蛋白质两性解离.ppt

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1、这样的药物是如何生产的？这样的药物是如何生产的？一、目的一、目的（1 1）熟悉蛋白质的两性性质及等电点与蛋）熟悉蛋白质的两性性质及等电点与蛋白质分子沉淀的关系白质分子沉淀的关系（2 2）掌握蛋白质等电点的测定方法）掌握蛋白质等电点的测定方法(pH(pH法法)二、原理二、原理蛋白质是蛋白质是两性电解质两性电解质 。蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。当溶液的当溶液的pHpH达到某值，蛋白质颗粒上正负电荷数目相等。达到某值，蛋白质颗粒上正负电荷数目相等。在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动。在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也

2、不向阳极移动。此时，溶液的此时，溶液的pHpH值称为此种蛋白质的等电点值称为此种蛋白质的等电点(pI)(pI)。不同蛋白质各有其特异的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化。可利用此种变化测定各种蛋白质的等电点。可利用此种变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pHpH值。值。本实验借观察在不同本实验借观察在不同pHpH溶液中溶液中,酪蛋白的溶酪蛋白的溶解度以测定其等电点。解度以测定其等电点。用醋酸与醋酸钠用醋酸与醋酸钠(醋酸钠混合在酪蛋白溶醋酸钠混合在酪蛋白溶

3、液中液中)配制成各种不同配制成各种不同pHpH值的缓冲液。值的缓冲液。向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现向诸缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的最多的缓冲液的pHpH值即为酪蛋白的等电点。值即为酪蛋白的等电点。三、材料三、材料（一）试剂（一）试剂1mol/L1mol/L乙酸乙酸0.1mol/L0.1mol/L乙酸乙酸0.01mol/L0.01mol/L乙酸乙酸0.02mol/LNaOH0.02mol/LNaOH0.02mol/L0.02mol/L盐酸盐酸0.01%0.01%溴甲酚绿指示剂溴甲酚绿指示剂0.5%0.5%酪蛋白溶液酪蛋白溶液（二）器材（二）器材试管架试管架试管：试管：1

4、5ml615ml6刻度吸管：刻度吸管：1ml41ml4，2ml42ml4，10ml210ml2胶头吸管胶头吸管22四、操作四、操作 一、蛋白质的两性解离一、蛋白质的两性解离（1 1）取一支试管，加）取一支试管，加0.5%0.5%酪蛋白酪蛋白1ml1ml，再加溴甲酚绿，再加溴甲酚绿指示剂指示剂4 4滴，摇匀。滴，摇匀。（2 2）用胶头滴管慢慢加入）用胶头滴管慢慢加入0.2mol/L0.2mol/L盐酸，边加边摇直盐酸，边加边摇直至有大量的至有大量的沉淀沉淀生成。观察溶液颜色的变化。生成。观察溶液颜色的变化。（3 3）继续滴加）继续滴加0.2mol/L0.2mol/L盐酸，沉淀会逐渐减少以至盐酸，

5、沉淀会逐渐减少以至消消失失。观察此时溶液颜色的变化。观察此时溶液颜色的变化。（4 4）滴加）滴加0.2mol/L NaOH 0.2mol/L NaOH 进行中和，进行中和，沉淀沉淀又出现。继又出现。继续滴加续滴加0.2mol/L NaOH0.2mol/L NaOH，沉淀沉淀又逐渐消失。观察溶液又逐渐消失。观察溶液颜色的变化。颜色的变化。二、酪蛋白等电点的测定二、酪蛋白等电点的测定（1 1）取同样规格的试管）取同样规格的试管5 5支，按下表精确地支，按下表精确地加入下列试剂后，充分混悬加入下列试剂后，充分混悬（2 2）用）用-、+、+、+等符号表示各管的混浊等符号表示各管的混浊度。根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混度。根据混浊度判断酪蛋白的等电点。最混浊的一管的浊的一管的pHpH值即为酪蛋白的等电点。值即为酪蛋白的等电点。五、注意事项五、注意事项滴加液体后要迅速混匀滴加液体后要迅速混匀