实验八-1细胞超微结构观察与透射电子显微镜的使用.ppt

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1、实验实验 八八-1细胞超微结构观察与透射电子细胞超微结构观察与透射电子显微镜的使用显微镜的使用掌握透射电子显微镜的成像基本原理及其掌握透射电子显微镜的成像基本原理及其应用应用实验目的与要求实验目的与要求一、透射电子显微镜的成像基本原理一、透射电子显微镜的成像基本原理在真空条件下，电子束经高压加速后，穿在真空条件下，电子束经高压加速后，穿透样品时形成散射电子和透射电子，它们透样品时形成散射电子和透射电子，它们在电磁透镜的作用下在荧光屏上成像。在电磁透镜的作用下在荧光屏上成像。显微镜显微镜分辨本领分辨本领光源光源透镜透镜真空真空成像原理成像原理LMTEM200nm100nm0.1nm可见光可见光（

2、400-700）紫外光紫外光（约（约200nm)电子束电子束（0.01-0.9）玻璃透镜玻璃透镜玻璃透镜玻璃透镜电磁透镜电磁透镜不要求真空不要求真空不要求真空不要求真空要求真空要求真空1.33x10-51.33x10-3Pa利用样品对光的吸收形利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化成明暗反差和颜色变化利用样品对电子的散射利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差和透射形成明暗反差电镜与光镜的比较电镜与光镜的比较 超薄切片技术超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备用于电镜观察的样本制备负染色技术（负染色技术（Negative staining）染色背景，衬托出样品的精细结构染色背景，衬托出样品的精细

3、结构冰冻蚀刻技术（冰冻蚀刻技术（Freeze etching）冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒 和膜表面结构。和膜表面结构。电镜三维重构技术电镜三维重构技术电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的 具有重要应用前景的一门新技术。具有重要应用前景的一门新技术。电镜三维重构技术与电镜三维重构技术与X-X-射线晶体衍射技术及核磁共振射线晶体衍射技术及核磁共振 分析技术相结合，是当前结构生物学（分析技术相结合，是当前结构生物学（Structural BiologyStru

4、ctural Biology）（主要研究生物大分子空间结构及其相互关系）的主要实验手段。（主要研究生物大分子空间结构及其相互关系）的主要实验手段。主要电镜制样技术主要电镜制样技术超薄切片技术主要包括取材、固定、超薄切片技术主要包括取材、固定、包埋、切片、染色等步骤。包埋、切片、染色等步骤。二、作业二、作业:试比较电子显微镜与普通光学显试比较电子显微镜与普通光学显微镜的异同。微镜的异同。实验八实验八-2 细胞超微结构观察与扫描电子显微镜的使用细胞超微结构观察与扫描电子显微镜的使用利用二次电子信号成像来观察样品的表面形利用二次电子信号成像来观察样品的表面形态。电子态。电子“探针探针”扫描，激发样品表面放出扫描，激发样品表面放出二次电子，探测器收集二次电子成像。二次电子，探测器收集二次电子成像。一、实验原理一、实验原理疟疾破坏的两个红细胞疟疾破坏的两个红细胞二、作业二、作业试描述扫描电子显微镜成像的基本原理试描述扫描电子显微镜成像的基本原理