流式培训封闭抗体讲稿.ppt

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1、关于流式培训封闭抗体第一页，讲稿共二十四页哦主要内容主要内容一、流式细胞仪简介一、流式细胞仪简介二、二、人类白细胞抗原（人类白细胞抗原（HLA-B27HLA-B27）中的临床）中的临床应用应用三、三、封闭抗体检测在临床中的应用封闭抗体检测在临床中的应用第二页，讲稿共二十四页哦流式细胞术流式细胞术流动流动细胞细胞测量术测量术Flow Cytometry(FCM)Fluorescence-activated cell-sorting(FACS)第三页，讲稿共二十四页哦流式细胞术流式细胞术第四页，讲稿共二十四页哦流式细胞术流式细胞术快速检测流动的快速检测流动的单细胞或颗粒单细胞或颗粒，达上万个，达上

2、万个/每秒每秒检测物可以是细胞、细菌或各种微粒，检测物可以是细胞、细菌或各种微粒，0.5-50 m mm范围内范围内 多参数同时分析多参数同时分析，FS/SS/FLs(荧光荧光)可分析，可分选可分析，可分选特特 点点特特 点：点：第五页，讲稿共二十四页哦人人类类白白细细胞胞抗抗原原系系统统（Human Human Leucocyte Leucocyte Antigen,HLAAntigen,HLA），俗俗称称为为白白细细胞胞血血型型，是是人人类类的的组组织织相相容容性性抗抗原原，HLAHLA抗原受控于抗原受控于HLAHLA基因。基因。HLAHLA基基因因是是由由一一组组高高度度多多态态性性基基

3、因因组组成成的的染染色色体体区区域域，因因其其产产物物代代表表移移植植供供者者与与受受者者相相互互接接受受的的程程度度，故故又又称其产物为移植抗原或组织相容性抗原。称其产物为移植抗原或组织相容性抗原。一、一、一、一、HLAHLAHLAHLA简介简介简介简介第六页，讲稿共二十四页哦HLAHLA基基因因遗遗传传区区域域位位于于人人类类第第六六号号染染色色体体短短臂臂，区区域域内内包包含含224224个个基基因因座座位位,已已发发现现的的等等位位基基因因数数共共12881288种种。根根据据编编码码分分子子的的特特性性不不同同，可将整个复合体的基因分成：可将整个复合体的基因分成：I I类、类、III

4、I类、类、IIIIII类。类。第七页，讲稿共二十四页哦I I 类基因：区位于着丝点的远端，主要包括类基因：区位于着丝点的远端，主要包括HLA-AHLA-A、B B、C C三个位点，各位点有数目不同的等位基因，三个位点，各位点有数目不同的等位基因，HLA-B27HLA-B27是是B B位位点的一个等位基因点的一个等位基因。II II 类基因区：位于着丝点的近端，主要由类基因区：位于着丝点的近端，主要由DRDR、DQDQ、DPDP三个亚区构成，每个亚区又分若干个位点。三个亚区构成，每个亚区又分若干个位点。在在B B细胞细胞和上表达，这两类抗原都与移植有关和上表达，这两类抗原都与移植有关 III I

5、II 类基因区：类基因区：含有编码补体成分含有编码补体成分C2C2、C4C4、B B因子及因子及TNFTNF、热休克蛋白和、热休克蛋白和2121羟化酶的基因，其产物是一些可溶羟化酶的基因，其产物是一些可溶性蛋白质。性蛋白质。第八页，讲稿共二十四页哦一、HLA-B27HLA-B27抗原属于HLA-类抗原，由和两条肽链组成。第6号染色体的HLA-类基因编码链，15号染色体编码链。基本上表达在机体所有有核细胞上，尤其是淋巴细胞表面含量丰富。目前，在HLA与疾病的关联研究中，较有临床应用价值的当数HLA-B27HLA-B27与强直性脊柱炎的关联与强直性脊柱炎的关联。在诊断和鉴别强直性脊柱炎中有重要的应

6、用价值。第九页，讲稿共二十四页哦 二、二、二、二、HLA-B27HLA-B27检测方法检测方法检测方法检测方法1.HLA-B271.HLA-B27抗原检测抗原检测 C CD DC:C:微量淋巴细胞毒法微量淋巴细胞毒法 FCM:FCM:流式细胞学法流式细胞学法2.HLA-B272.HLA-B27基因学检测基因学检测 荧光定量荧光定量PCRPCR第十页，讲稿共二十四页哦（一）微量淋巴细胞毒法（一）微量淋巴细胞毒法1.原理原理：待检的淋巴细胞表面的HLA-B27抗原与已知的HLA-B27抗体结合，在补体的参入下，导致细胞膜溶解，能透过染料使细胞着色，在显微镜下判断HLA-B27为阳性，不着色为阴性。

7、2.2.方法学应用评价：方法学应用评价：该方法结果稳定，可靠，不需要特殊仪器，是目前通用的方法，一般实验室均可开展。第十一页，讲稿共二十四页哦第十二页，讲稿共二十四页哦（二）流式细胞学法1.原理：利用荧光标记的抗B27的单抗与淋巴细胞表面B27抗原结合，使细胞带有荧光强度，用流式细胞仪检测，判断B27抗原阳性或阴性。2.方法学应用评价：优点：无须分离淋巴细胞，操作简便、快速、标本用量少，自动化程度高，特异性高，稳定性好，重复性高，结果判断准确，减少了人为因素的影响，为目前较为理想的方法。缺点:是仪器昂贵，目前只在较大医院应用。第十三页，讲稿共二十四页哦（三）荧光定量PCR1.实验原理：在PCR

8、反应体系中，加入荧光染料，特异地掺入DNA双链后发射荧光信号，而不掺入荧光染料的DNA分子不会发射任何荧光信号，通过检测荧光信号的强度，达到检测PCR产物扩增的目的。2.优点：基因水平的检测，直接对HLA-B27原基因进行扩增分型，灵敏度高，特异性强。缺点：需要特定的实验仪器及严格的实验条件和熟练操作技术，在临床上普遍开展此项检查有一定的难处。第十四页，讲稿共二十四页哦四、HLA-B27检测与强直性脊柱炎应用评价1.普通人群中HLA-B27阳性率有种族与地区差异：不同作者报道不尽一致，白种人4%-13%，黑种人2%左右，日本人0.2%，中国人2%-19%。2.B27与AS强相关联，中国人AS患

9、者HLA-B27阳性率65-100%。绝大多数B27阳性者并未患AS，所以，B27检测不可以作为AS的筛查指标。3.HLA-B27表达已成为临床诊断与鉴别诊断血清阴性脊柱关节病的最常用实验室检查指标。第十五页，讲稿共二十四页哦4.AS诊断主要靠临床检查和影像学改变，提示的双侧骶髂关节炎和脊柱炎。结合HLA-B27阳性，诊断AS。HLA-B27阴性不能排除AS。5.如果症状和体征脊柱关节病变发生的可能性超过50%，那么，B27阳性显著增加正确诊断的机会。6.一级亲属HLA-B27出现率25%-100%，预测患者家属成员发生AS的可能性。治疗性选择胎儿。7.AS与HLA-B27高度相关，表明AS是

10、一种遗传易感性疾病。第十六页，讲稿共二十四页哦二、流式在封闭抗体中的应用二、流式在封闭抗体中的应用封闭抗体检测概 念为什么做为什么做怎样做如何解读第十七页，讲稿共二十四页哦基本概念基本概念反复自然流产 自然流产连续或不连续发生2次或2次以上者，约占总妊娠数的0.5%3.0%病因 解剖因素、遗传因素、内分泌因素、感染因素、男方因素、免疫学因素（50%）第十八页，讲稿共二十四页哦RSA 自身免疫型：自身免疫型：与自身免疫病相关的自身抗体相关，如SLE、RA等 同种免疫型同种免疫型：封闭抗体，如：抗HLA抗体、抗滋养细胞淋巴细胞交叉反应抗原抗体（TLX）;非特异性BA、特异性非细胞毒抗体、抗独特型抗

11、体等 主动免疫疗法所产生的BA部分是针对TLX的，因此，当夫妻双方TLX相似时，不能激发母体产生BA 第十九页，讲稿共二十四页哦封闭抗体的作用 1.一种抗配偶淋巴细胞的特异性IgG类抗体，存在于正常孕妇的血清中，能够抑制淋巴细胞反应，封闭母体淋巴细胞对胚胎滋养层的细胞毒作用。2.防止辅助性T细胞识别胎儿抗原的抑制物，并可阻止母亲免疫系统对胚胎的攻击。3.封闭同种抗原刺激的淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子。封闭抗体的作用第二十页，讲稿共二十四页哦父系抗原母体淋巴细胞封闭抗体没有封闭抗体胎儿不受母体攻击胎儿被母体攻击，导致流产第二十一页，讲稿共二十四页哦封闭抗体检测方法封闭抗体检测方法-如何做如何做细胞毒试验ELISA流式细胞术第二十二页，讲稿共二十四页哦流式细胞术检测封闭抗体流程标本：男女双方EDTA抗凝全血方法：室温孵育 裂解红细胞 上机 计算公式：封闭效率=对照管CD%-实验管CD%结果判定：1.三项中有一项出现负值即判断封闭抗体缺乏 2.封闭效率均为正值，判断阳性，正常 男方全血男方全血男方血浆男方血浆女方血浆女方血浆混合单抗混合单抗对照管10010020实验管10010020第二十三页，讲稿共二十四页哦感感谢谢大大家家观观看看第二十四页，讲稿共二十四页哦