减数分裂的制片与观.ppt

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1、 植物花粉母细胞减数分裂制片植物花粉母细胞减数分裂制片技术和染色体观察技术和染色体观察 一、实验目的一、实验目的 1 1、观察染色体在减数分裂中的行为和变、观察染色体在减数分裂中的行为和变化，识别减数分裂各个时期特点，加深对化，识别减数分裂各个时期特点，加深对减数分裂遗传学意义的理解；减数分裂遗传学意义的理解；2 2、掌握动、植物减数分裂的制片技术。、掌握动、植物减数分裂的制片技术。二、实验原理二、实验原理 u 减数分裂是性母细胞在配子形成过程中一种特殊的细胞分减数分裂是性母细胞在配子形成过程中一种特殊的细胞分裂方式。裂方式。在减数分裂过程中染色体只复制一次，而细胞却连续在减数分裂过程中染色体

2、只复制一次，而细胞却连续分裂两次，因此一个二倍体的性母细胞便形成为四个单倍体的分裂两次，因此一个二倍体的性母细胞便形成为四个单倍体的性细胞。性细胞。u 高等植物花粉母细胞经减数分裂产生四个小孢子，染色体高等植物花粉母细胞经减数分裂产生四个小孢子，染色体数目已减半为数目已减半为n。小孢子进一步发育为花粉粒。小孢子进一步发育为花粉粒。减数分裂过程减数分裂过程1 1、间期间期(前间期前间期)2 2、减数第一分裂、减数第一分裂3 3、中间期、中间期4 4、减数第二分裂、减数第二分裂前期前期I I 中期中期I I 后期后期I I 末期末期I I前期前期II II 中期中期II II 后期后期II II

3、末期末期IIIIu 在适宜的时期采集植物的花蕾，经固定液在适宜的时期采集植物的花蕾，经固定液杀死固定，使细胞保持活体时形态。然后进行压杀死固定，使细胞保持活体时形态。然后进行压片染色等处理，在显微镜下进行观察，可以看到片染色等处理，在显微镜下进行观察，可以看到小孢子母细胞的减数分裂过程，研究染色体在形小孢子母细胞的减数分裂过程，研究染色体在形态和数量上的动态变化特点。态和数量上的动态变化特点。三、实验用品三、实验用品实验材料：玉米实验材料：玉米（Zea mays 2n=20）雄花序或小麦、雄花序或小麦、蚕豆蚕豆(Vicia faba 2n=12)花蕾、花蕾、蝗虫蝗虫(grasshopper 初

4、级精母细胞初级精母细胞2n=22+X)精巢精巢仪器物品：显微镜、水浴锅、镊子、解剖针仪器物品：显微镜、水浴锅、镊子、解剖针实验药品：卡诺实验药品：卡诺氏氏固定液、固定液、70%乙醇、改良品红或醋酸乙醇、改良品红或醋酸洋红。洋红。四、实验操作流程四、实验操作流程 取材取材 固定固定 剥离花药剥离花药 染色染色 压片压片 镜检镜检 1.1.取材：取材：u选取适当大小的花蕾，是观察花粉母细胞减数分裂的关选取适当大小的花蕾，是观察花粉母细胞减数分裂的关键性步骤。不同植物取材时期不同。键性步骤。不同植物取材时期不同。u 玉米：抽雄前两周（大喇叭口期），玉米：抽雄前两周（大喇叭口期），雄穗尖端露出以前雄穗

5、尖端露出以前7-10d时，先以手指挤摸穗尖的外部，觉得松软时时，先以手指挤摸穗尖的外部，觉得松软时在雄花在雄花序所在部位用刀片纵向划一切口，用镊子取出花序分枝。序所在部位用刀片纵向划一切口，用镊子取出花序分枝。此时雄花序先端小穗颖长此时雄花序先端小穗颖长4mm左右，花药长左右，花药长23mm。每小穗中有两朵小花，各有花药每小穗中有两朵小花，各有花药3个个。通常从一个分枝上。通常从一个分枝上从幼嫩的部位向较为成熟的区域混合制片。从幼嫩的部位向较为成熟的区域混合制片。u小麦：孕穗期以后，旗叶抽出小麦：孕穗期以后，旗叶抽出1 2cm，取出穗子。取出穗子。u 时间一般在上午时间一般在上午9时时10时，

6、不同材料间稍有差异。时，不同材料间稍有差异。玉米大喇叭口玉米大喇叭口期期玉米小穗玉米小穗玉米雄花序玉米雄花序小麦孕穗期小麦孕穗期小麦的小花小麦的小花实验中注意观察：每一分枝是中上部还是下部小穗发育最早？实验中注意观察：每一分枝是中上部还是下部小穗发育最早？2 2固定：固定：u取下的材料应立即放入固定液中杀死固定。取下的材料应立即放入固定液中杀死固定。u一般采用卡诺氏固定液，无水酒精：冰醋酸一般采用卡诺氏固定液，无水酒精：冰醋酸3:1，一般固定，一般固定424h。可用。可用95 乙醇代乙醇代替无水乙醇。替无水乙醇。u如需长期保存，可先用如需长期保存，可先用70%酒精冲洗酒精冲洗2次然次然后转入后

7、转入70%酒精中保存。酒精中保存。u注意：固定液时应现配现用，固定时不要在阳光下注意：固定液时应现配现用，固定时不要在阳光下暴晒。暴晒。3 3、剥离花药、剥离花药取出保存的花序，吸去小穗过多保存液，置于载玻取出保存的花序，吸去小穗过多保存液，置于载玻片中央，挑出花药片中央，挑出花药4 4染色：染色：在剥离的材料上滴加在剥离的材料上滴加1滴染液，在室温下滴染液，在室温下染色染色1015min。5.压片压片 盖上盖玻片，在盖玻片上垫盖上盖玻片，在盖玻片上垫12层吸水纸，用一只手层吸水纸，用一只手稳住载玻片和盖片稳住载玻片和盖片防止滑动防止滑动，另一只手用解剖针的针柄敲，另一只手用解剖针的针柄敲击盖

8、片击盖片6.6.镜检观察镜检观察先用低倍镜观察，找到一个好的分裂相，再转用高倍镜观先用低倍镜观察，找到一个好的分裂相，再转用高倍镜观察。要求能够分辨减数分裂的各个时期，特别是能够独立察。要求能够分辨减数分裂的各个时期，特别是能够独立辨认第一次减数分裂前期的各个时期辨认第一次减数分裂前期的各个时期7.7.观察永久制片观察永久制片 在显微镜下观察，并与自己的制片比较，掌握各个时在显微镜下观察，并与自己的制片比较，掌握各个时期的特点。期的特点。u注意：注意：怎样区分各个时期？怎样区分各个时期？五、实验结果与分析五、实验结果与分析1绘出自己所制作片子的分裂相绘出自己所制作片子的分裂相(3个以上时期），

9、个以上时期），说明其时期和特点。说明其时期和特点。2.分析自己制片操作过程中出现的问题及可能原因。分析自己制片操作过程中出现的问题及可能原因。注意事项注意事项u 爱护显微镜。爱护显微镜。u 一次取材不要太多。一次取材不要太多。u用过的载玻片必须刷洗干净，用过的用过的载玻片必须刷洗干净，用过的盖玻片丢入垃圾桶，不得直接冲入水盖玻片丢入垃圾桶，不得直接冲入水池。池。减数分裂前期减数分裂前期 I I细线期细线期偶线期偶线期偶线期偶线期粗线期粗线期双线期双线期终变期终变期中期中期后期后期后期后期前期前期II中期中期II后期后期II末期末期II四分体四分体小孢子小孢子玉米减数分裂中期玉米减数分裂中期I玉

10、米减数分裂中期玉米减数分裂中期 IIM1 中期与中期与M2中期的比较中期的比较前期前期 I细线期细线期偶线期偶线期粗线期粗线期双线期双线期终变期终变期中期中期 I后期后期 I末期末期 I前期前期 II中期中期 II后期 II末期 II取材及固定取材及固定捕捉雄性蝗虫，直接投入到捕捉雄性蝗虫，直接投入到卡诺固定液中固定卡诺固定液中固定2424小时，小时，然后转到然后转到7070的酒精中保存。的酒精中保存。雌雄虫辨别雌雄虫辨别（外观）（外观）雄性蝗虫虫个体小，雌虫较大；雄性蝗虫虫个体小，雌虫较大；雌性蝗虫尾部有产卵瓣，雄虫雌性蝗虫尾部有产卵瓣，雄虫无无。解剖取出解剖取出精巢精巢：先将蝗虫翅膀剪去，

11、在翅基部的后先将蝗虫翅膀剪去，在翅基部的后方，相当于腹部背侧的前端，用解剖剪将其体壁剪方，相当于腹部背侧的前端，用解剖剪将其体壁剪开，上方两侧的黄色团块就是精巢。精巢由许多排开，上方两侧的黄色团块就是精巢。精巢由许多排列在一起的精小管组成。列在一起的精小管组成。将精巢取出置于一洁净的将精巢取出置于一洁净的培养皿内，用蒸馏水洗涤干净。用解剖针将精巢轻培养皿内，用蒸馏水洗涤干净。用解剖针将精巢轻轻分离开，即可看到大量的精细小管。轻分离开，即可看到大量的精细小管。取取1 12 2根精小管放在干净的载玻片上，根精小管放在干净的载玻片上，用吸水纸将上面的水吸净，用吸水纸将上面的水吸净，在精小管位在精小管

12、位置上滴加一滴改良苯酚品红染液，在室置上滴加一滴改良苯酚品红染液，在室温下染色温下染色10-15min。附：显微镜操作和使用u 开关显微镜，移动显微镜。开关显微镜，移动显微镜。u调节调节目镜间距和目镜微调目镜间距和目镜微调，使两个眼睛视野相同和清晰，使两个眼睛视野相同和清晰，防止眼睛疲劳。防止眼睛疲劳。u 先低倍镜，后高倍镜观察，高倍镜下不准用粗调。先低倍镜，后高倍镜观察，高倍镜下不准用粗调。u 高倍镜下不得取、放载玻片。高倍镜下不得取、放载玻片。u 使用结束：电压或光亮度调至最小使用结束：电压或光亮度调至最小，关闭并拔下电源，关闭并拔下电源，降低载物台，降低载物台，最低倍物镜或无目镜的镜筒居中最低倍物镜或无目镜的镜筒居中，防尘罩，防尘罩，填写使用记录填写使用记录，请老师验收方可离开。，请老师验收方可离开。调节目镜间距和目镜微调