动物细胞融合和单克隆抗体(5).ppt
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1、关于动物细胞融合与单克隆抗体(5)第一张,PPT共四十一页,创作于2022年6月 2002年年12月月30日,日,两场筹备了两场筹备了10年的年的“太空婚太空婚礼礼”首次在神舟四号飞船上举行,首次在神舟四号飞船上举行,植物细胞植物细胞“新人新人”黄花烟草黄花烟草和和革新一号烟草革新一号烟草叶肉细胞叶肉细胞原生质体原生质体,动动物细胞物细胞“新人新人”是小鼠是小鼠B淋巴细胞淋巴细胞和和骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞,两,两批新人同时在批新人同时在“产房产房”电融合仪内孕育新生命。电融合仪内孕育新生命。“太空婚礼太空婚礼”这两场这两场“太空婚礼太空婚礼”实质是哪两项细胞工程技术实质是哪两项细胞工程技术植物体
2、细胞杂交技术植物体细胞杂交技术动物细胞融合技术动物细胞融合技术第二张,PPT共四十一页,创作于2022年6月(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物体细胞杂交过程示意图第三张,PPT共四十一页,创作于2022年6月A细胞细胞B细胞细胞人工诱导人工诱导1.11.1动物动物细胞融合的概念细胞融合的概念杂交细胞杂交细胞 动物细胞融合(也称细胞杂交):动物细胞融合(也称细胞杂交):是指是指两个或多个细胞两个或多个细胞融合形成一融合形成一个个单核细胞单核细胞的过程。的过程。一、动物细胞融合一、动物细胞融合第四张,PPT共四十一页,创作于2022年6月阅读课本阅读课本P52P52及识图及识图2-232-2
3、3,第五张,PPT共四十一页,创作于2022年6月细胞膜的流动性细胞膜的流动性灭活病毒、灭活病毒、PEGPEG、电激等、电激等融合后的细胞进行有丝分裂,形融合后的细胞进行有丝分裂,形成完整的杂交细胞成完整的杂交细胞诱导的手段?诱导的手段?融合后细胞的类型?融合后细胞的类型?ABAB杂种细胞遗传物质杂种细胞遗传物质有什么特点?有什么特点?三种三种AAAA、ABAB、BBBB(A A、B B)含两种生物的遗传物质含两种生物的遗传物质1.21.2动物细胞融合过程动物细胞融合过程原理?原理?第六张,PPT共四十一页,创作于2022年6月1.21.2动物细胞融合过程动物细胞融合过程 为什么灭活的为什么灭
4、活的病毒能作诱导剂病毒能作诱导剂?灭活灭活使病毒的感染活性、增使病毒的感染活性、增殖能力丧失但不破坏病毒的殖能力丧失但不破坏病毒的抗原结构。抗原结构。第七张,PPT共四十一页,创作于2022年6月想一想想一想1动动物物细细胞融合完成的胞融合完成的标标志是什么?志是什么?【提示提示】细细胞核融合。胞核融合。第八张,PPT共四十一页,创作于2022年6月1.31.3动物动物细胞融合技术的意义和应用细胞融合技术的意义和应用第九张,PPT共四十一页,创作于2022年6月比比较项目目细胞融合胞融合的原理的原理细胞融合的胞融合的方法方法诱导手段手段用途用途植物体植物体细胞胞杂交交细胞膜的胞膜的流流动性性纤
5、维素素酶、果胶果胶酶去除去除细胞壁后胞壁后诱导原生原生质体体融合融合离心、离心、电刺刺激、振激、振动、聚乙二醇聚乙二醇克服克服远源源杂交不交不亲和,和,获得得杂种植株种植株动物物细胞融合胞融合细胞膜的胞膜的流流动性性用用胰蛋白胰蛋白酶使使细胞分散胞分散后后诱导细胞胞融合融合除除应用植物用植物细胞胞杂交手交手段外,段外,还有有灭活病毒活病毒获得得杂种种细胞、胞、制制备单克隆抗克隆抗体体1.4 1.4 比较动、植物细胞杂交技术比较动、植物细胞杂交技术第十张,PPT共四十一页,创作于2022年6月【例例1】能使动物细胞融合的特有的诱导因子是能使动物细胞融合的特有的诱导因子是()A.离心离心 B.灭活
6、的病毒灭活的病毒 C.电刺激电刺激 D.振动振动【例例2】融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点(融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点()A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息具有原来两个或多个细胞的遗传信息 B.B.能无限增殖能无限增殖 C.可形成新个体可形成新个体 D.培养过程会贴壁培养过程会贴壁【例例3】动物细胞融合的作用中最重要的是(动物细胞融合的作用中最重要的是()A.克服远源杂交不亲和克服远源杂交不亲和 B.制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新物种培育新物种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞 BBA第十一张,PPT共四十一页,创作于2022年6月互互动动探究探究(1)本本题题中中细细胞胞融
7、融合合手手段段不不同同于于植植物物体体细细胞胞杂杂交交的的是是什么?什么?(2)本本题题中中培培养养液液中中融融合合处处理理后后的的细细胞胞类类型型最最多多有有几种?分几种?分别别是什么是什么细细胞?胞?提示提示】(1)动物细胞融合的手段与植物体细胞杂交的区别是前动物细胞融合的手段与植物体细胞杂交的区别是前者通常采用灭活的病毒作为诱导剂。者通常采用灭活的病毒作为诱导剂。(2)细胞类型通常有细胞类型通常有5种,即鼠种,即鼠鼠、人鼠、人人、人人、人鼠、人、鼠鼠、人、鼠单独的细胞。单独的细胞。第十二张,PPT共四十一页,创作于2022年6月【易易误误警警示示】(1)常常用用的的病病毒毒诱诱导导剂剂有
8、有仙仙台台病病毒毒、新城新城鸡鸡瘟病毒、疱疹病毒等,其中仙台病毒最常用。瘟病毒、疱疹病毒等,其中仙台病毒最常用。(2)用做用做诱导剂诱导剂的病毒必的病毒必须须事先事先灭灭活,使病毒的感活,使病毒的感染活性、增殖能力染活性、增殖能力丧丧失但不破坏病毒的抗原失但不破坏病毒的抗原结结构。构。第十三张,PPT共四十一页,创作于2022年6月强调:强调:效应效应B淋巴细胞是能淋巴细胞是能够产生抗体的够产生抗体的B淋巴细胞,淋巴细胞,下文将其简称为下文将其简称为B淋巴细胞淋巴细胞抗体:能够与抗原发生特异抗体:能够与抗原发生特异性结合的性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆细胞
9、浆细胞(即效应(即效应B细胞)。细胞)。温故知新二、单克隆抗体二、单克隆抗体B B B B淋巴细胞淋巴细胞效应效应B B B B淋巴淋巴淋巴淋巴细胞细胞细胞细胞记忆记忆记忆记忆B B B B淋巴淋巴淋巴淋巴细胞细胞细胞细胞分化分化分化分化第十四张,PPT共四十一页,创作于2022年6月抗体的传统生产方法抗体的传统生产方法抗原抗原 反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点:该法制备抗体的缺点:产量低、纯度低,且抗体的产量低、纯度低,且抗体的特异性差、灵敏度低。特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢?如何解决这个问题呢?单克隆抗体!单克隆抗体!第十五张
10、,PPT共四十一页,创作于2022年6月提示提示1 1:对:对B B细胞进行细胞培养可行吗?细胞进行细胞培养可行吗?提示提示2 2:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的?:我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的?问题:问题:如何大量生产单克隆抗体?请尝试设计一个如何大量生产单克隆抗体?请尝试设计一个方案。方案。2.2单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备第十六张,PPT共四十一页,创作于2022年6月一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案:设计方案:动物细胞融合技术动物细胞
11、融合技术单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异性抗体,既能产生特异性抗体,又又能大量增殖的细胞能大量增殖的细胞19751975年英国科学家年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验第十七张,PPT共四十一页,创作于2022年6月为什么给小鼠注射特定的抗为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白?原蛋白?会有几种融合方式?会有几种融合方式?杂交瘤细胞是如何筛选出来杂交瘤细胞是如何筛选出来的?有何特点?的?有何特点?是否所有的杂交瘤细胞都能产是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体?生专一性抗体?如何大规模进行培养得到如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体?大量的单克隆抗体?第十八张,PPT共四十一页,创
12、作于2022年6月BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 (B B、瘤)、瘤)(一选)(一选)选择选择性培养基性培养基:只:只有有杂交瘤细杂交瘤细胞胞才能存活才能存活获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的B B细胞细胞(二选):选(二选):选能产生所需能产生所需专专一抗体的杂交一抗体的杂交瘤细胞瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点:杂交瘤细胞特点:既能产生特异性抗既能产生特异性抗体,又能大量增殖。体,又能大量增殖。第十九张,PPT共四十一页,创作于2022年6月想一想想一想2什什么么是是单单克克隆隆抗抗体体?鼠鼠的的单单克克隆隆
13、抗抗体体能能否否用于人体疾病的治用于人体疾病的治疗疗?为为什么?什么?【提示提示】单单克隆抗体是由克隆抗体是由单单一一杂杂交瘤交瘤细细胞增胞增殖殖产产生的生的化学性质单一、特异性强化学性质单一、特异性强的抗体。不能。的抗体。不能。因因为为鼠的鼠的B淋巴淋巴细细胞所胞所产产生的抗体与人体生的抗体与人体B淋巴淋巴细细胞胞产产生的抗体是不同的。生的抗体是不同的。第二十张,PPT共四十一页,创作于2022年6月单抗制备过程分哪几步?单抗制备过程分哪几步?请用箭头把以下代表单克隆抗体制备请用箭头把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来。顺序是?过程步骤的图解的字母按正确顺序连接起来
14、。顺序是?第二十一张,PPT共四十一页,创作于2022年6月(2012北京四中高二质检北京四中高二质检)1975年科学家首次利用年科学家首次利用B淋巴细胞杂淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体。请根据下图回答问题:交瘤技术制备出单克隆抗体。请根据下图回答问题:(1)病原体注入小鼠体内后,要经过病原体注入小鼠体内后,要经过_细胞处理后形成抗原细胞处理后形成抗原MHC复复合体,才能被免疫细胞识别。合体,才能被免疫细胞识别。(2)制备单克隆抗体所用的制备单克隆抗体所用的B淋巴细胞一般淋巴细胞一般从脾中采集,然后以从脾中采集,然后以_作诱导作诱导剂,使剂,使B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合。通过筛选和克隆培养
15、,淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合。通过筛选和克隆培养,获得的杂交瘤细胞具获得的杂交瘤细胞具_的特点。的特点。(3)单克隆抗体的特点是单克隆抗体的特点是_根据上图写出应用杂交根据上图写出应用杂交瘤技术获得单克隆抗体的两种主要方法瘤技术获得单克隆抗体的两种主要方法_吞噬吞噬(或巨噬或巨噬)灭活的仙台病毒或聚乙二醇灭活的仙台病毒或聚乙二醇既能产生特异性抗体,又能无限增殖既能产生特异性抗体,又能无限增殖特异性强,纯度高特异性强,纯度高(或:专一性强、灵敏度高或:专一性强、灵敏度高)体外培养法和动物体内培养法体外培养法和动物体内培养法第二十二张,PPT共四十一页,创作于2022年6月变式训练变式训练(2012
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