维生素C含量测定方法课件.ppt

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1、维生素C含量测定方法第1页，此课件共30页哦 维生素C（Vitamin C，Ascorbic Acid）又叫L-抗坏血酸，是一种水溶性维生素。食物中的维生素C被人体小肠上段吸收。一旦吸收，就分布到体内所有的水溶性结构中，正常成人体内的维生素C代谢活性池中约有1500mg维生素C，最高储存峰值为3000mg维生素C。第2页，此课件共30页哦胶原蛋白的合成：胶原蛋白的合成需要维生素C参加，治疗坏血病 预防牙龈萎缩、出血：牙龈是软组织，当缺乏蛋白质、钙、VC时易产生牙龈萎缩、出血。预防动脉硬化：可促进胆固醇的排泄，防止胆固醇在动脉内壁沉积，甚至可以使沉积的粥样斑块溶解。抗氧化剂：可以保护其它抗氧化剂

2、，如维生素A、维生素E、不饱和脂肪酸，防止自由基对人体的伤害。治疗贫血：使难以吸收利用的三价铁还原成二价铁，促进肠道对铁的吸收，提高肝脏对铁的利用率，有助于治疗缺铁性贫血。防癌：丰富的胶原蛋白有助于防止癌细胞的扩散；VC的抗氧化作用可以抵御自由基对细胞的伤害防止细胞的变异；阻断亚硝酸盐和仲胺形成强致癌物亚硝胺。保护作用：在人的生命活动中，谷胱甘肽和酶保证细胞的完整性和新陈代谢的正常进行至关重要。第3页，此课件共30页哦酶：谷胱甘肽是由谷氨酸、胱氨酸和甘氨酸组成的短肽，在体内有氧化还原作用。它有两种存在形式，即氧化型和还原型，还原型对保证细胞膜的完整性起重要作用。VC是一种强抗氧化剂，其本身被氧

3、化，而使氧化型谷胱甘肽还原为还原型谷胱甘肽，从而发挥抗氧化作用。提高人体的免疫力：白细胞含有丰富的VC，当机体感染时白细胞内的VC急剧减少。VC可增强中性粒细胞的趋化性和变形能力，提高杀菌能力。促进淋巴母细胞的生成，提高机体对外来和恶变细胞的识别和杀灭。参与免疫球蛋白的合成。提高CI补体酯酶活性，增加补体CI的产生。促进干扰素的产生，干扰病毒mRNA的转录，抑制病毒的增生。提高机体的应急能力：人体受到异常的刺激，如剧痛、寒冷、缺氧、精神强刺激，会引发抵御异常刺激的紧张状态。该状态伴有一系列身体，包括交感神经兴奋、肾上腺髓质和皮质激素分泌增多。肾上腺髓质所分泌的肾上腺素和去甲肾上腺素是有酪氨酸转

4、化而来，在此过程需要VC的参与。第4页，此课件共30页哦 维生素C在抗病毒和预防病毒性传染病方面具有很高的应用价值。如果我们普遍认识到维生素C预防和治疗病毒传染病症的原理并且按量服用，就可以预防很多病毒的传播。第5页，此课件共30页哦 目前研究维生素C测定方法的报道较多，如滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等，各种方法各有特点。特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法。第6页，此课件共30页哦测定方法测定方法滴定法测定滴定法测定维生素维生素C C 分光光度测分光光度测定维生素定维生素C C 高效液相色谱法高效液相色谱法测定维生素测定维生素C C 第7页，此课件共30页哦2,6-二氯酚靛酚

5、滴定法测定维生素C含量维生素C能还原2,6-二氯酚靛酚染料。维生素C具有还原性的烯二醇基，我们通过氧化还原滴定来测定维生素C第8页，此课件共30页哦 维生素C 2,6-二氯酚靛酚 维生素C 2,6-二氯酚靛酚（还原型）（氧化型，粉红色）（氧化型）（还原型）+=2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。第11页，此课件共30页哦碘量法原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化，用碘滴定VCEC6H6O6/C6H8O6=0.18 ,EI2/I-=0.535 终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为终点反应式：第12页，此课件共30页哦注

6、意！测定时：加HAC使溶液呈弱酸性 原因:(1)Vc还原性很强，在空气中很容易被氧化，在碱性介质中更甚(2)I2在碱性介质中会发生歧化反应加HAC可减少VC的副反应，避免实验误差第13页，此课件共30页哦电位滴定法原理：根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点.Pt为指示电极，甘汞作参比电极E池E+-E-+E液接电位EI2/I-+k(常数)第14页，此课件共30页哦电位滴定法电位滴定法u右图：电位滴定法基本仪器装置计算式：(与碘量法相同)Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%优点：解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题第15页，此课件共30页哦2，4一

7、二硝基苯肼分光光度法一二硝基苯肼分光光度法 原理：维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸反应式：第16页，此课件共30页哦pH5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸第17页，此课件共30页哦脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎脎在500nm波长有最大吸收脎的结构：第18页，此课件共30页哦分光光度法样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处理500nm处测吸光度下图：721型分光光度计第19页，此课件共30页哦差示旋光法差示旋光法选定选定pH为为2.2和和6.2第22页，此课件共30页哦2）差示旋光度与溶液浓度关系吸取2.0、4.0、

8、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容；一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置3min后,用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光度(a)。文献结果：线性方程为a=0 205*C+005，r=099643）辅料干扰试验取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、EDTA、糊精等按处方比例混匀)两份分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容,一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。文献结果：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素C含量的测定不干扰。第23页，

9、此课件共30页哦4）稳定性试验同一测试样品，在120min内，每隔3min测定一次差示旋光度。文献结果：差示旋光度基本不变5）回收率试验精密称取维生素C精制品500.0mg两份，分别置于50mL容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。文献结果：平均回收率为97.8，变异系数cv为1.03第24页，此课件共30页哦6）样品测定取维生素C片剂10片，称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液(相当于含Vc 20mg/mL)，滤去不溶物，测定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其含量。第25页，此课件共30页哦薄层扫描法薄层扫

10、描法 维生素维生素C C具有具有 较强较强还原性还原性，可使，可使蓝色蓝色染料染料2 2，6-6-二氯靛酚钠定量地还原成无色二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺，而本身被氧化成去氢抗坏血的酚亚胺，而本身被氧化成去氢抗坏血酸，利用此特征进行薄层扫描法测定含酸，利用此特征进行薄层扫描法测定含量。量。第26页，此课件共30页哦4）线性实验）线性实验 4.1）对照品溶液的配制）对照品溶液的配制 精密称取维生素精密称取维生素C标准品标准品100mg，用缓冲溶液配成，用缓冲溶液配成lmg/ml的标准溶液。精密称取的标准溶液。精密称取维生素维生素C标准溶液标准溶液1、2、3、4、5ml，分别置于，分别置于10

11、ml容容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。4.2）测定）测定 用用5 l定量毛细管，分别吸取上述溶液各定量毛细管，分别吸取上述溶液各5 l，点于试纸上，点于试纸上。点样后晾干，并将试纸。点样后晾干，并将试纸 固定在固定在20cm20cm玻璃板上，放入薄层扫描仪。测定玻璃板上，放入薄层扫描仪。测定A 的积的积分值分值(峰面积峰面积)作为纵坐标作为纵坐标Y，点样量为横，点样量为横 坐标坐标X，得一，得一直线方程直线方程 Y=15692X+130225，r=09991 第29页，此课件共30页哦5 5）样品的含量测定）样品的含量测定 取维生素取维生素 C C片片1010片，

12、研细，精密片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放入称取平均片重一片的粉末，放入100ml100ml容量瓶中，加入缓冲液至刻度，容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振摇，使维生振摇，使维生 素素 C C溶解，放置、澄溶解，放置、澄清，用吸液管取清，用吸液管取3ml 3ml 移至移至10ml10ml容量瓶容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用中，用缓冲液稀释至刻度。用 5 5 l l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上标准液于同一试纸上 ，然后扫描，然后扫描 测测定峰面积，由工作曲线法计算维生素定峰面积，由工作曲线法计算维生素C C片中的维生素片中的维生素C C含量。含量。第30页，此课件共30页哦