之一。二、淋病奈瑟菌的生物学特性淋病奈瑟菌属奈瑟菌属，镜下呈肾形，常成双排列，邻近面扁平或稍凹，像两瓣黄豆对在一起，大小 0.6m0.8m

28、。革兰氏染色阴性，呈粉红色，美蓝染色呈蓝色。急性炎症期细菌多在患者分泌物的少局部中性粒细胞的胞浆中，慢性期则多在细胞外，且有些可呈单个球形或四联状。人工培育后形态亦常呈球形、单个、成双或四联排列。淋球菌适于潮湿相对温度 8085、温和35.536.5、中性偏碱pH7.2 7.6、含 510二氧化碳的条件下生长。最怕枯燥，在完全枯燥环境下只能存活 12 小时，对温度变化敏感，超过 38或低于 30则不能生长，在培育基上室温放置 12 天即可死亡，在 39 存活 13 小时，42存活 15 分钟，50存活 5 分钟。如在不完全枯燥的衣裤、被褥、毛巾、玩具上则可存活 1824 小时。一般消毒剂简洁将

29、它杀灭，在 1:4000 硝酸银溶液中 7 分钟死亡，1石炭酸溶液中 3 分钟内死亡。淋球菌较为柔嫩，酶系统不完整，初代培育一般培育基不易成功，需在含有动物蛋白的培育基上，且含有二氧化碳的条件下才能生长。淋球菌在血琼脂培育基孵育 24 小时后， 可形成直径 0.51mm 的圆形稍隆起，潮湿光滑，半透亮，边缘呈花瓣状，有粘性的露滴状菌。淋球菌的生化反响不兴旺，只分解葡萄糖，产酸不产气，不分解麦芽糖及蔗糖。藉助上述生化特性亦可与脑膜炎球菌及其他奈瑟菌相鉴别。淋球菌能产生氧化酶和过氧化氢酶， 在诊断上有肯定意义。三、淋病奈瑟菌的试验室检查及其诊断细菌的试验室检查及其它检查（1） 涂片检查：取患者尿道

30、分泌物或宫颈分泌物，作革兰氏染色，在多形核白细胞内找到革兰氏阴性双球菌。涂片对有大量脓性分泌物的单纯淋菌性前尿道炎患者，此法阳性率在 90%左右，可以初步诊断。女性宫颈分泌物中杂菌多，敏感性和特异性较差， 阳性率仅为 50-60%，且有假阳性，因此世界卫生组织推举用培育法检查女病人。慢性淋病由于分泌物中淋球菌较少，阳性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高检出率。咽部涂片觉察革兰氏阴性双球菌不能诊断淋病，由于其他奈瑟菌属在咽部是正常的菌群。 另外对病症不典型的涂片阳性应作进一步检查。（2） 培育检查：淋球菌培育是诊断的重要佐证，培育法对病症很轻或无病症的男性、女性病人都是较敏感的方法，只要培育阳性

31、就可确诊，在基因诊断问世以前，培育是世 界卫生组织推举的筛选淋病的唯一方法。目前国外推举选择培育基有改进的 Thayer-MartinTM培育基和 New York CityNYC培育基。国内承受巧克力琼脂或血琼脂培育基，均含有抗生素，可选择地抑制很多其他细菌生长。在 36，70%湿度，含 5%-10%CO2烛缸环境中培育，24-48 小时观看结果。培育后还需进展菌落形态，革兰氏染色，氧化酶试验和糖发酵试验等鉴定。培育阳性率男性 80%-95%，女性 80-90%。培育后需依据菌落形态、革兰染色、氧化酶试验和糖发酵试验做出鉴定。培育阳性率男性为 8095，女性为 80 90。（3） 抗原检测1

32、. 固相酶免疫试验EIA：可用来检测临床标本中的淋球菌抗原，在流行率很高的地区而又不能作培育或标本需长时间远送时使用，可以在妇女人群中用来诊断淋球菌感染。2. 直接免疫荧光试验：通过检测淋球菌外膜蛋白 I 的单克隆抗体作直接免疫荧光试验。但目前在男女二性标本的敏感不高，特异性差，加之试验人员的推断水平，故该试验尚不能推举用来诊断淋球菌感染。（4） 基因诊断1淋球菌的基因探针诊断:淋球菌的基因探针诊断，所用的探针有：质粒 DNA 探针， 染色体基因探针和 rRNA 基因探针。2、淋球菌的基因扩增检测 PCR 技术和连接酶链反响的消灭进一步提高了检测淋球菌的灵敏性，它具有快速、灵敏、特异、简便的优

33、点，可以直接检测临床标本中极微量的病 原体。（5） 药敏试验 对培育阳性者可进一步用纸片集中法做药敏试验，或用琼脂平皿稀释法测定药物最小抑菌浓度MIC，以及用纸片酸度定量法检测 内酰胺酶使用Whatman I 号滤纸 PP-NG 菌株能使其颜色由蓝变黄，阳性为 PPNG，阴性为N-PPNG，以确定淋球菌对抗生素的敏感性，合理选择用药。 四、淋病的预防淋病奈瑟菌的预防要点如下：1. 避开婚外性行为。2. 在性生活中提倡使用避孕套等理化屏障，以防止淋球菌感染。3. 预防性使用抗生素可削减感染的危急，可应用于与淋病患者有性接触者。4. 按淋病治疗方案对病人进展合理治疗，彻底消灭传染源。5. 对性伴侣

34、应进展检查和治疗。6. 患者宜留意个人卫生与隔离，不与家人、小孩尤其女孩同床、共浴。7. 执行对生儿硝酸银溶液或红霉素溶液预防滴眼的规定，防止生儿淋病性眼炎发生。8. 病人需经彻底治愈后，方可结婚、生育和安排工作。 五、淋病奈瑟菌的生物安全防护依据病原微生物生物试验室生物安全治理条例中的有关规定，人间传播的微生物名录待公布霍乱弧菌属于三类，BSL-2。相关的防护事宜包括：（1） 操作要求1、试验时，未经试验室主任同意，限制或制止进入试验室。2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化装。食物应存放在工作区域以外专 用橱柜或冰箱中。3、对于污染的锐器，必需时刻保持高度的警觉，包括针、注射器、玻

35、片、加样器等。4、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器即注射器和针头是一体的。用过的一次性针头必需弯曲、切断、裂开、重套上针头套、从一次性 注射器上去掉，或在丢弃前进展人工处理，要不将之留神放入不会被刺穿的、用于收集 废弃锐器的容器中。非一次性锐器必需放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高 压杀菌。5、打碎的器皿不能直接用手处理，必需用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应依据相关的规定进展消毒。6、全部的培育物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进展消毒，如高压灭菌。转移到就近试验室消毒的物料应置于耐

36、用、防漏容器内，密封运出 试验室。离开该系统进展消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。7、溅出或偶然大事中，明显暴露于传染源时，要马上向试验室主任报告。进展适当的 医学评估、观看、治疗，保存书面记录。8、按日常程序、在有关传染源的工作完毕后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，试验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。污染的设备在送 去修理、维护前，要依据相关的规定消毒；在离开设施转移前，要依据相关的规定打包 运输。（2） 安全设备1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他适宜的人员防护设施、 或物理遏制装置。2、确定可能形成传染性溅出物的试验过

37、程，包括离心、研磨、匀浆、猛烈震荡或混匀、 超声波裂开、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。3、涉及高浓度或大体积的传染源时，假设选用密封转头或带安全罩的离心机，假设转头或 安全罩仅在生物安全柜中翻开，则可在开放试验室内离心。4、当必需在生物安全柜外处理标本时，需实行面部保护措施跟镜、口罩、面罩、或 其他防溅装置，以免传染源或其他有害物溅或洒到面上。5、在试验室内，必需使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。人员到非试验室区域时，防护服必需留在试验室内。防护服可以在试验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤， 但不能带回家中。6、可能接触潜在传染源、被污染的外表或设备时，要戴手套。一次性手套不用清洗

38、、不能重复使用，不能用于接触“干净”的外表键盘、 等，也不应当戴着到试验室 外。要备有带滑石粉的乳胶手套。脱掉手套后，要洗手。结核杆菌的生物危害评估报告一、结核杆菌的传播与致病结核杆菌通常指结核分枝杆菌和牛分枝杆菌，其中结核分枝杆菌 Mycobacterium tuberculosis是引起人类结核病的主要病原体。结核分枝杆菌的主要传染途径是经呼吸道传播，由排菌的肺结核病人在咳嗽、喷嚏或大 声说话时随呼吸道分泌物排出到空气中，或排菌的肺结核病人随地吐痰通过再生气溶胶 (尘埃)，携带结核杆菌，飞扬在空气中，被安康的人吸入后发生感染和发病，因此排菌的肺结核患者(尤其是痰涂片阳性未经治疗者)是结核病

39、的主要传染源。一般结核病患者 痰中结核杆菌越多，传播的危急性越大。患者排出的飞沫在 1-10 微米者，在空气中漂移时间长，传染性越大。患者病变和病症越严峻，传染性也越大。四周人群与患者接触 越亲热者，受感染的时机越多。与患者同处于空气不流通的室内的亲热接触者，受感染 的可能性增大。未受结核感染的人是结核病易感人群，由于结核病是人畜共患病，哺乳类动物如牛、鹿、 猴、猪、猫、狗等也都可以患结核病。感染结核杆菌后，终身都有可能发病，发病时间因人而异，一般 2 个月20 年才发病。典型肺结核起病缓慢，病程较长，有低热、倦怠、食欲不振、咳嗽及少量咯血。但多数患者病灶稍微，无显著病症。1病症 全身病症 表

40、现为午后低热、乏力、食欲不振、消瘦、盗汗等。呼吸系统病症 通常为干咳或带少量黏液痰；继发感染时，痰呈粘液脓性。约 1/3 患者有不同程度咯血，咯血后常有低热。大咯血时可发生失血性休克，偶因血块堵塞大气道引起窒息。病灶炎症累及壁层胸膜时，相应胸壁有刺痛，一般多不猛烈，随呼吸及咳嗽而加重。假设并发气胸或大量胸腔积液，呼吸困难病症尤为严峻。2体征 早期病灶小或位于肺组织深部，多无特别体征。假设病变范围较大，患侧肺部呼吸运动减弱，叩诊呈浊音，听诊时呼吸音减低，或为支气管肺泡呼吸音。因肺结核 好发于肺上叶尖后段及下叶背段，故锁骨上下、肩胛区叩诊略浊，咳嗽后偶可闻及湿啰 音，对诊断有参考意义。肺部病变发生

41、广泛纤维化或胸膜粘连增厚时，患侧胸廓常呈下 陷、肋间隙变窄、气管移位与叩浊，对侧可有代偿性肺气肿征。二、结核杆菌的生物学特性从分类学上看结核杆菌属于裂殖菌纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属。结核分枝杆菌正常典型的形态是直或稍弯曲、两端钝圆的杆菌，菌体长 1-4 纳米，宽0.3-0.6 纳米，无芽胞、无荚膜、无鞭毛，生长发育期间有分枝生长倾向。镜下常呈单个散在或呈“人、V、T、Y”形排列，菌体多时细菌扭集一起呈绳索状、束状或丛状。此 外结核杆菌菌体还具有多形态特征，受不良生长条件的影响可分别表现为杆菌型 (根本形态)、滤过型、颗粒型和球菌型(L 型)4 种不同的类型。分枝杆菌生长缓慢，在人工培

42、育基内生殖一代约需 15-20 小时，一般需 2-4 周或更长 时间始见菌落生长，甚至有极少数生长极为缓慢者需 8 周以上才开头有菌落生长。它为专性需氧菌，生长的温度范围是 35-40，pH 5.5-7.2。培育养分要求较高且特别，培育基需含鸡蛋、血清、氨基酸、甘油等养分丰富的简单有机物及少量无机盐类。而且结核杆菌随着环境的转变易发生菌落形态、毒力、L 型及药物耐药性变异，如在人工培育基上反复连续传代，可产生变异而致毒力降低，三、结核杆菌的检测与诊断（1） 细菌的试验室检查及其它检查 结核菌检查 是确诊肺结核最特异性的方法，痰中找到结核菌为确诊肺结核的主要依据。涂片抗酸染色镜检快速简便。在我国

43、非典型分枝杆菌尚属少见，故抗酸杆菌阳性， 肺结核诊断根本即可成立。痰菌阳性说明其病灶是开放性的，具有传染性。培育法更为准确，尚可作药物敏感试验与菌型鉴定。但结核菌生长缓慢，培育较为费时，但准确牢靠，特异性高。假设涂片阴性或诊断有疑问时，培育尤其重要；而且，培育后可做药物敏感性测定，指导临床用药。PCR 技术检测结核菌 DNA 快速、简便，并可鉴定菌型，缺乏之处是可能消灭假阳性或假阴性。 影像学检查 胸部 X 线检查可以觉察肺内病变的部位、范围、有无空洞或空洞大小、洞壁厚薄等。X 线对各类结核病的透过度不同，通过 X 线检查能大致估量结核病灶的病理性质，并能早期觉察肺结核，以及推断病情进展及治疗

44、效果，有助于打算治疗 方案。肺结核的常见 X 线表现包括：纤维钙化的硬结病灶、浸润性病灶以及干酪样病灶等。胸部 CT 检查对于觉察微小或隐蔽性病变，了解病变范围及病变鉴别等方面均有帮助。 结核菌素试验 是诊断结核感染的参考指标。使用的变应原有旧结核菌素 old tuberculin, OT和结核菌素的纯化蛋白衍化物purified protein derivative, PPD，现临床多用 PPD。皮内注射 0.1ml5IU，硬结平均直径5mm 为阳性反响。结核菌素试验有助于推断有无结核菌感染。假设呈强阳性反响，常表示为活动性结核病。结核菌素试验阳性反响仅表示曾有结核感染，并不肯定现在患病。结

45、核菌素试验阴性反响除表示没有结核菌感染外，尚需考虑以下状况：结核菌在感染 48 周后才建立充分变态反响，在这之前，结核菌素试验可呈阴性；应用糖皮质激素等免疫抑制剂，或养分不良、 麻疹、百日咳等患者，结核菌素反响亦可临时消逝。 其它检查 结核病患者血像通常无转变，严峻病例常有继发性贫血，急性粟粒型肺结核时白细胞总数减低或消灭类白血病反响。血沉增快常见于活动性肺结核。用 ELISA 法检测患者血清中特异性抗体，可对无痰或痰菌阴性者和肺外结核的诊断供给参考。纤支镜检查对于觉察气管内膜结核、了解有无肿瘤、吸取分泌物、解除堵塞或作病原菌及脱落细胞检查，以及取活组织作病理检查等，均有重要诊断价值。浅表淋巴

46、结活检，有助于结核的鉴别诊断。（2） 诊断和鉴别诊断痰结核菌检查不仅是诊断肺结核的主要依据，亦是考核疗效、随访病情的重要指标。X 线检查是诊断肺结核的必要手段，对早期诊断、确定病变部位、范围、性质、了解其演 变及选择治疗等均具有重要价值。在临床诊断中，我国现用的分类法包括四局部，即肺 结核类型、病变范围及空洞部位、痰菌检查、活动性及转归。肺结核分为五型：型为 原发型肺结核；型为血行播散型肺结核；型为浸润型肺结核；型为慢性纤维空洞 型肺结核；型为结核性胸膜炎。还应留意将结核病与肺癌、肺炎、支气管扩张、慢性 支气管哮喘和其它发热性疾病如伤寒、败血症、白血病、纵隔淋巴瘤及结节病等进展鉴 别。四、结核杆菌的防治及生物安全防护