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1、2 2.果蝇唾腺染色体的制备与观察果蝇唾腺染色体的制备与观察1.练习取出果蝇唾腺的技术和制作唾腺染色体标本的方法。2.观察唾腺染色体的特征:巨大、多线、体细胞联会、横纹、疏松区 等。3.绘多线染色体图。实验目的:实验原理:果蝇等双翅目类昆虫幼虫期有很大的唾腺细胞,其中的染色体也很巨大:宽约5m,长约400m,相当于普通中期相染色体的100-150倍,称巨大染色体(giant chromosome)唾腺染色体经多次复制而不分开,形成大约有1000-4000根染色体丝的拷贝,又称多线染色体(polytene chromosome)唾腺染色体有许多重要特点,已为染色体结构畸变、化学组成、基因定位及差
2、异表达研究提供了独特的材料,而唾腺染色体技术也是遗传学研究中一项基本的技术。有丝分裂中期有丝分裂中期果蝇唾腺染色体的特点:1.巨大;2.多线;3.体细胞联会:4.-唾腺染色体形成的最初,其同源染色体即处于紧密配对几乎完全融合状态。5.-在以后不断的复制中仍不分开,所以唾腺染色体只呈现二倍体染色体数目的单元数。6.-由于其体细胞同源染色体的配对,故易于进行染色体的缺失、重复、倒位和易位的细胞学观察和研究。体细胞联会:各染色体着丝点附近异染色质区相互结合形成染色很深的染色中心,第、对染色体呈形(中着丝粒),各有两臂,染色体呈棒状,第对染色体呈粒状(第IV和X染色体为端着丝粒),观察时可见5长1短共
3、6条臂由染色中心向外蜿蜒伸展。果蝇唾腺染色体核型果蝇唾腺染色体核型果蝇唾腺染色体模式核型果蝇唾腺染色体模式核型 果蝇唾腺染色体图果蝇唾腺染色体图(2n=8)果蝇唾腺染色体的特点:4.横纹:-每条染色体的染色线在不同的区段螺旋化程度不一,出现一系列宽窄不同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。-不同染色体横纹宽窄、疏密、数目、形状和排列顺序恒定,具有物种特异性。-一旦染色体上发生了缺失,重复,倒位,易位等,也可较容易地在唾腺染色体上观察识别出来。-利用这些特征不仅可以鉴定不同的染色体,还可结合遗传实验结果进行基因定位。杂合子纯合子果蝇唾腺染色体的特点:5.Puff(泡/疏松区):-幼虫的不同发育期,浓
4、缩的染色质纤维会成群解旋、松开,出现不连续的膨胀,形成泡状松散结构。-被认为是这部分基因被激活的标志。实验材料与步骤实验材料与步骤唾腺唾腺n剖取唾腺:n果蝇三龄幼虫。其它?盲囊气管脂肪体果蝇的唾腺果蝇的唾腺詹朝宇李连杰2010柳珍唾腺与肠道的区别步骤步骤n解离:用滤纸吸取多余盐水,在唾腺上用滤纸吸取多余盐水,在唾腺上 滴滴一滴一滴 1 1M HClM HCl,解离,解离2-3分钟分钟,用蒸馏水洗,用蒸馏水洗净,然后让唾腺在蒸馏水中吸涨净,然后让唾腺在蒸馏水中吸涨10-15分钟分钟n染色:将水吸干后将水吸干后滴上几滴改良苯酚品红于滴上几滴改良苯酚品红于唾腺上,染色唾腺上,染色10分钟(及时补充液
5、)。分钟(及时补充液)。步骤步骤n压片:盖上盖玻片,左手指按压住,同时用盖上盖玻片,左手指按压住,同时用右手大拇指指肚稍用力摁压盖玻片,然后用右手大拇指指肚稍用力摁压盖玻片,然后用铅笔头轻敲盖片,最后用吸水纸吸尽多余染铅笔头轻敲盖片,最后用吸水纸吸尽多余染液,使唾腺细胞核破裂,核中的染色体舒展液,使唾腺细胞核破裂,核中的染色体舒展开来。开来。n观察:先将压好的玻片标本放在低倍镜下观先将压好的玻片标本放在低倍镜下观察,找到清楚的染色体物像后,将观察目标察,找到清楚的染色体物像后,将观察目标移到视野中心,再用高倍镜观察。移到视野中心,再用高倍镜观察。唾腺细胞及染色体唾腺细胞及染色体 (例)(例)唾腺染色体唾腺染色体 (例)(例)钟友邦 2010唾腺染色体唾腺染色体 (例)(例)作业与思考作业与思考1.1.请画一个有代表性的果蝇唾腺染色体图。请画一个有代表性的果蝇唾腺染色体图。2.2.总结实验过程中得到合格制片的要点。总结实验过程中得到合格制片的要点。3.3.果蝇巨大染色体有哪些特点?果蝇巨大染色体有哪些特点?4.4.制备果蝇唾腺染色体有何用处?制备果蝇唾腺染色体有何用处?
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