疟原虫血片制作及染色 (2).ppt

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1、疟原虫血片制作及染色现在学习的是第1页，共47页血膜制作血膜染色影响染色效果的因素主要内容现在学习的是第2页，共47页血膜制作（血膜分类）血膜制作（血膜分类）用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。厚血膜。厚血膜上的血细胞是重叠堆积在玻片上面，而薄血膜上的血细胞则要上的血细胞是重叠堆积在玻片上面，而薄血膜上的血细胞则要求平辅在玻片上面。求平辅在玻片上面。门诊或现场发热病人血片门诊或现场发热病人血片标本片标本片现在学习的是第3页，共47页厚血膜用血量约为4l5

2、l,涂制成直径0.8 1cm的厚血膜,由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在形态上仍可分辨，但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度的固缩。受影响较大的有大、裂殖体的形态。由于厚血膜与薄血膜相比血量大，须查范围小，节省时间，阳性检出率较高。厚血膜能查出疟原虫数是薄血膜的1525倍。所以，我们推荐疟疾诊断（门诊检验及现场普查）应以检查厚血膜为主。厚、薄血膜的优缺点及其适用范围厚、薄血膜的优缺点及其适用范围现在学习的是第4页，共47页薄血膜用血量约为1-1.5l，涂制成2cm宽2.5cm长面积的薄血膜。由于在制备过程中，血片通常经甲醇固定，使红细胞及其内疟原虫的形态保持完整，适用于对疟原虫虫种的鉴定。由

3、于用血量少，为保证检测的敏感性，常耗时较多，不适用于大规模调查。特别在医院的检验室，由于要求在短时间内作出诊断，因而极有可能出现漏诊。厚、薄血膜的优缺点及其适用范围厚、薄血膜的优缺点及其适用范围现在学习的是第5页，共47页 血膜制作（取血时间）血膜制作（取血时间）取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。现在学习的是第6页，共47页血膜制作（取血时间）血膜制作（取血时间）间日疟前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低，镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨破 红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。发热期

4、外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖 体；出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。发作后数小时，间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认，为诊断的有 利时机；发作36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次后，配子体出 现较多。现在学习的是第7页，共47页血膜制作（取血时间）血膜制作（取血时间）恶性疟较理想的取血时间是在发作后至 20h内取血，发作后2小时左右，此时环状体发育至最高峰，初发患者退热后常查不到原虫。末梢血血检到恶性疟原虫配子体，是在末梢血出现环状 体之后的7-10天。现在学习的是第8页，共47页血膜制作（工具准备）血膜制作（工具准备）一次性采血针、75%酒精、棉棒（球）,载玻

5、片，推片，记号笔或铅笔。现在学习的是第9页，共47页 血膜制作（取血操作）血膜制作（取血操作）取血方法取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头，采血部位一般人为耳垂，指头，通常在耳垂取血。先用通常在耳垂取血。先用75%酒精棉球消毒酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右手持消毒采血针食指紧捏耳垂上方，右手持消毒采血针（一人一针，避免血传疾病）迅速刺入耳（一人一针，避免血传疾病）迅速刺入耳垂下端垂下端12毫米，不宜过深或过浅。然后用毫米，不宜过深或过浅。然后用右手中

6、指轻轻向上挤压出血。右手中指轻轻向上挤压出血。现在学习的是第10页，共47页现在学习的是第11页，共47页厚血膜厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4-5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转24圈，再回到圆心收起，涂成直径0.81cm大小圆形厚血膜。水平放置，务必使血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。血膜制作（涂片操作）血膜制作（涂片操作）现在学习的是第12页，共47页现在学习的是第13页，共47页血膜制作（涂片操作）血膜制作（涂片操作）薄血膜薄血膜 取取洁洁净净的的载载玻玻片片2 2张张，1 1张以左手拇指，食指夹持载玻片两端（

7、手指切勿接触玻片表面），用另1 1张张边边缘缘平平滑滑（最最好好为为磨磨口口边边缘缘）的的载载玻玻片片做做推推片片，用用推推片片一一端端边边缘缘的的中中点点从从取取血血部部分分取取约约1 1微微升升的的血血量量（相相当当于于1/41/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25302530度度夹夹角角，待待血血液液向向两两侧侧扩扩展展约约2cm2cm长度时，均匀而迅速地轻轻向左推出（约2.5cm长）。现在学习的是第14页，共47页现在学习的是第15页，共47页现在学习的是第16页，共47页将推玻片向1的方向稍抽回，当血液充满推玻片适当宽度（约2cm）后，以一定均匀的速度向2的方向滑动（

8、约2.5cm）。现在学习的是第17页，共47页现在学习的是第18页，共47页血涂片质量评价：血膜均匀、厚薄度合适、无空泡、无划痕 薄血膜头体尾位置和形状好、无停顿起伏、两侧留出空间注意：血滴大，速度快、角度大 血膜厚 血滴小，速度慢、角度小 血膜薄现在学习的是第19页，共47页血膜制作（涂片操作）血膜制作（涂片操作）涂涂制制厚厚、薄薄血血膜膜的的位位置置 通通常常是是将将厚厚、薄薄血血膜膜涂涂在在一一张张载载片片上上。方方法法是是将将载载片片分分为为6等等分分，第第1、2格格备备贴贴标标签签及及编编号号用用；厚厚血血膜膜涂涂在在第第3格格中中央央，薄薄血血膜膜涂涂在在第第4格格前前缘缘至至第第

9、6格格中中部部。作作为为标标本本的的血血片片每每张张玻玻片片涂涂厚厚、薄薄血血膜膜各各1个个；门门诊诊和发热病人血片每片和发热病人血片每片1人，人，涂涂2个厚血膜个厚血膜1个薄血膜，个薄血膜，以防血膜脱落而影响检查；以防血膜脱落而影响检查；疟疾调查时，每张玻片疟疾调查时，每张玻片 可涂制可涂制23人血膜。人血膜。标本片发热病人血片标签标签现在学习的是第20页，共47页 厚、薄血膜的位置厚、薄血膜的位置 每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图 2.5cm 2.5cm现在学习的是第21页，共47页现在学习的是第22页，共47页各种不同的疟疾血片涂制法：各种不同的疟疾血片涂制法：标准血片标准血

10、片门诊发热病人血片门诊发热病人血片居民普查血片居民普查血片现在学习的是第23页，共47页血膜制作（涂片操作）血膜制作（涂片操作）血膜编号 血膜制成后，立即用特种蜡笔或水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防差错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内。现在学习的是第24页，共47页血膜制作的注意事项血膜制作的注意事项1.1.玻玻片片清清洗洗时时，避避免免玻玻片片碰碰撞撞、磨磨损损。制制作作血血膜膜的的载载玻玻片片必必须须完完全全清清洁洁而而毫毫无无油油渍渍或或污污垢垢。制制片片时时，手手指指只只能能持持载载片片的的边边缘缘，不不能能接接触触玻玻片片

11、表表面面，以以免免油油污污使使薄薄血血膜膜产产生生空空白白区区以以及及厚厚血血膜膜脱脱落落。作作为为推推片片的的玻玻片片边边缘缘一一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。现在学习的是第25页，共47页血膜制作的注意事项血膜制作的注意事项 2.2.刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，凉干后应及时装入标本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让醇、醛等物质挥发后才能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血导致染色效果

12、不佳。现在学习的是第26页，共47页血膜制作的注意事项血膜制作的注意事项 3.3.血血膜膜让让其其自自然然干干燥燥，切切忌忌用用太太阳阳晒晒或或火火烤烤，干干透透后后才才能能用用甲甲醇醇固固定定薄薄血血膜膜，并并对对厚厚血血膜膜溶溶血血。夏夏天天标标本本尽尽可可能能24482448小时内固定、溶血和染色；冬天也不能超过7272小小时时。放放置置时时间间越越久久，厚厚血血膜膜越越不不易易溶溶血血，染染色色效效果果也也差差。若若不不能能及及时时染染色色，薄薄血血膜膜宜宜先先用用甲甲醇醇固固定定，然然后后用用蒸蒸馏馏水水（或或过过滤滤的的清清水水）对对厚厚血血膜膜溶溶血血，晾晾干干固固定定后后装装入

13、入盒盒内内盖盖严严，待待以以后染色。后染色。现在学习的是第27页，共47页血膜染色血膜染色一、染液的种类及染色原理一、染液的种类及染色原理染液种类：染液种类：染液种类：染液种类：对对对对镜镜镜镜检检检检疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫染染染染色色色色虽虽虽虽然然然然种种种种类类类类名名名名称称称称很很很很多多多多，但但但但都都都都是是是是从从从从罗罗罗罗门门门门诺夫斯基氏创造的多色性染液变化过来的。诺夫斯基氏创造的多色性染液变化过来的。诺夫斯基氏创造的多色性染液变化过来的。诺夫斯基氏创造的多色性染液变化过来的。多多多多色色色色性性性性染染染染液液液液可可可可分分分分为为为为水水水水溶溶溶溶液液液液和和

14、和和醇醇醇醇溶溶溶溶液液液液两两两两类类类类。水水水水溶溶溶溶液液液液类类类类有有有有罗罗罗罗氏氏氏氏（RomanowskyRomanowskyRomanowskyRomanowsky）染染染染液液液液、费费费费氏氏氏氏(Field)(Field)(Field)(Field)染染染染液液液液等等等等；醇醇醇醇溶溶溶溶液液液液有吉氏（有吉氏（有吉氏（有吉氏（GiemsaGiemsaGiemsaGiemsa）染液、瑞氏（）染液、瑞氏（）染液、瑞氏（）染液、瑞氏（WrightWright）染液等。）染液等。现在学习的是第28页，共47页血膜染色血膜染色（一）染液的种类（一）染液的种类醇溶液类醇溶液类

15、:有有吉吉氏氏（GiemsaGiemsa）染染液液、瑞瑞氏氏（WrightWright）染染液液等等。是是在在水水溶溶液液染染液液的的基基础础上上改改进进发发展展而而成成。目目前前我我们们推推荐荐的的是是运运用用醇醇溶溶液液类类中中的的吉氏（吉氏（GiemsaGiemsa）染液）染液现在学习的是第29页，共47页血膜染色血膜染色（二）染色的原理（二）染色的原理 染染色色原原理理是是染染料料于于被被染染物物的的阴阴阳阳离离子子互互相相吸吸附附而而结合的一种化学反应。结合的一种化学反应。各各各各种种种种细细细细胞胞胞胞和和和和疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫主主主主要要要要是是是是由由由由不不不不同同同同

16、的的的的蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质或或或或类类类类氨氨氨氨基基基基酸酸酸酸组组组组成成成成。不不不不同同同同的的的的氨氨氨氨基基基基酸酸酸酸均均均均含含含含有有有有氨氨氨氨基基基基（NHNHNHNH2 2 2 2）和和羧羧基基（COOHCOOHCOOHCOOH）。在在在在游游游游离离离离状状状状态态态态时时时时，氨氨氨氨基基基基（NH2NH2）获获获获得得得得一一一一个个个个氢氢氢氢离离离离子子子子成成成成为为为为带带带带阳阳阳阳电电电电的的的的离离离离子子子子（NHNHNHNH3 3 3 3 +）；而而而而羧羧羧羧基基基基失失失失掉掉掉掉一一一一个个个个氢氢氢氢离离离离子子子子成成成成为为为为

17、带带带带阴阴阴阴电电电电的的的的离子（离子（离子（离子（COO COO COO COO ）。）。）。）。现在学习的是第30页，共47页血膜染色血膜染色（二）染色的原理（二）染色的原理主要染料都含有美蓝、伊红和美蓝氧化后的天青。主要染料都含有美蓝、伊红和美蓝氧化后的天青。主要染料都含有美蓝、伊红和美蓝氧化后的天青。主要染料都含有美蓝、伊红和美蓝氧化后的天青。美蓝的有色基团带阳离子，是一种碱性染料，用的是美蓝的有色基团带阳离子，是一种碱性染料，用的是盐酸美蓝。溶于水后离解为带阴电的氯离子和能着色盐酸美蓝。溶于水后离解为带阴电的氯离子和能着色的美蓝阳离子。的美蓝阳离子。伊红的有色基团带阴离子，是一种

18、酸性染料，染色用的是伊红的有色基团带阴离子，是一种酸性染料，染色用的是伊红的有色基团带阴离子，是一种酸性染料，染色用的是伊红的有色基团带阴离子，是一种酸性染料，染色用的是伊红钠盐。溶于水中时离解为带阳电的钠离子和带阴电的伊红钠盐。溶于水中时离解为带阳电的钠离子和带阴电的伊红钠盐。溶于水中时离解为带阳电的钠离子和带阴电的伊红钠盐。溶于水中时离解为带阳电的钠离子和带阴电的伊红离子。伊红离子。伊红离子。伊红离子。天青为美蓝氧化而成。虽为碱性染剂，在染色中起染媒天青为美蓝氧化而成。虽为碱性染剂，在染色中起染媒天青为美蓝氧化而成。虽为碱性染剂，在染色中起染媒天青为美蓝氧化而成。虽为碱性染剂，在染色中起染

19、媒作用。作用。作用。作用。现在学习的是第31页，共47页血膜染色血膜染色（二）染色的原理（二）染色的原理伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水的沈淀物染成红色。的沈淀物染成红色。的沈淀物染成红色。的沈淀物染成红色。美兰主要离解为碱性的美兰离子，在遇到酸性

20、蛋白质如疟美兰主要离解为碱性的美兰离子，在遇到酸性蛋白质如疟美兰主要离解为碱性的美兰离子，在遇到酸性蛋白质如疟美兰主要离解为碱性的美兰离子，在遇到酸性蛋白质如疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等即可结合染成兰色。即可结合染成兰色。即可结合染成兰色。即可结合染成兰色。现在学习的是第32页，共47页血膜染色血膜染色（二）染色的原理（二）染色的原理美兰与伊红都不能使原虫和白细胞的核着色，必须由天青美兰与伊红都不能使原虫和白细胞的核着色，

21、必须由天青美兰与伊红都不能使原虫和白细胞的核着色，必须由天青美兰与伊红都不能使原虫和白细胞的核着色，必须由天青作为媒介（染媒）才能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，作为媒介（染媒）才能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，作为媒介（染媒）才能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，作为媒介（染媒）才能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，但又具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来只能染上但又具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来只能染上但又具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来只能染上但又具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来只能染上极淡蓝色的结构染上显著的酸性染剂伊红，这样，就使白极淡蓝色的结构染上显著的酸性染剂

22、伊红，这样，就使白极淡蓝色的结构染上显著的酸性染剂伊红，这样，就使白极淡蓝色的结构染上显著的酸性染剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显著的既蓝又红的紫蓝色，而较小或菲细胞粗大的核染成显著的既蓝又红的紫蓝色，而较小或菲细胞粗大的核染成显著的既蓝又红的紫蓝色，而较小或菲细胞粗大的核染成显著的既蓝又红的紫蓝色，而较小或菲薄的原虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。薄的原虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。薄的原虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。薄的原虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。现在学习的是第33页，共47页血膜染色血膜染色（二）染色的原理（二）染色的原理染色化学反应反应的示意图：染

23、色化学反应反应的示意图：染色化学反应反应的示意图：染色化学反应反应的示意图：疟原虫细胞浆的阴离子（疟原虫细胞浆的阴离子（疟原虫细胞浆的阴离子（疟原虫细胞浆的阴离子（COOCOOCOOCOO）美蓝阳离子美蓝阳离子美蓝阳离子美蓝阳离子呈蓝色呈蓝色呈蓝色呈蓝色 天青（染媒作用）天青（染媒作用）天青（染媒作用）天青（染媒作用）疟原虫核的阳离子（疟原虫核的阳离子（疟原虫核的阳离子（疟原虫核的阳离子（NHNHNHNH3 3 3 3+）呈紫红色呈紫红色呈紫红色呈紫红色 伊红阴离子伊红阴离子伊红阴离子伊红阴离子现在学习的是第34页，共47页血膜染色血膜染色（二）染色的原理（二）染色的原理 蛋蛋蛋蛋白白白白质质

24、质质本本本本身身身身是是是是阴阴阴阴阳阳阳阳电电电电荷荷荷荷是是是是相相相相等等等等，带带带带有有有有两两两两基基基基性性性性的的的的。所所所所以以以以其其其其所所所所带带带带阴阴阴阴阳阳阳阳电电电电荷荷荷荷的的的的数数数数量量量量可可可可受受受受周周周周围围围围液液液液体体体体的的的的酸酸酸酸碱碱碱碱度度度度（PHPHPHPH）而而而而改改改改变变变变，在在在在偏偏偏偏酸酸酸酸的的的的溶溶溶溶液液液液中中中中阳阳阳阳离离离离子子子子增增增增加加加加，易易易易于于于于伊伊伊伊红红红红结结结结合合合合，着着着着色色色色偏偏偏偏红红红红。在在在在偏偏偏偏碱碱碱碱的的的的溶溶溶溶液液液液中中中中阴阴

25、阴阴离离离离子子子子增增增增加加加加，易易易易于于于于美美美美蓝蓝蓝蓝结结结结合合合合，着着着着色色色色偏偏偏偏蓝蓝蓝蓝。这这这这就就就就说说说说明明明明了了了了为为为为何何何何配配配配制制制制染染染染液液液液的的的的酸酸酸酸碱碱碱碱度度度度直直直直接接接接影影影影响响响响了了了了血血血血片片片片染染染染色色色色的的的的质质质质量量量量，偏偏偏偏酸酸酸酸着着着着色色色色过过过过红红红红，偏偏偏偏碱碱碱碱着着着着色色色色过过过过蓝蓝蓝蓝。所所所所以以以以在在在在染染染染血血血血片片片片时时时时稀稀稀稀释释释释液液液液要要要要控控控控制制制制在在在在PHPHPHPH7.27.27.27.2，最最最

26、最为为为为适适适适宜宜宜宜，疟疟疟疟原原原原虫虫虫虫的的的的结结结结构构构构才才才才能能能能清清清清晰可见。晰可见。晰可见。晰可见。现在学习的是第35页，共47页吉氏染色血片外观吉氏染色血片外观偏偏 酸酸偏偏 碱碱标标 准准现在学习的是第36页，共47页 1、吉氏染液的配制：、吉氏染液的配制：这是目前最常用的疟原虫染色剂，它具有方便、染色效果稳定的优点，也是我们推荐的染色方法。将吉氏粉5g置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，然后边加边磨，至甘油250ml加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研钵中加入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗后再倒入瓶中，至甲醇250ml洗清研钵中甘油为

27、止。塞紧瓶塞，充分摇匀，置室温内，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使用。也可在带有紧口瓶塞的硬质玻璃瓶中放入约50个玻璃珠（直径3 5mm），用玻璃漏斗把甘油灌入瓶中，再把吉氏粉放入漏斗中，用甲醇缓慢地把所有染料粉冲入瓶内，塞紧瓶塞，置于室温内，每天用力摇动5分钟，3天后即可使用。血膜染色血膜染色（三）染液的配制和染色方法（三）染液的配制和染色方法现在学习的是第37页，共47页吉氏染液染色方法：吉氏染液染色方法：先先用用甲甲醇醇固固定定薄薄血血膜膜，待待干干后后进进行行染染色色。亦亦可可在在固固定定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后才进行染色。薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后才

28、进行染色。成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入2%吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性蒸馏水98毫升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色30分钟，然后用清水注入染缸将染液通过溢出方式洗去，再用清水浸洗1-2次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干后镜检。现在学习的是第38页，共47页单张血片染色单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用中性蒸馏水（或娃哈哈矿泉水）1ml，加吉氏母液12滴，混合均匀后滴入血片标本上，染色1020分钟，然后用清水轻轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。现在学习的是第39页，共47页2、瑞式染液的配制：、瑞式染液的配制：将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15

29、ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后，置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。此方法染色的时间短，但染色效果不如吉氏染液效果稳定，又不能大量血片染色，常用于门诊应急情况下血片染色。现在学习的是第40页，共47页 瑞氏染液的染色方法：瑞氏染液的染色方法：先用蜡笔在厚、薄血膜间划一界限，滴几滴蒸馏水在厚血膜上溶血。溶血后倾去水滴。在薄血膜上加瑞氏染液67滴，摇动玻片均匀染色30秒。然后再加1012滴蒸馏水于薄血膜上，摇动玻片将染液与蒸馏水混合均匀后，用吸管把染液引到厚血膜上，使厚血膜再染色5分钟。用清水轻轻冲去染液，晾干镜检。现在学习的是

30、第41页，共47页（四）影响染色效果的因素（四）影响染色效果的因素 血血片片染染色色好好坏坏除除了了与与玻玻片片是是否否清清洁洁，血血片片制制作作质质量量好好坏坏等等有有关关外外，还还受受到到以以下下几个因素的影响：几个因素的影响：1.染料溶剂的质量：染料、甲醇和甘油如果不纯，常使配制的染液偏酸或偏碱而影响染色效果。因此必须用分析纯的甲醇和中性甘油，而且在配制时所用的器具必须干净而无水份。现在学习的是第42页，共47页（四）影响染色效果的因素（四）影响染色效果的因素2.染液的新旧：新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力较弱且常有沉渣。染液存放时间越久，染色力越强。通常在染液配制12周后才使用，

31、盛装染液的瓶子应加塞盖密。以防吸潮而影响染液质量。现在学习的是第43页，共47页（四）影响染色效果的因素（四）影响染色效果的因素3.染液的稀释浓度：染液的浓度高其着色就快而深，染色时间相对缩短，疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏蓝；染液浓度过低则染色时间相对长一些，颜色偏酸红，薛氏点不明显或消失。现在学习的是第44页，共47页（四）影响染色效果的因素（四）影响染色效果的因素4.染液稀释后使用时间：染液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天青，三者能在醇溶液中溶解，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生沉淀。因此，必须在稀释染液当时使用，一般在30分钟内染色力最强。现在学习的是第45

32、页，共47页（四）影响染色效果的因素（四）影响染色效果的因素5.染色时间：染色时间长染色效果好，反之较差。室温高则着色快，染色时间可略缩短，气温低可适当延长。因此染色时间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温而适当增减。现在学习的是第46页，共47页（四）影响染色效果的因素（四）影响染色效果的因素6.6.染色用水：染液的稀释用水和染色后冲洗用水应选择染色用水：染液的稀释用水和染色后冲洗用水应选择Ph7.0Ph7.07.2清洁水，通常使用的新鲜的蒸馏水（或过滤的冷开水，以及自来水、井水、河水、泉水和雨水等）。如果偏酸或偏碱，可用缓冲液调整。染色后发现血膜颜色偏蓝（偏碱）或偏红（偏酸）时，可用与之相反的酸、碱度缓冲液冲洗血片予以纠正。现在学习的是第47页，共47页