第12章甾体激素类药物的分析课件.ppt

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1、第12章甾体激素类药物的分析第1页，此课件共123页哦基本结构：环戊烷骈多氢菲基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819第2页，此课件共123页哦l所以甾体激素类药物的母核叫环戊烷骈多氢菲。l环上双键的表示方法：环上双键的表示方法：l如果在母核上有双键的话，用“”表示，l并且，双键的位置写在的右上角。双键位置如：l4位和5位间有双键时，用“4”表示。双键在5位和6位之间时，用“5”表示。如果5位和10位间有双键时，仅用“5”表示是不行的，为了和上面的情况相区别，用“5(10)”表示。当在环上有多个双键时，分别把各个双键的位置写上，中间用“，”隔开

2、。如1,4环上取代基构型的表示方法：第3页，此课件共123页哦l在母核上连接的取代基或原子，在母核上连接的取代基或原子，构构型和型和 构型之分。构型之分。l构型：l与母核连接的取代基或原子，指向环平面的前方时，这样的取代基为构型。用实线表示“”l构型：l与母核连接的取代基或原子，指向环平面的前方时，这样的取代基为构型。用虚线表示“”第4页，此课件共123页哦l一、结构特点l天然和人工合成品的甾体激素，均具有环戊烷骈多氢菲母核。l结构特点：A环，多为脂环，且C4/C5间有双键，并与C3酮基共轭，称为，-不饱和酮，标记为4-3-酮；少数为苯环；C3，可能有酮基或羟基；C10、C13，多数为角甲基，

3、少数C10无角甲基；C11，可能有酮基或羟基；C17，可能有羟基、酮基、甲酮基、-醇酮基、甲基、乙炔基等；人工合成的甾体激素，有些在C6或C9上引入卤素，C16上引入甲基、羟基，以及具有C1/C2双键等；有些取代基是型（用虚线表示），有些是型（用实线表示）。第5页，此课件共123页哦分类：分类：甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素第6页，此课件共123页哦肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素皮质酮皮质酮第7页，此课件共123页哦肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素氢化可的松氢化可的松第8页，此课件共123页哦肾上腺皮质激素

4、肾上腺皮质激素醋酸地塞米松醋酸地塞米松第9页，此课件共123页哦泼尼松在可的松结构的基础上1，2位间引入一个双键 第10页，此课件共123页哦雄性激素雄性激素丙酸睾酮丙酸睾酮第11页，此课件共123页哦蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙第12页，此课件共123页哦孕激素孕激素黄体酮黄体酮第13页，此课件共123页哦雌激素雌激素炔雌醇炔雌醇第14页，此课件共123页哦一、结构与性质一、结构与性质 1.肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素主要活性基团性 质4 3 酮UV、与羰基试剂反应 C17 醇酮基还 原 性第15页，此课件共123页哦2.雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基

5、团性 质4 3 酮UV、与羰基试剂反应 C17 羟基可成酯第16页，此课件共123页哦3.孕激素孕激素主要活性基团性 质4 3 酮UV、与羰基试剂反应C17 甲酮基与亚硝基铁氰化纳反应C17 乙炔基与AgNO3反应第17页，此课件共123页哦4.雌激素雌激素主要活性基团性 质A环为3OH 苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17 乙炔基与AgNO3反应C17 羟基可成酯第18页，此课件共123页哦二、鉴别试验二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应（一）与强酸的呈色反应甾体激素甾体激素类药物类药物呈色呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl（母核）（母核）第19页，此课件共123页哦与硫酸显色反应与

6、硫酸显色反应 显显 色色 荧光荧光 加水稀释加水稀释泼尼松龙泼尼松龙 深红深红 絮状絮状灰灰泼尼松泼尼松 橙橙 黄黄蓝绿蓝绿炔雌醚炔雌醚 橙红橙红 黄绿黄绿 红色红色 炔雌醇炔雌醇 橙红橙红 黄绿黄绿 絮状絮状玫红玫红醋酸可的松醋酸可的松 黄或微黄或微 褪色并澄褪色并澄 带橙带橙 清清第20页，此课件共123页哦(二二)官能团的反应官能团的反应肾上腺肾上腺皮质激皮质激素药物素药物呈色呈色四氮唑盐四氮唑盐OH1 C17 醇酮基醇酮基还原性还原性A.呈色反应呈色反应第21页，此课件共123页哦肾上肾上腺皮腺皮质激质激素药素药物物Cu2O橙红色橙红色碱性碱性酒石酸铜酒石酸铜B.沉淀反应沉淀反应Ag黑

7、色黑色氨制硝酸银氨制硝酸银第22页，此课件共123页哦甾酮类激甾酮类激素药物素药物呈色呈色羰基试剂羰基试剂2.C3酮基和酮基和C20酮基酮基常用的羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼第23页，此课件共123页哦异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）睾酮睾酮第24页，此课件共123页哦黄体酮黄体酮异烟双腙（黄色）异烟双腙（黄色）第25页，此课件共123页哦具有甲酮具有甲酮基或活泼基或活泼亚甲基的亚甲基的甾体激素甾体激素类药物类药物呈色呈色亚硝基铁氰化纳亚硝基铁氰化纳间二硝基酚间二硝基酚芳香醛芳香醛3.甲酮基甲酮基第26页，此课件共123页哦黄体酮黄体酮

8、蓝紫色蓝紫色亚硝基铁亚硝基铁 氰化纳氰化纳其他甾体其他甾体淡橙色淡橙色不显色不显色第27页，此课件共123页哦黄体酮黄体酮第28页，此课件共123页哦蓝紫色蓝紫色第29页，此课件共123页哦有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯Cl4.有机卤素有机卤素茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl 呈色呈色 第30页，此课件共123页哦茜素氟蓝茜素氟蓝蓝紫色蓝紫色F-第31页，此课件共123页哦雌激素雌激素类药物类药物红色偶红色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸5.酚羟基酚羟基第32页，此课件共123页哦含炔基含炔基的甾体的甾体激素激素银盐沉淀银盐沉淀硝酸银硝酸银6.乙炔

9、基乙炔基第33页，此课件共123页哦炔雌醇炔雌醇白白第34页，此课件共123页哦KOH(三三)制备衍生物测定制备衍生物测定m.p.第35页，此课件共123页哦第36页，此课件共123页哦香（四）水解产物的反应（四）水解产物的反应第37页，此课件共123页哦特臭特臭第38页，此课件共123页哦-3-酮酮 240nm苯环苯环 280nm（五）（五）UV法法第39页，此课件共123页哦第40页，此课件共123页哦第41页，此课件共123页哦33003000cm-130002700cm-119001650cm-116501450cm-11000650cm-1（六）（六）IR法法37503300cm-1

10、第42页，此课件共123页哦醋酸可的松醋酸可的松结构特征：结构特征：43酮、酮、C17 OHC20 酮基、酮基、C11 酮基、醋酸酯酮基、醋酸酯第43页，此课件共123页哦1630cm-13420cm-亚甲基、角甲亚甲基、角甲基吸收带基吸收带1750cm-11232cm-11052cm-1第44页，此课件共123页哦结构特征：结构特征：43酮、酮、C17 OH C17乙炔基乙炔基炔诺酮炔诺酮第45页，此课件共123页哦1650cm-13300cm-3270cm-11615cm-1第46页，此课件共123页哦结构特征：酚羟基、结构特征：酚羟基、C17 OH C17 乙炔基乙炔基炔雌醇炔雌醇第47

11、页，此课件共123页哦1505cm-13505cm-3300cm-11590cm-13610cm-酚羟基酚羟基醇羟基醇羟基1615cm-1苯环的骨苯环的骨架振动架振动第48页，此课件共123页哦（七）（七）TLC法法 主要用于甾体激素类药物主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别制剂的鉴别 方法：对照品法方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点要求供试品溶液所显主斑点的的颜色颜色和和位置位置与对照品溶液的主与对照品溶液的主斑点相同。斑点相同。第49页，此课件共123页哦炔诺酮炔诺酮TLC图图第50页，此课件共123页哦（八）（八）HPLC法法 主要用于甾体激素类药物制主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（

12、如：醋酸曲安奈德软剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）膏、醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的色谱图中，供试品峰的tR与对照与对照品峰的品峰的tR一致。一致。第51页，此课件共123页哦三、三、杂质检查杂质检查（一）其他甾体（一）其他甾体1.定义定义 2.与标示药物结构不同的甾与标示药物结构不同的甾体化合物都称为体化合物都称为“其他甾体其他甾体”第52页，此课件共123页哦Li/NH3 C2H5OH弱酸弱酸雌二醇雌二醇3甲醚甲醚苯丙酸诺龙的苯丙酸诺龙的合成路线合成路线III第53页，此课件共123页哦强酸

13、强酸苯丙酰氯苯丙酰氯HClIII第54页，此课件共123页哦3.特点特点4.（1）可能存在多个甾体杂质）可能存在多个甾体杂质5.（2）结构类似）结构类似2.来源来源 原料、中间体、异构体、降原料、中间体、异构体、降解产物解产物第55页，此课件共123页哦4.方法（具有一定分离能力）方法（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）法（类似高低浓度对比法）第56页，此课件共123页哦（1）TLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法）判定方法：判定方法：v 规定杂质斑点数目规定杂质斑点数目v 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色第57页，此课件共1

14、23页哦醋酸氟轻松醋酸氟轻松 检查检查 其他甾其他甾体体 取本品加氯仿取本品加氯仿-甲醇（甲醇（9 ：1）制成）制成3.0mg/ml作为供试液，精密量取适量，作为供试液，精密量取适量，加氯仿加氯仿-甲醇（甲醇（9 ：1）稀释成）稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取作为对照液；照薄层色谱法，各取5l，分别点于同一硅胶分别点于同一硅胶G板上，以氯仿板上，以氯仿-甲醇甲醇（97 :3）为展开剂，展开后晾干，在）为展开剂，展开后晾干，在105干燥干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试唑蓝试第58页，此课件共123页哦液，立即检视，供试品溶液如显杂质液，立即检视

15、，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于斑点，不得多于2个，其颜色与对照个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。液的主斑点比较，不得更深。12第59页，此课件共123页哦特点：特点：（1）简便易行，不需特殊的仪器；）简便易行，不需特殊的仪器；（2）不需对照品；）不需对照品；（3）只能控制单个杂质的限量；）只能控制单个杂质的限量；（4）要求杂质与主成分的显色灵）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。敏度接近。第60页，此课件共123页哦（2）HPLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法）判定方法：判定方法：v 规定杂质峰数目规定杂质峰数目v 规定杂质峰面积规定杂质峰面积第61页，此课件共123页哦 取

16、本品适量，精密称定，以无水乙取本品适量，精密称定，以无水乙醇为溶剂，配制成每醇为溶剂，配制成每1ml含含2mg的溶液的溶液（1）与每）与每1ml含含0.04mg的溶液（的溶液（2），用），用含量测定项下的方法和溶液含量测定项下的方法和溶液(0.16mg/ml)，取，取10l注入液相色谱仪，调整仪器灵敏注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满量程。度，使主成分峰高度达记录仪的满量程。再分别取溶液（再分别取溶液（1）醋酸甲地孕酮醋酸甲地孕酮 检查检查 其他甾体其他甾体第62页，此课件共123页哦 和溶液（和溶液（2）各）各10l，进样。记录至主，进样。记录至主成分峰保留时间的成分

17、峰保留时间的2倍。溶液（倍。溶液（1）显）显示的杂质峰数不得超过示的杂质峰数不得超过4个，各杂质峰个，各杂质峰面积及其总和分别不得大于溶液（面积及其总和分别不得大于溶液（2）主峰面积的主峰面积的1/2和和3/4。供试溶液：溶液（供试溶液：溶液（1）2mg/ml对照溶液：溶液（对照溶液：溶液（2）0.04mg/ml第63页，此课件共123页哦特点：特点：（1）需特殊的仪器；）需特殊的仪器；（2）不需对照品；）不需对照品；（3）可以控制杂质的总量；）可以控制杂质的总量；第64页，此课件共123页哦（二）游离磷酸（二）游离磷酸地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠

18、倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法对照品法第65页，此课件共123页哦原理：原理：方法：方法：第66页，此课件共123页哦检查检查 游离磷酸游离磷酸地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠 精密称取本品精密称取本品20mg，置，置25ml量瓶量瓶中，加水中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫溶解，精密加钼酸铵硫酸试液酸试液2.5ml与与1-氨基氨基-2-萘酚萘酚-4-磺酸溶磺酸溶液液1ml，加水至刻度，摇匀，在，加水至刻度，摇匀，在20放放置置3050分钟，照分光光度法，在分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液处测定吸收度，与对照液4.0ml同法同法处理的吸收度比较，不得

19、更大。处理的吸收度比较，不得更大。第67页，此课件共123页哦（对照液对照液 0.0035%KH2PO4）第68页，此课件共123页哦（三）甲醇和丙酮（三）甲醇和丙酮（灵敏度法）（灵敏度法）甲醇甲醇 不得出峰不得出峰 检测限检测限=3.1ng丙酮丙酮 5.0%内标法内标法+校正因子校正因子GC法法第69页，此课件共123页哦地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠检查检查 甲醇和丙酮甲醇和丙酮 精密称取本品精密称取本品0.16g，置，置10ml量瓶量瓶中，精密加内标溶液中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10l(7.9mg)与丙酮

20、与丙酮100l(79mg)置置100ml量瓶中，精密加内标溶液量瓶中，精密加内标溶液20ml，加水至刻度，作为对照液。照气相色谱加水至刻度，作为对照液。照气相色谱法测定，含丙酮不得过法测定，含丙酮不得过5.0%，并不得，并不得出现甲醇峰。出现甲醇峰。第70页，此课件共123页哦炔雌醇炔雌醇第71页，此课件共123页哦（四）雌酮（四）雌酮原理原理 Zimmermann反应反应碱性碱性KOH乙醇乙醇高纯度第72页，此课件共123页哦硒硒四、四、来源来源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2)脱氢脱氢剧毒原理原理方法方法第73页，此课件共123页哦l醋酸氟轻松醋酸氟轻松 检查检查

21、硒硒 取本品取本品50mg，照氧瓶燃烧法进行，照氧瓶燃烧法进行破坏后，将吸收液转移至破坏后，将吸收液转移至100ml容量容量瓶中，用水瓶中，用水15ml冲洗燃烧瓶及铂丝，冲洗燃烧瓶及铂丝，并入吸收液中，用水加至刻度。取并入吸收液中，用水加至刻度。取硒对照液（硒对照液（0.05ug/ml）和上述供试）和上述供试品溶液分别用氨试液调节品溶液分别用氨试液调节pH值至值至2.0 0.2后，转移至分液漏斗中，用水后，转移至分液漏斗中，用水第74页，此课件共123页哦 少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中，使成斗中，使成60ml，各加盐酸羟胺溶液，各加盐酸羟胺溶液（12）1

22、ml，摇匀后，立即精密加，摇匀后，立即精密加二氨基奈试液二氨基奈试液5ml，摇匀，在室温下，摇匀，在室温下放置放置100分钟，精密加环己烷分钟，精密加环己烷5ml，强，强烈振摇烈振摇2，静置分层，取环己烷脱水后，静置分层，取环己烷脱水后，测测A378nm。规定规定 A供供A对。对。第75页，此课件共123页哦第76页，此课件共123页哦四、含量测定四、含量测定（一）（一）UV法法-3-酮酮 240nm（）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素 苯环苯环 280nm（）雌激素雌激素第77页，此课件共123页哦（二）反应分光光度法（二）反应分光光度法1

23、.适用于非分光光度活性药物适用于非分光光度活性药物2.使待测组分光谱位移，避免干扰使待测组分光谱位移，避免干扰3.增加测定灵敏度增加测定灵敏度4.增加选择性增加选择性弱、非分弱、非分光光度活光光度活性药物性药物强分光强分光光度活光度活性药物性药物化学反应化学反应第78页，此课件共123页哦 肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类C17-醇酮基醇酮基强还原性强还原性1.原理原理OH-还原还原四氮唑比色法四氮唑比色法第79页，此课件共123页哦OOH-分子重排分子重排第80页，此课件共123页哦三苯甲瓒三苯甲瓒深红深红氯化三苯四氮唑氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（红四氮唑（RT）第81页，此课件共12

24、3页哦蓝四氮唑蓝四氮唑（BT）第82页，此课件共123页哦双甲瓒（暗蓝）双甲瓒（暗蓝）第83页，此课件共123页哦2.方法方法ChP TTC（RT）BP TTC（RT）USP BT对照品法对照品法4045暗暗第84页，此课件共123页哦 醋酸泼尼松龙软膏醋酸泼尼松龙软膏 含量测定含量测定对照液对照液：精密称取醋酸泼尼松龙对照品：精密称取醋酸泼尼松龙对照品20mg，置，置100ml量瓶中，加无水乙醇振量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。供试液供试液：精密称取本品：精密称取本品4g（约相当于醋（约相当于醋酸泼尼松龙酸泼尼松龙20mg），置烧杯

25、中，加无水），置烧杯中，加无水乙醇约乙醇约30ml，置水浴上加热，充分搅拌，置水浴上加热，充分搅拌，使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰浴中冷却，使醋酸泼尼松龙溶解，再置冰浴中冷却，滤过，滤液置滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取量瓶中，同法提取第85页，此课件共123页哦三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀三次，滤液并入量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。释至刻度，摇匀，即得。测定法测定法：精密量取上述溶液各：精密量取上述溶液各1ml，分，分别置别置干燥具塞试管干燥具塞试管中，各精密加无水乙中，各精密加无水乙醇醇9ml与氯化三苯四氮唑试液与氯化三苯四氮唑试液2ml，摇匀，摇匀，再各精密加氢氧化四

26、甲基铵试液再各精密加氢氧化四甲基铵试液1ml，摇匀，在摇匀，在25暗处放置暗处放置4050分钟，照分钟，照分光光度法，在分光光度法，在485nm的波长处分别测的波长处分别测定吸收度，计算，即得。操作应避光。定吸收度，计算，即得。操作应避光。第86页，此课件共123页哦3.讨论讨论（1）基团对反应速度的影响基团对反应速度的影响C11=O C11OHC21OH C21-酯酯C16无论何种取代基无论何种取代基第87页，此课件共123页哦（2）溶剂、水分的影响溶剂、水分的影响含水量含水量5%含水含水10%A10%含水含水30%几无反应几无反应 无醛无水乙醇无醛无水乙醇醛醛 A 无水乙醇无水乙醇第88页

27、，此课件共123页哦（3）O2与光线的影响与光线的影响反应过程反应过程反应产物反应产物怕光怕光避光、快速避光、快速O2影响影响颜色强颜色强度和稳度和稳定性定性隔绝空气、隔绝空气、快速、充快速、充N2第89页，此课件共123页哦（4）碱的种类及加入顺序）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行条件下进行以以氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵的结果最佳的结果最佳加入顺序：加入顺序：第90页，此课件共123页哦（5）温度与时间温度与时间t甲瓒分解甲瓒分解%ChP 25 4045BP 30 1h第91页，此课件共123页哦4.特点：特点：缺点缺点 影响因素太多影响因素太多

28、 优点优点 测定结果能指示药品测定结果能指示药品 的稳定性（氧化及降的稳定性（氧化及降 解产物无此反应）解产物无此反应）第92页，此课件共123页哦肾上腺皮质激素、肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素C3酮基酮基1.原理原理HCl（缩合）（缩合）异烟肼比色法异烟肼比色法第93页，此课件共123页哦异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）第94页，此课件共123页哦2.方法方法暗暗45对照品法对照品法第95页，此课件共123页哦 醋酸地塞米松软膏醋酸地塞米松软膏 含量测定含量测定对照液：精密称取醋酸地塞米松对照品对照液：精密称取醋酸地塞米松对照品25mg，置，置100

29、ml量瓶中，加无水乙醇适量瓶中，加无水乙醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取取5ml，用无水乙醇稀释至，用无水乙醇稀释至50ml，摇匀。，摇匀。供试液：精密称取本品适量（约相当于供试液：精密称取本品适量（约相当于醋酸地塞米松醋酸地塞米松25mg），置烧杯中，加无），置烧杯中，加无水乙醇约水乙醇约25ml，置水浴中加热，搅拌，置水浴中加热，搅拌，使醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷却，使醋酸地塞米松溶解，再置冰浴中冷却，第96页，此课件共123页哦滤过，滤液置滤过，滤液置100ml量瓶中，同法提取三量瓶中，同法提取三次，滤液并入量瓶中，用无水乙醇稀释次，滤液并入

30、量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。至刻度，摇匀，即得。测定法：精密量取上述溶液各测定法：精密量取上述溶液各10ml，分，分别置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，别置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，残渣中加氯仿残渣中加氯仿10ml，振摇，使残渣溶解，振摇，使残渣溶解，各精密加各精密加0.1%异烟肼甲醇溶液异烟肼甲醇溶液10ml，摇，摇匀，置匀，置55暗处保温暗处保温45分钟，取出，放分钟，取出，放冷，用氯仿稀释至冷，用氯仿稀释至25ml。摇匀，在。摇匀，在415nm的波长处分别测定吸收度，计算即得。的波长处分别测定吸收度，计算即得。第97页，此课件共123页哦3.讨论讨论反应速度反应速度（1）

31、C3=O C17=O、C20=O C11=O 不反应不反应反应专属性反应专属性 C3酮基酮基第98页，此课件共123页哦（2）溶剂的选择）溶剂的选择异烟肼盐酸盐异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇甲醇、乙醇无水甲醇无水甲醇无水乙醇无水乙醇第99页，此课件共123页哦（3）水分、）水分、O2与光线的影响与光线的影响含水量含水量腙水解腙水解A%不挥发溶剂、不吸收水分时不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线无影响与光线无影响第100页，此课件共123页哦酸、异烟肼的量酸、异烟肼的量(3)盐酸盐酸:异烟肼异烟肼=2:1样品样品:异烟肼异烟肼=1:8 酸度酸度 异烟肼盐异烟肼盐酸度酸度 A温度温度(4)t 第101页，

32、此课件共123页哦1.1.原理原理max=465max=515雌激素雌激素Kober反应比色法反应比色法第102页，此课件共123页哦第103页，此课件共123页哦雌二醇雌二醇-3-甲醚甲醚max=465max=515第104页，此课件共123页哦铁酚试剂铁酚试剂(NH4)2Fe(SO4)2+H2SO4+H2O2+苯酚苯酚*铁盐的作用铁盐的作用 加快黄色产物的形成、转化加快黄色产物的形成、转化 加强红色产物的稳定性加强红色产物的稳定性*酚的作用酚的作用 加快红色产物的形成加快红色产物的形成 消除反应产生的荧光消除反应产生的荧光Iron-phenol Reagent第105页，此课件共123页哦

33、2.特点：特点：优点优点 较高的灵敏度较高的灵敏度 具有一定的选择性具有一定的选择性 缺点缺点 非化学计量反应非化学计量反应 反应应控制条件、反应应控制条件、注意平行原则注意平行原则第106页，此课件共123页哦（三）（三）HPLC法法USP、BP、JP均采用均采用RPHPLC（大多内标法）（大多内标法）特点特点 用样量少，灵敏度高，分离效用样量少，灵敏度高，分离效 果好，测定速度快果好，测定速度快（甾体激素类药物常含有结构相似的其（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）色法有干扰）第107页，此课件共123页哦1、熟悉

34、本类药物的分类，掌握其结构、熟悉本类药物的分类，掌握其结构 特征与分析方法的关系特征与分析方法的关系2、掌握红外光谱鉴别法及某些官能团、掌握红外光谱鉴别法及某些官能团 的呈色反应，了解其他鉴别方法的呈色反应，了解其他鉴别方法3、掌握本类药物中其他甾体的检查方、掌握本类药物中其他甾体的检查方 法，了解其他特殊杂质的检查法，了解其他特殊杂质的检查第十二章第十二章 复习内容复习内容第108页，此课件共123页哦4、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法 的原理、方法及测定条件。了解的原理、方法及测定条件。了解 UV法、法、Kober反应比色法及反应比色法及HPLC 法在其含量

35、测定中的应用法在其含量测定中的应用第109页，此课件共123页哦112甾体激素类药物的结构中能和甾体激素类药物的结构中能和 四氮唑盐发生显色反应的基团四氮唑盐发生显色反应的基团 A.酚羟基酚羟基 B.活泼次甲基活泼次甲基 C.甲酮基甲酮基 D.C17-醇酮基醇酮基 E.酮基酮基第110页，此课件共123页哦 用异烟肼比色法测定甾体激素药物用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是含量时，其溶液的环境是 A强酸性强酸性 B中性中性 C强碱性强碱性 D弱碱性弱碱性 E以上都不对以上都不对第111页，此课件共123页哦问题问题3135 A维生素维生素B1 B醋酸地塞米松醋酸地塞米松 C两者

36、皆是两者皆是 D两者皆不是两者皆不是 31.异烟肼比色法异烟肼比色法 32.硫色素反应硫色素反应 33.紫外分光光度法紫外分光光度法 34.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 35.绿奎宁（绿奎宁（Thaciaquin）反应）反应BACDD第112页，此课件共123页哦 可用于氢化可的松鉴别的试剂有可用于氢化可的松鉴别的试剂有 A氨制硝酸银氨制硝酸银 B异烟肼异烟肼 C红四氮唑红四氮唑 D硫酸硫酸 E重氮苯磺酸重氮苯磺酸第113页，此课件共123页哦75可用于甾体激体类药物的测定方可用于甾体激体类药物的测定方 法有法有 A高效液相色谱法高效液相色谱法 B四氮唑盐法四氮唑盐法 C紫外分光光度法紫外分光光度

37、法 D异烟肼比色法异烟肼比色法 EKober反应比色法反应比色法第114页，此课件共123页哦 能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰能与亚硝基铁氰化钠反应生成兰紫色的药物是紫色的药物是 A雌二醇雌二醇 B黄体酮黄体酮 C醋酸可的松醋酸可的松 D苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙 E以上都不对以上都不对第115页，此课件共123页哦98：74.各国药典对甾体激素类药物各国药典对甾体激素类药物 常用常用HPLC或或GC法测定其含法测定其含 量，主要原因是量，主要原因是A.它们没有特征紫外吸收，不能用它们没有特征紫外吸收，不能用 紫外分光光度法紫外分光光度法 B.不能用滴定分析法进行测定不能用滴定分析法进行测定 C.由于

38、由于“其它甾体其它甾体”的存在，色谱法的存在，色谱法 可消除它们的干扰可消除它们的干扰 D.色谱法比较简单，精密度好色谱法比较简单，精密度好 E.色谱法准确度优于滴定分析法色谱法准确度优于滴定分析法第116页，此课件共123页哦113异烟肼比色法测定甾体激素类异烟肼比色法测定甾体激素类 药物时，药物的呈色基团是药物时，药物的呈色基团是 A.酮基酮基 B.酚羟基酚羟基 C.活泼次甲基活泼次甲基 D.炔基炔基 E.甾体母核甾体母核第117页，此课件共123页哦99：90.四氮唑比色法可用于下列哪四氮唑比色法可用于下列哪 个药物的含量测定个药物的含量测定 A.可的松可的松 B.睾丸素睾丸素 C.雌二

39、醇雌二醇 D.炔雌醇炔雌醇 E.黄体酮黄体酮第118页，此课件共123页哦95：116120可适用的药物：可适用的药物：A.可的松可的松 B.雌二醇雌二醇 C.两者均可两者均可 D.两者均不可两者均不可 116亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法 117高效液相色谱法高效液相色谱法 118能与羰基试剂缩合能与羰基试剂缩合 119可用铁酚试剂比色法测定可用铁酚试剂比色法测定 120可用四氮唑比色法测定可用四氮唑比色法测定DCABA第119页，此课件共123页哦114Kober反应是反应是 A.雌性激素与硫酸乙醇共热呈色雌性激素与硫酸乙醇共热呈色 B.皮质激素与硫酸一乙醇共热呈色皮质激素与硫酸一乙醇共热呈

40、色 C.雌性激素与硫酸乙醇共热呈色，雌性激素与硫酸乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后加热颜色改变用水或稀硫酸稀释后加热颜色改变 D.维生素维生素A与无水三氯化锑的无醇氯与无水三氯化锑的无醇氯 仿溶液呈色仿溶液呈色 E.异丙嗪于酸性条件下与钯离子呈色异丙嗪于酸性条件下与钯离子呈色第120页，此课件共123页哦96：139.黄体酮在酸性溶液中可与下黄体酮在酸性溶液中可与下 列哪些试剂反应呈色列哪些试剂反应呈色 A.2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼 B.三氯化铁三氯化铁 C.硫酸苯肼硫酸苯肼 D.异烟肼异烟肼 E.四氮唑盐四氮唑盐 第121页，此课件共123页哦95：76.Kober反应及铁一酚试剂法反应及铁一酚试剂法 适用于哪一药物的含量测定适用于哪一药物的含量测定 A.黄体酮黄体酮 B.雌二醇雌二醇 C.甲基睾丸素甲基睾丸素 D.甲基炔诺酮甲基炔诺酮 E.氢化可的松氢化可的松第122页，此课件共123页哦 用四氮唑比色法测定皮质激素类用四氮唑比色法测定皮质激素类药物，是利用药物，是利用C17 醇酮基的何种性醇酮基的何种性质质 A氧化性氧化性 B还原性还原性 C可加成性可加成性 D酸性酸性 E碱性碱性第123页，此课件共123页哦