生物选修一专题三课题一菊花的组织培养 (2).ppt

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1、生物选修一专题三课题一菊花的组织培养课件现在学习的是第1页，共44页学习目标学习目标知识与技能：知识与技能：1、熟悉植物组织培养的基本过程,了解影响植物组织培养的各种因素2、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化3、归纳MS培养基的配制方法，并设计表格比较微生物培养基与MS培养基的配方的异同。现在学习的是第2页，共44页学习目标学习目标过程与方法：过程与方法：掌握培养基制备、外植体消毒、接种、培养、移栽以及栽培等基本操作技术。情感、态度与价值观情感、态度与价值观：1、通过联系农业生产实际，培养学生活学活用，理论联系实际的能力。2、通过阅读植物组织培养技术的发展史，课下查阅植物组织培养

2、技术在生产实践中应用的资料，关注学生科学态度的教育，拓展学生视野，感受科学技术在生产实践中的重要价值。现在学习的是第3页，共44页一、导入一、导入 科学研究表明，当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。那么是如何进行植物组织培养的呢?现在学习的是第4页，共44页二、基础知识二、基础知识1 1、植物的组织培养、植物的组织培养（1 1）细胞的分化）细胞的分化概念：概念：在在个体发育个体发育中，中，相同细胞相同细胞的后代在形的后代在形态、结构、生理功能上发生态、结构、生理功能上发生稳定性差异稳定性

3、差异的过程的过程 .过程：过程：如：受精卵增殖、生长、分化形成组织、如：受精卵增殖、生长、分化形成组织、器官、系统器官、系统.现在学习的是第5页，共44页特点：特点：B.B.稳定性：稳定性：C.C.全能性：全能性：A.A.持久性：持久性：是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中生命过程中,在在胚胎期胚胎期达到最大限度达到最大限度.细胞分化是稳定的，一般是不可逆转的细胞分化是稳定的，一般是不可逆转的.已分化的细胞，仍具有发育的潜能已分化的细胞，仍具有发育的潜能.现在学习的是第6页，共44页原因：原因：基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达基因在

4、特定的时间和空间条件下的选择性表达基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果的结果的结果的结果.结果：结果：形成不同的细胞和组织形成不同的细胞和组织（2 2）细胞的全能性）细胞的全能性定义：定义：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性潜能的特性.原理：原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必

5、需的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因部基因部基因部基因.现在学习的是第7页，共44页高度特化的高度特化的动物动物细胞，从整个细胞来说，全能性受细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质为细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质.已分化的已分化的植物植物细胞，仍具有全能性细胞，仍具有全能性.实例实例受精卵受精卵 生殖细胞生殖细胞 体细胞体细胞全能性的比较全能性的比较:现在学习的是第8页，共44页现在学习的是第9页，共44

6、页（3 3）植物组织培养）植物组织培养细胞离体细胞离体必要条件：必要条件：一定的营养物质、激素和其他外界一定的营养物质、激素和其他外界条件条件原理原理:细胞的全能性细胞的全能性相关概念相关概念:在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞和原生质体，在人工培养基上，离体培养植物的器官、组织、细胞和原生质体，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。现在学习的是第10页，共44页B.B.脱分化：脱分化：由由高度分化高度分化的植物器官、组织或细胞产的植物器官、组织或细胞产生生愈伤组织愈伤组织的过程，又称去分化。的过程，又称去分化。C.C.再分化：再分化：

7、脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化新分化根或芽根或芽等器官的过程等器官的过程D.D.愈伤组织愈伤组织:细胞排列疏松而无规则细胞排列疏松而无规则,是是高度液泡化高度液泡化的、成无定形状态的的、成无定形状态的薄壁细胞薄壁细胞.A.A.外植体：外植体：从从活植物体活植物体上切下进行培养的那部上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官分细胞、组织或器官.现在学习的是第11页，共44页人参的愈伤组织人参的愈伤组织人参的愈伤组织人参的愈伤组织现在学习的是第12页，共44页菠萝的愈伤组织菠萝的愈伤组织现在学习的是第13页，共44页现在学习的是第14页，共44页现在学习的是

8、第15页，共44页2 2、影响植物组织培养的因素、影响植物组织培养的因素（1 1）植物材料的选择）植物材料的选择烟草和胡萝卜的组织培养较为容易烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难枸杞愈伤组织的芽诱导比较难同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果实验结果菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝新萌生的侧枝现在学习的是第16页，共44页现在学习的是第17页，共44页（2 2）离体的植物组织和细胞对营养、环境等条件的）离体的植物组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置不同

9、的培养基要求相对特殊，需配置不同的培养基MSMS培养基主要成分包括：培养基主要成分包括：A A、大量元素大量元素:N:N、P P、S S、K K、CaCa、MgMg等等B B、微量元素微量元素:B:B、MnMn、CuCu、ZnZn、FeFe、MoMo、I I、CoCo等等C C、有机物有机物、植物激素植物激素现在学习的是第18页，共44页MS固体培养基成分及比例固体培养基成分及比例现在学习的是第19页，共44页讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2 2中微中微中微中微生物培养基的配方相比，生物培养基的配方相比，生物培养基的配方相比，生物培养基的配

10、方相比，MSMS培养基的配方有哪些明显的培养基的配方有哪些明显的培养基的配方有哪些明显的培养基的配方有哪些明显的不同？不同？不同？不同？答：答：微量元素和大量元素提供微量元素和大量元素提供微量元素和大量元素提供微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无植物细胞生活所必需的无机盐；机盐；蔗糖蔗糖提供碳源，同时能够维持培养基的渗透压；提供碳源，同时能够维持培养基的渗透压；提供碳源，同时能够维持培养基的渗透压；提供碳源，同时能够维持培养基的渗透压；甘甘氨酸、维生素氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。正常代谢

11、途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基微生物培养基微生物培养基微生物培养基以以以以有机营养有机营养有机营养有机营养为主。与微生物的培养不同，为主。与微生物的培养不同，为主。与微生物的培养不同，为主。与微生物的培养不同，MSMSMSMS培养基培养基培养基培养基则需提供则需提供大量无机营养大量无机营养大量无机营养大量无机营养，无机盐混合物包括植物，无机盐混合物包括植物，无机盐混合物包括植物，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。生长必须的大量元素和微量元素两大类。生长必须的大量元素和微量元素两大类。生长必须的大量元素和微量元素两大类。现在学习的是第20页，共44页常

12、用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素类：生长素类：2 2，4 4二氯苯氧乙酸（二氯苯氧乙酸（二氯苯氧乙酸（二氯苯氧乙酸（2 2，4 4 4 4D D）、吲哚乙）、吲哚乙酸（酸（IAAIAA）、萘乙酸（）、萘乙酸（NAANAA）、吲哚丁酸）、吲哚丁酸（IBAIBA）细胞分裂素类：细胞分裂素类：激动素（激动素（KTKT）、）、6 6苄基嘌呤（苄基嘌呤（6 6BABA）、玉米素（）、玉米素（）、玉米素（）、玉米素（ZTZT）赤霉素类：赤霉素类：赤霉酸（赤霉酸（GA3

13、GA3GA3GA3）（3 3）植物激素的影响）植物激素的影响现在学习的是第21页，共44页生长素和细胞分裂素作用生长素和细胞分裂素作用植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。用呈现加强的趋势。用呈现加强的趋

14、势。用呈现加强的趋势。使用顺序使用顺序实验结果实验结果先使用生长素，后使用细先使用生长素，后使用细胞分裂素胞分裂素有利于细胞分裂，但不利有利于细胞分裂，但不利分化分化先使用细胞分裂素后使用先使用细胞分裂素后使用生长素生长素细胞既分裂也分化细胞既分裂也分化同时使用同时使用分化频率高分化频率高现在学习的是第22页，共44页生长素生长素细胞分裂素：细胞分裂素：有利于有利于有利于有利于根根的分化的分化的分化的分化生长素生长素细胞分裂素：细胞分裂素：生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素 生长素生长素生长素生长素再分化再分化植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养植物细胞培养不需要光不需要光不需要光不需要光?需要

15、光需要光需要光需要光现在学习的是第24页，共44页三、实验操作三、实验操作（一）制备（一）制备MSMS固体培养基固体培养基MSMS培养基包括培养基包括2020多种营养成分，实验室一般使多种营养成分，实验室一般使用用4 4。C C保存配制好的培养基母液来制备保存配制好的培养基母液来制备.1 1、配置各种母液、配置各种母液现在学习的是第25页，共44页无机物中大量元素浓缩无机物中大量元素浓缩1010倍，微量元素浓缩倍，微量元素浓缩100100倍，常温保存倍，常温保存.激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按按1mg/ml1mg/ml的质量浓度单独配制成

16、母液的质量浓度单独配制成母液.用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量倍数，计算用量.现在学习的是第26页，共44页2 2、配置培养基、配置培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml50ml或或100ml.100ml.配制培养液配制培养液 调调PHPH培养基的分装培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素添加植物激素.现在学习的是第27页，共44页3 3、灭菌、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭

17、菌灭菌.1 1、选材选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝.（二）外植体消毒（二）外植体消毒2 2、消毒消毒流水冲洗流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗洗，刷洗后在流水下冲洗20min20min左右左右.现在学习的是第28页，共44页 酒精处理酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为分数为7070的酒精中摇动的酒精中摇动2 23 3次次，持续，持续6 67s7s，立，立即将外植体取出，在无菌水中清洗即将外植体取出，在无菌水中清洗.

18、消毒液处理消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为质量分数为0.10.1的的氯化汞氯化汞溶液中溶液中1 12min2min，取出后，取出后在无菌水中至少清洗在无菌水中至少清洗3 3次，漂净次，漂净消毒液消毒液.现在学习的是第29页，共44页（三）接种（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用是至关重要的。用7070的酒精喷雾的酒精喷雾使空气消毒，使空气消毒，酒酒精或新洁尔灭精或新洁尔灭搽洗工作台并用搽洗工作台并用紫外线紫外线照射照射2020分钟分钟1

19、1、接种室消毒、接种室消毒2 2、无菌操作要求、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3 3、材料的切取和接种、材料的切取和接种现在学习的是第30页，共44页现在学习的是第31页，共44页4 4、接种注意事项、接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为7575的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，的酒

20、精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种冷却后再接种冷却后再接种冷却后再接种.外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3 34 4块，菊的茎或叶块，菊的茎或叶6 6 6 68 8块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和块，也不要太

21、少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件光照条件光照条件光照条件.插入时应注意方向，插入时应注意方向，不要倒插不要倒插不要倒插不要倒插。茎段、茎尖基部茎段、茎尖基部茎段、茎尖基部茎段、茎尖基部插入插入插入插入培养基利于吸收水分和养分培养基利于吸收水分和养分培养基利于吸收水分和养分培养基利于吸收水分和养分.现在学习的是第32页，共44页思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥

22、形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。染。现在学习的是第33页，共44页（四）培养（四）培养1 1、愈伤组织的培养、愈伤组织的培养 从接种外植体到出现愈伤组织需经过从接种外植体到出现愈伤组织需经过2 2周周时间。时间。2 2周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织

23、长的更快。伤组织长的更快。2 2周后，培养基成分接近耗尽，周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行继代培养必须更换培养基，进行继代培养.现在学习的是第34页，共44页 继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养

24、一代为养基上。愈伤组织的继代培养一代为养基上。愈伤组织的继代培养一代为养基上。愈伤组织的继代培养一代为20d20d20d20d。如果延长时间，。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为1 1 1 11.5cm1.5cm1.5cm1.5cm时，就时，就时，就时，就可以进行可以进行可以进行可以进行试管苗试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养培养，否则还需进行第二代继代培养培养，否则还需进行第二代继代培养培养，否则还需进行第二代继代培养.2 2、愈伤组织的继代培养、愈

25、伤组织的继代培养 在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让在愈伤组织继代培养期间，将恒温箱的门打开，让愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色愈伤组织见光，愈伤组织见光后颜色可以转为绿色.现在学习的是第35页，共44页3 3 3 3、试管苗的培养、试管苗的培养、试管苗的培养、试管苗的培养当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的管苗的管苗的管苗的见光培养见光培养见光培养见光培养.（五）移栽（五）移栽（五）移栽（五）移栽移栽生根的菊花

26、试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日试管苗在培养间生长几日试管苗在培养间生长几日试管苗在培养间生长几日.1 1 1 1、打开封口膜、打开封口膜、打开封口膜、打开封口膜2 2 2 2、清洗转移、清洗转移、清洗转移、清洗转移用流水清洗根部的培养基，用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或将幼苗移植到消过毒的蛭石或将幼苗移植到消过毒的蛭石或将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下珍珠岩等环境下珍珠岩等环境下珍珠岩

27、等环境下生活一段时间生活一段时间生活一段时间生活一段时间.现在学习的是第36页，共44页（六）栽培（六）栽培3 3、移栽、移栽珍珠岩：珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培透性好，适合栽培.幼苗长壮后，移栽到土壤中幼苗长壮后，移栽到土壤中.幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花适时浇水、施肥，直至开花.现在学习的是第37页，共44页现在学习的是第38页，共44页四、课题延伸四、课题延伸1 1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进

28、行组织培养进行组织培养.2 2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季.现在学习的是第39页，共44页思考：思考：1.1.在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。的消毒、灭菌，并且要求无菌操作。植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同对培养条件的要求较高。用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生样适合于某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。而培养物一旦受到微生物

29、的污染，就会导致实验前长。而培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。现在学习的是第40页，共44页思考：思考：2.2.在选取菊花茎段是，为什么要选取生长旺在选取菊花茎段是，为什么要选取生长旺盛的嫩枝？盛的嫩枝？外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分件之一。生长旺盛的嫩枝生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。化和再分化。现在学习的是第41页，共44页课堂总结课堂总结菊花菊花组织组织培养培养基础知识基础知识实验操作实验操作植物体的组植物体的

30、组织培养织培养影响组织培养影响组织培养的因素的因素细胞分化细胞分化细胞全能性细胞全能性组织培养过程组织培养过程营养营养激素激素环境条件环境条件MS固体培养基制备固体培养基制备外植体消毒外植体消毒接种接种培养培养移栽移栽栽培栽培现在学习的是第42页，共44页1下列四个选项中，肯定没有采用植物组织培养下列四个选项中，肯定没有采用植物组织培养技术的一项是（技术的一项是（B ）A花药离体培养得到单倍体植株花药离体培养得到单倍体植株 B秋水仙素处理萌发的种子秋水仙素处理萌发的种子 或幼苗得到多倍体植株或幼苗得到多倍体植株 C基因工程培育的抗棉铃虫的棉花植株基因工程培育的抗棉铃虫的棉花植株 D细胞工程培育细胞工程培育“番茄马铃薯番茄马铃薯”杂种植株杂种植株课堂练习课堂练习现在学习的是第43页，共44页2 2在植物组织培养中，在植物组织培养中，切取胡萝卜的外植体时一般选择（切取胡萝卜的外植体时一般选择（C C ）A A具有木质部的部分具有木质部的部分 B B具有韧皮部的部分具有韧皮部的部分 C C具有形成层的部分具有形成层的部分 D D具有髓的部分具有髓的部分现在学习的是第44页，共44页