第2章蛋白质的构件氨基酸课件.ppt

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1、第2章蛋白质的构件氨基酸第1页，此课件共50页哦一、蛋白质的化学组成和分类1.1.元元素素组组成成 蛋蛋白白质质是是一一类类含含氮氮有有机机化化合合物物，除除含含有有碳碳、氢氢、氧氧外外，还还有有氮氮和和少少量量的的硫硫。某某些些蛋蛋白白质质还还含含有有其其他他一一些些元元素素，主主要要是是磷磷、铁铁、碘碘、锌锌和和铜铜等等。碳碳和和氮氮元元素素在蛋白质中的组成百分比约为：在蛋白质中的组成百分比约为：碳碳：50%;氮：氮：16%。2.蛋蛋白白质质的的估估算算平平均均含含氮氮量量约约为为16%，所所以以，可可以以根根据据样样品品中中的的含含氮氮量量来来计计算算蛋蛋白白质质的大概含量：的大概含量：

2、蛋白质含量蛋白质含量=蛋白氮蛋白氮6.253.3.氨基酸组成氨基酸组成 蛋白质是由蛋白质是由2020种种L-L-型型氨基酸氨基酸 组成的长链分子组成的长链分子第2页，此课件共50页哦4.蛋白质的分类蛋白质的分类1）按组成：按组成：简单蛋白质（表简单蛋白质（表21）：）：缀合蛋白质（表缀合蛋白质（表21）：（注意辅基的组成）：（注意辅基的组成）2）按生物学功能分）按生物学功能分：酶、运输蛋白、营养和贮存蛋白、激素、受体蛋白、运动蛋白、结构蛋白、防御蛋白等。酶、运输蛋白、营养和贮存蛋白、激素、受体蛋白、运动蛋白、结构蛋白、防御蛋白等。3）按形状和溶解度：）按形状和溶解度：纤维状蛋白质：不溶于水纤维

3、状蛋白质：不溶于水,结构作用；结构作用；球状蛋白质球状蛋白质：易溶于水，细胞中大多属可溶性蛋白；：易溶于水，细胞中大多属可溶性蛋白；膜蛋白质：不溶于水膜蛋白质：不溶于水,与细胞的各种膜系统结合。与细胞的各种膜系统结合。第3页，此课件共50页哦酸酸水水解解：H2SO4或或HCI能能使使蛋蛋白白质质完完全全水水解解；不不引引起起消消旋旋作作用用，但但色色氨氨酸酸完完全被破坏，天冬酰胺、谷胺酰胺脱酰胺基；全被破坏，天冬酰胺、谷胺酰胺脱酰胺基；碱碱水水解解：NaOH能能使使蛋蛋白白质质完完全全水水解解；色色氨氨酸酸稳稳定定，但但大大多多数数氨氨基基酸酸遭遭破破坏坏并引起消旋现象；并引起消旋现象；酶酶水

4、水解解：部部分分水水解解；不不产产生生消消旋旋，不不破破坏坏氨氨基基酸酸；主主要要用用于于蛋蛋白白质质一一级级结结构分析，如：胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶等。构分析，如：胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶等。二、蛋白质的水解第4页，此课件共50页哦三、氨基酸的一般结构结结构构通通式式：与与羧羧基基相相连连的的C上上都都有有一一个个氨氨基基，氢氢原原子子和和可可变变的的R基基。如如图图aa结结构构通式：通式：除除Gly外外,C是不对称是不对称C：1.具有两种立体异构体具有两种立体异构体D-型和型和L-型型2.具有旋光性具有旋光性左旋（左旋（-）或右旋（）或右旋（+）第5页，此课件共50页哦四、

5、氨基酸的分类四、氨基酸的分类（一）基本氨基酸：组成蛋白质的常见氨基酸（有（一）基本氨基酸：组成蛋白质的常见氨基酸（有20种）。种）。（二二）不不常常见见的的蛋蛋白白质质氨氨基基酸酸：不不常常见见但但在在某某些些蛋蛋白白质质中中存存在在。是是多多肽合成后由基本肽合成后由基本aa经酶促修饰而来经酶促修饰而来(约约10种种)。（三三）非非蛋蛋白白质质氨氨基基酸酸：存存在在于于生生物物体体内内但但不不参参与与蛋蛋白白质质组组成成的的氨基酸氨基酸(约约200多种多种)。第6页，此课件共50页哦按按R基的化学结构：基的化学结构：中性氨基酸中性氨基酸1.脂肪族氨基酸脂肪族氨基酸含羟基或硫的氨基酸含羟基或硫的

6、氨基酸酸酸性性氨氨基基酸酸及及其其酰酰氨氨碱性氨基酸碱性氨基酸2.芳香族氨基酸芳香族氨基酸3.杂环族氨基酸杂环族氨基酸（一）（一）常见的蛋白质氨基酸（常见的蛋白质氨基酸（2020种）种）第7页，此课件共50页哦（1）中性氨基酸（）中性氨基酸（5种，种，甘丙缬亮异甘丙缬亮异）R基均为中性烷基，基均为中性烷基，R基对分子酸碱性影响很小。基对分子酸碱性影响很小。Gly是唯一不含手性碳原子的氨基酸，因此不具旋光性是唯一不含手性碳原子的氨基酸，因此不具旋光性。1.脂肪族氨基酸脂肪族氨基酸第8页，此课件共50页哦（2）R中含有羟基和硫的氨基酸（共中含有羟基和硫的氨基酸（共4种，种，丝苏半甲硫丝苏半甲硫）C

7、ys的的R中含中含巯基（巯基（-SH），具有重要性质：，具有重要性质：两个两个Cys的巯基氧化生成二硫键，生成胱氨酸。的巯基氧化生成二硫键，生成胱氨酸。Met在生物合成中是一种重要的甲基供体在生物合成中是一种重要的甲基供体（）。第9页，此课件共50页哦（3）酸性氨基酸及其酰胺基团（各）酸性氨基酸及其酰胺基团（各2种，种，天谷酸酰胺天谷酸酰胺）Asp和和Glu是唯一在生理条件下带有负电荷的的两个氨基酸；是唯一在生理条件下带有负电荷的的两个氨基酸；第10页，此课件共50页哦（4）碱性氨基酸（）碱性氨基酸（2种，种，赖精脂肪酸赖精脂肪酸）Arg是碱性最强的氨基酸，是动物体内尿素形成的中间物。是碱性最

8、强的氨基酸，是动物体内尿素形成的中间物。第11页，此课件共50页哦2.芳香族氨基酸（3种，苯丙色酪香）苯丙氨酸苯丙氨酸酪氨酸酪氨酸色氨酸色氨酸第12页，此课件共50页哦3.杂环氨基酸（2种，杂环带组脯杂环带组脯）Pro的的-亚亚氨氨基基是是环环的的一一部部分分，因因此此具具有有特特殊殊的的刚刚性性结结构构，一一般般出出现现在在两段两段-螺旋之间的转角处，螺旋之间的转角处，Pro残基所在的位置必然发生骨架方向的变化；残基所在的位置必然发生骨架方向的变化；His带带有有咪咪唑唑基基，是是在在生生理理pH条条件件下下唯唯一一具具有有缓缓冲冲能能力力的的氨氨基基酸酸。His在在酶酶的的酸碱催化机制中起

9、重要作用。酸碱催化机制中起重要作用。第13页，此课件共50页哦按按R基的极性性质：基的极性性质：1.非非极极性性R基基氨氨基基酸酸8（丙丙、缬缬、亮亮、异异亮、脯、苯丙、色、甲硫）亮、脯、苯丙、色、甲硫）2.不不带带电电荷荷的的极极性性R基基氨氨基基酸酸7（甘甘、丝丝、苏、半胱、酪、谷氨酰胺、天冬酰胺）苏、半胱、酪、谷氨酰胺、天冬酰胺）3.带正电荷的带正电荷的R基氨基酸基氨基酸3（赖、精、组）（赖、精、组）4.带负电荷的带负电荷的R基氨基酸基氨基酸2（谷、天冬）（谷、天冬）极极性性第14页，此课件共50页哦1.非极性R基氨基酸（8种）在在水水中中的的溶溶解解度度小小，且且在在维维持持蛋蛋白白质

10、质的的三三维维结结构构（蛋蛋白白质质的的疏疏水水核核心心）中中起起着着重重要要作作用。用。第15页，此课件共50页哦2.不带电荷的极性R基氨基酸（7种）这这类类氨氨基基酸酸的的侧侧链链都都能能与与水水形形成氢键，因此很容易溶于水。成氢键，因此很容易溶于水。羟基羟基 巯基巯基 酰胺基酰胺基第16页，此课件共50页哦3.带负电荷的R基氨基酸（酸性氨基酸，2种）这这两两种种氨氨基基酸酸都都含含有有两两个个羧羧基基，并并且且第第二二个个羧羧基基在在pH7左左右右也也完全解离，因此分子带负电荷。完全解离，因此分子带负电荷。第17页，此课件共50页哦4.带正电荷的R基氨基酸（碱性氨基酸，3种）胶胶原原蛋蛋

11、白白中中的的Lys侧侧链链氧氧化化时时能能形成很强的分子间形成很强的分子间(内内)交联。交联。Arg碱性很强，与碱性很强，与NaOH相当。相当。His是是天天然然的的缓缓冲冲剂剂，它它往往往往存存在在于许多酶的活性中心。于许多酶的活性中心。第18页，此课件共50页哦（二）不常见的蛋白质氨基酸也也称称修修饰饰氨氨基基酸酸，是是在在蛋蛋白白质质合合成成后后，由由基基本氨基酸修饰而来。本氨基酸修饰而来。4-羟羟脯脯氨氨酸酸和和5-羟羟赖赖氨氨酸酸，这这两两种种氨氨基基酸酸主主要存在于结缔组织的纤维状蛋白中。要存在于结缔组织的纤维状蛋白中。第19页，此课件共50页哦第20页，此课件共50页哦（三）非蛋

12、白质氨基酸不组成蛋白质，但有生理功能。不组成蛋白质，但有生理功能。（2）D-型氨基酸型氨基酸D-Glu、D-Ala（肽聚糖中）、（肽聚糖中）、D-Phe（短杆菌肽（短杆菌肽S）（3）-、-、-氨基酸氨基酸-Ala（泛素的前体）、（泛素的前体）、-氨基丁酸（神经递质）。氨基丁酸（神经递质）。第21页，此课件共50页哦（一）氨基酸的解离氨基酸在晶体和水溶液中主要以兼性离子形式存在。氨基酸在晶体和水溶液中主要以兼性离子形式存在。氨氨基基酸酸在在两两性性离离子子时时，氨氨基基是是以以质质子子化化(NH3+)形形式式存存在在，羧羧基基是是以以离离解解状状态态(COO-)存在。两性离子既有酸的作用，又有碱

13、的作用。存在。两性离子既有酸的作用，又有碱的作用。五、氨基酸的酸碱性质第22页，此课件共50页哦氨基酸的分部解离氨基酸的分部解离 阳离子阳离子 两性离子两性离子 阴离子阴离子 正电荷负电荷PHPIPHPI等电点（等电点（PI)正电荷正电荷负电荷负电荷第23页，此课件共50页哦（二）氨基酸的等电点等等电电点点：当当溶溶液液浓浓度度为为某某一一pHpH值值时时，氨氨基基酸酸分分子子中中所所含含的的-NH-NH3 3+和和-COO-COO-数数目目正正好好相相等，净电荷为等，净电荷为0 0。这一。这一pHpH值即为氨基酸的等电点，简称值即为氨基酸的等电点，简称p pI I。在在等等电电点点时时，氨氨

14、基基酸酸既既不不向向正正极极也也不不向向负负极极移移动动，即即氨氨基基酸酸处处于于两两性性离离子子状状态态，少数离解成数目相等的阴、阳离子。少数离解成数目相等的阴、阳离子。pH=pI时，氨基酸净电荷为零；时，氨基酸净电荷为零；pHpI时，氨基酸带负电荷，时，氨基酸带负电荷，COOH解离成解离成COO-，向正极移动；，向正极移动；pHpI时，氨基酸带正电荷，时，氨基酸带正电荷，NH2解离成解离成NH3+，向负极移动。，向负极移动。第24页，此课件共50页哦氨氨基基酸酸的的等等电电点点可可依依其其分分子子中中氨氨基基、羧羧基基和和R基基的的解解离离常常数数pKa值值求求出出。解解离离常常数数(pK

15、a)是是水水溶溶液液中中具具有有一一定定离离解解度度的的溶溶质质的的极性参数。的的极性参数。第25页，此课件共50页哦氨基酸等电点的计算公式可分为下列情况：氨基酸等电点的计算公式可分为下列情况：1.非非极极性性R基基氨氨基基酸酸和和不不带带电电荷荷的的极极性性R基基氨氨基基酸酸（半半胱胱氨氨酸酸除除外）：外）：pI=(pKa1+pKa2)/22.R基基含含有有可可解解离离基基团团的的氨氨基基酸酸，其其pI值值也也决决定定于于兼兼性性离离子子两边的两边的pKa的算术平均值：的算术平均值：（1）酸性氨基酸：）酸性氨基酸：pI=(pKa1+pKR-COO-)/2半半胱胱氨氨酸酸（Cys)不不属属酸酸

16、性性氨氨基基酸酸，但但其其SH具具有有弱弱酸酸性性，在在PH7.0时时，Cys的的SH大大约约解解离离8%，故故其其PI按按酸酸性性氨氨基基酸酸计算。计算。（2）碱性氨基酸：）碱性氨基酸：pI=(pKa2+pKR-NH2)/2第26页，此课件共50页哦例例1：计算天冬氨酸的等电点：计算天冬氨酸的等电点pI解：根据等电点的定义，近似求出解：根据等电点的定义，近似求出pI=（pKa1+pKR)/2=(2.09+3.86)/2=2.97例例2：Glu的的pKa12.19，pKa29.67，pKR-COOH4.25，则等电点为，则等电点为?(3.22)第27页，此课件共50页哦（一）（一）-羧基参加的

17、反应羧基参加的反应1.成酯反应成酯反应羧基被醇酯化后，形成相应的酯。羧基被醇酯化后，形成相应的酯。2.成酰氯反应成酰氯反应羧羧基基可可与与五五氯氯化化磷磷或或二二氯氯亚亚砜砜反反应应，生成酰氯，在多肽的人工合成中常用。生成酰氯，在多肽的人工合成中常用。3.成酰胺反应成酰胺反应六、氨基酸的化学反应第28页，此课件共50页哦1.酰化反应酰化反应丹磺酰氯丹磺酰氯（5二甲基氨基萘二甲基氨基萘-1-磺酰氯，磺酰氯，DNS-Cl）：）：常用于多肽链常用于多肽链NH2末端氨末端氨基酸的标记和微量氨基酸的定量测定。基酸的标记和微量氨基酸的定量测定。（二）（二）-NH2参加的反应参加的反应第29页，此课件共50

18、页哦NGlyAlaSerLeuPheCDNSGlyAlaSerLeuPheC水解产物：水解产物：DNSGly、Ala、Ser、Leu、PheDNS-AA在紫外光激发后发黄色荧光。在紫外光激发后发黄色荧光。DNS第30页，此课件共50页哦2.烃基化反应烃基化反应-氨氨基基中中的的氮氮是是一一个个亲亲核核中中心心，能能与与烃烃基基（包（包括括环环烃烃及及其其衍衍生生物物）发发生生亲亲核核取取代代反反应应，如如Edman反应（可鉴定多肽的反应（可鉴定多肽的NH2 2末端氨基酸末端氨基酸 ）。）。第31页，此课件共50页哦EdmanEdman反反应应(苯苯异异硫硫氰氰酸酸酯酯，PITC PITC)产产

19、物物：苯苯乙乙内内酰酰硫硫脲脲衍衍生生物物（PTH-PTH-氨氨基基酸酸），无无色色，可可以以用用层层析析法法分分离离鉴定。鉴定。被被EdmanEdman用用来来鉴鉴定定多多肽肽的的NHNH2 2末末端端氨氨基基酸酸 。第32页，此课件共50页哦（三）茚三酮反应（三）茚三酮反应与茚三酮反应（与茚三酮反应（）茚茚三三酮酮在在弱弱酸酸中中与与-氨氨基基酸酸共共热热，引引起起氨氨基基酸酸的的氧氧化化脱脱氨氨、脱脱羧羧反反应应，最最后后，茚三酮与反应产物茚三酮与反应产物氨和还原茚三酮反应，生成紫色物质。氨和还原茚三酮反应，生成紫色物质。氨基酸与茚三酮的反应过程第33页，此课件共50页哦用用纸纸层层析析

20、和和柱柱层层析析把把各各种种氨氨基基酸酸分分开开后后，用用茚茚三三酮酮显显色色可可以以定定性性鉴鉴定定，并并在在570nm定定量测定各种氨基酸。量测定各种氨基酸。Pro、Hy-Pro与与茚茚三三酮酮直直接接形形成成黄黄色色化化合物。合物。第34页，此课件共50页哦（四）（四）侧链官能团的特异反应侧链官能团的特异反应用于蛋白质的化学修饰用于蛋白质的化学修饰氨基酸侧链含有羟基、酚基、巯基、吲哚基、咪唑基、胍基、甲硫基等。氨基酸侧链含有羟基、酚基、巯基、吲哚基、咪唑基、胍基、甲硫基等。蛋蛋白白质质的的化化学学修修饰饰：在在温温和和条条件件下下，以以可可控控制制的的方方式式使使蛋蛋白白质质与与某某种种

21、试试剂剂发发生生特特异异反反应应，引起蛋白质中个别氨基酸侧链或功能团发生共价化学改变。引起蛋白质中个别氨基酸侧链或功能团发生共价化学改变。Cys(SH)卤化烷（碘乙酸等）卤化烷（碘乙酸等）：保护巯基，防止重新被氧化；：保护巯基，防止重新被氧化；2硝基苯甲酸：分光光度法定量测定巯基；硝基苯甲酸：分光光度法定量测定巯基；易被氧化成胱氨酸易被氧化成胱氨酸胱氨酸的氧化（产物：磺基丙氨酸。胱氨酸的氧化（产物：磺基丙氨酸。氧化剂：氧化剂：过甲酸）过甲酸）胱氨酸的还原（产物：半胱氨酸。胱氨酸的还原（产物：半胱氨酸。还原剂：还原剂：巯基乙醇等）巯基乙醇等）第35页，此课件共50页哦七、氨基酸的旋光性和光谱性质

22、（一）氨基酸的旋光性和立体化学（一）氨基酸的旋光性和立体化学1.氨基酸的构型氨基酸的构型氨基酸构型：氨基酸构型：L型、型、D型型。第36页，此课件共50页哦除了苏、异亮有除了苏、异亮有四四种光学异构体种光学异构体,甘氨酸只为甘氨酸只为L型外，其余型外，其余17种氨基酸有种氨基酸有两两种光学种光学异构体：异构体：L型、型、D型。构成蛋白质的氨基酸均属型。构成蛋白质的氨基酸均属L-型。型。第37页，此课件共50页哦外消旋物：外消旋物：D-型和型和L-型的等摩尔混合物。型的等摩尔混合物。L-苏和苏和D-苏组成消旋物；苏组成消旋物；L-别别-苏和苏和D-别别-苏组成消旋物。苏组成消旋物。第38页，此课

23、件共50页哦2.氨基酸的旋光性氨基酸的旋光性氨氨基基酸酸的的旋旋光光性性（符符号号和和大大小小）取取决决于于它它的的R基基的的性性质质，并并与与溶溶液液的的pH值值有有关关。比旋是比旋是氨基酸的物理常数之一，蛋白质中氨基酸的物理常数之一，蛋白质中L型氨基酸的比旋光度见表型氨基酸的比旋光度见表2-3。Gly无手性无手性C，无旋光性，无旋光性;H2NCHCOOHH第39页，此课件共50页哦（二)氨基酸的光谱性质氨基酸的光吸收性氨基酸的光吸收性20种种基基本本氨氨基基酸酸在在可可见见光光区区都都没没有有光光吸吸收收，在在红红外外区区和和远远紫紫外外区区有有光光吸吸收收。在在近近紫紫外外区区（200-

24、400nm）只只有有芳芳香香族族氨氨基基酸酸（Tyr、Phe、Trp的的R基基含含有有共共轭轭双键）有光吸收。双键）有光吸收。（nm）Tyr2751.4103Phe2572.0102Trp2805.6103蛋白质在蛋白质在280nm有最大紫外吸收光吸收，有最大紫外吸收光吸收，分光光度法鉴定。分光光度法鉴定。核磁共振（核磁共振（NMR）：在）：在aa和和Pro化学化学表征方面起重要作用。表征方面起重要作用。第40页，此课件共50页哦知识链接 核磁共振核磁共振(NMR)是电磁波（无线电波）与原子核自旋相互作用的一种基本物理现象。是电磁波（无线电波）与原子核自旋相互作用的一种基本物理现象。NMR波谱

25、学具有波谱学具有最高的频率分辨率。最高的频率分辨率。NMR曾经使物理学家为之神魂颠倒，近二十年来越来越多的化学家、生物学家和医曾经使物理学家为之神魂颠倒，近二十年来越来越多的化学家、生物学家和医学家也涉足其中。学家也涉足其中。目前生物目前生物NMR波谱学研究的前沿领域包括：波谱学研究的前沿领域包括：1.生物分子三维结构的生物分子三维结构的NMR测定方法和应用测定方法和应用2.生物分子相互作用、动力学及其与功能的关系研究方法和应用生物分子相互作用、动力学及其与功能的关系研究方法和应用3.基于基于NMR的代谢组学研究方法和应用的代谢组学研究方法和应用4.4.生物组织的高分辨生物组织的高分辨NMR分

26、析方法和应用分析方法和应用 中国科学技术大学生命科学学院核磁共振波谱实验室中国科学技术大学生命科学学院核磁共振波谱实验室：主要用多维核磁共振波谱及计算生物学研究与重大疾病或重要生理功能相关的蛋白质结构,动力学与功能关系,以及蛋白质相互作用。第41页，此课件共50页哦蛋白质因含有这些氨基酸，所以也有紫外蛋白质因含有这些氨基酸，所以也有紫外吸收吸收能力，一般在能力，一般在280nm波长波长处有最大光吸收，处有最大光吸收，因此因此能利用紫外吸收法鉴定并测定样品中蛋白质能利用紫外吸收法鉴定并测定样品中蛋白质的的含量。含量。第42页，此课件共50页哦分配原理分配原理固定相和流动相；固定相和流动相；混合物

27、在层析系统中的分离决定于该混合物混合物在层析系统中的分离决定于该混合物组分在两相中的分配情况；组分在两相中的分配情况；分配系数；分配系数；固固液、液液、液液、气液、气液；液；第43页，此课件共50页哦（一）分配层析法：（一）分配层析法：分配系数分配系数 Kd=CACBCA：一种物质在：一种物质在A相（流动相）中的浓度相（流动相）中的浓度 CB：一种物质在：一种物质在B相（固定相）中的浓度相（固定相）中的浓度 八、氨基酸混合物的分离和分析 原理：主要根据被分析的样品（如原理：主要根据被分析的样品（如aaaa混合物）在两种互混合物）在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的目的。不相溶的溶剂

28、中分配系数的不同而达到分离的目的。固定相和流动相固定相和流动相第44页，此课件共50页哦基于分配系数差异的分离方法基于分配系数差异的分离方法分配层析分配层析1.柱柱层析析2.纸层析析3.薄薄层层析析第45页，此课件共50页哦1 1、柱层析、柱层析 层析柱中的填充剂或支持剂表面附着一层结合水作为固定相，沿固定相流过的与它互不相溶的溶剂是流动相。当用洗脱剂洗脱时，柱上端的氨基酸混合物在两相之间会按不同的分配系数以不同的速度向下移动。分部收集层析柱下端的洗脱液，然后分别用茚三酮显色定量，以氨基酸量对洗脱液体积作图得洗脱曲线，曲线中的每个峰相当于某一种氨基酸。加洗脱剂氨基酸样品支持剂层析柱分部收集1.

29、00.50.1光吸收值 20 40 60 80 100 120 流出液（毫升）第46页，此课件共50页哦2、纸层析、纸层析固定相：固定相：滤纸纤维素上吸附的水 流动相：流动相：展层用的溶剂层析时，混合氨基酸在这两相中不断分配，使它们分布在滤纸的不同位置上。基本步骤：点样、展层、显色、定性（定量）基本步骤：点样、展层、显色、定性（定量）层析时，将样品点在滤纸的一个角上，称为原点。然后将其放入一个密闭的容器中，用一种溶剂系统进行展层，层析后烘干滤纸，再将其旋转90度采用第二种溶剂系统进行第二相展层。由于各种氨基酸在两个不同的溶剂系统中具有不同的迁移率（Rf），因此它们就会彼此分开，当用茚三酮显色时

30、，就会在滤纸上面出现各种氨基酸的斑点。若氨基酸种类较少或一相就能分开，进行一相层析即可。溶剂前沿氨基酸显色点滤纸原点XY滤纸层析中的Rf值，Rf=X/Y丁醇-醋酸酚-甲酚-水氨基酸的双向滤纸层析图谱第47页，此课件共50页哦3、薄层层析（thin-layer chromatography)：基本步骤：基本步骤：铺板、点样、展层、显色、定性（定量）铺板、点样、展层、显色、定性（定量）把支持物涂布在玻璃板上使其成为一个均匀的薄层，把要分析的样品滴加在薄层的一端，然后用合适的溶剂在密闭的容器中进行展层，使样品中各个成分分开，最后进行鉴定和定量分析。第48页，此课件共50页哦（二）（二）离子交换层析离子交换层析离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，以特定的 含离子的溶液为流动相，利用离子交换剂对需要分离 的各种离子结合力的差异，而将混合物中不同离子进行分离的层析技术。第49页，此课件共50页哦离子交换树脂：离子交换树脂：化学本质：是一种人工合成的聚苯乙烯一苯二乙烯组成的化学本质：是一种人工合成的聚苯乙烯一苯二乙烯组成的具有网状结构的高分子聚合物。具有网状结构的高分子聚合物。外观：外观：第50页，此课件共50页哦