临床全自动生化分析仪精选PPT.ppt

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1、关于临床全自动生化分析仪第1页，讲稿共139张，创作于星期一教学目标和要求教学目标和要求掌握掌握自动生化分析仪的分析方法类型及其自动生化分析仪的分析方法类型及其 特点，连特点，连续监测法的理论续监测法的理论K值，必选的分析参数，双波长测值，必选的分析参数，双波长测定的作用，双试剂的优点，分析仪与手工法比较定的作用，双试剂的优点，分析仪与手工法比较的优点和缺点。的优点和缺点。熟悉熟悉分立式自动生化分析仪的基本结构，备选的分分立式自动生化分析仪的基本结构，备选的分析参数，测定过程的自动监测，校准方式和校准要求，析参数，测定过程的自动监测，校准方式和校准要求，影响分析仪分析速度的因素和分析仪性能指标

2、。影响分析仪分析速度的因素和分析仪性能指标。了解了解某些分析参数的特殊意义，分析仪的工作过程某些分析参数的特殊意义，分析仪的工作过程和操作方法，干片式分析仪的结构和分析原理，常用和操作方法，干片式分析仪的结构和分析原理，常用分析仪的分析性能。分析仪的分析性能。第2页，讲稿共139张，创作于星期一 自动生化分析仪自动生化分析仪由电脑控制，将生化分由电脑控制，将生化分析中的取样析中的取样(sampling)(sampling)、加试剂、混匀、保、加试剂、混匀、保温反应、检测温反应、检测(detect)(detect)、结果计算、可靠性判、结果计算、可靠性判断、显示和打印、以及清洗断、显示和打印、以

3、及清洗(cleaning)(cleaning)等步骤组等步骤组合在一起自动进行操作的分析仪器。合在一起自动进行操作的分析仪器。第3页，讲稿共139张，创作于星期一 自动生化分析技术的应用自动生化分析技术的应用提高了临床生化检验质量和速度；提高了临床生化检验质量和速度；减轻检验人员的劳动强度；减轻检验人员的劳动强度；节约样品和试剂；节约样品和试剂；增加检验项目；增加检验项目；提高检测精密度，减少实验误差；提高检测精密度，减少实验误差；并且有利于临床检验标准化的实现并且有利于临床检验标准化的实现。不足：温度、试剂、反应时间、加样不足：温度、试剂、反应时间、加样 第4页，讲稿共139张，创作于星期一

4、自动生化分析仪按其工作方式不同分为自动生化分析仪按其工作方式不同分为连续流动式连续流动式(continuous(continuousstreaming movementstreaming movementstyle)style)或管道式：已很少用或管道式：已很少用离心式离心式(centrifugation style)(centrifugation style)：已很少用：已很少用分立式分立式(discrete(discretestyle)style)：应用最广泛：应用最广泛干片技术干片技术(drying style)(drying style)：急诊多用：急诊多用第5页，讲稿共139张，创作

5、于星期一第一节第一节 分立式自动生化分析仪的结构分立式自动生化分析仪的结构 完全完全模仿手工操作模仿手工操作方式设计，各部分结构对方式设计，各部分结构对应手工操作的每个步骤包括取样、加试剂、混匀、应手工操作的每个步骤包括取样、加试剂、混匀、孵育、检测、结果计算、器材清洗等孵育、检测、结果计算、器材清洗等 。第6页，讲稿共139张，创作于星期一一、基本结构（一）样品盘或样品架（一）样品盘或样品架 样品盘样品盘（specimen discspecimen disc）：放置待测样品的转盘，）：放置待测样品的转盘，可放置一定数量的可放置一定数量的样品杯（样品杯（specimen cupspecimen

6、 cup）或不同规格的或不同规格的采血试管采血试管，通过样品盘的转动来控制通过样品盘的转动来控制不同样品的进样。不同样品的进样。第7页，讲稿共139张，创作于星期一 样品架样品架（specimen stockspecimen stock）：每个样品架可）：每个样品架可放数只样品杯或采血试管（多为放数只样品杯或采血试管（多为5 5只或只或1010只）。样只）。样品架的移动通过品架的移动通过样品传送带样品传送带来进行。样品架来进行。样品架 上上 的的 条形码条形码（barcodebarcode）或编码孔可识别样品）或编码孔可识别样品架号架号及样及样品品位置号位置号。第8页，讲稿共139张，创作于星

7、期一样品架的优点样品架的优点随着样品架移动及样品的被检测，可不断随着样品架移动及样品的被检测，可不断追加已放置样品杯或采血试管的样品架；追加已放置样品杯或采血试管的样品架；通过样品架的通过样品架的移动能将样品传移动能将样品传送到另一个送到另一个分析分析模块模块（analysisanalysisdie-blockdie-block）甚至）甚至另一台分析仪上另一台分析仪上再进行分析。再进行分析。第9页，讲稿共139张，创作于星期一（二）试剂室和试剂瓶（二）试剂室和试剂瓶 转盘式试剂室转盘式试剂室（reagent chamberreagent chamber）：内装放）：内装放置试剂瓶的转盘，一般可

8、放置置试剂瓶的转盘，一般可放置2020种以上具有一定种以上具有一定形状的塑料试剂瓶，大型分析仪可放置形状的塑料试剂瓶，大型分析仪可放置30304545种试种试剂瓶。剂瓶。试剂瓶容量试剂瓶容量一般为一般为1010100ml100ml。通过试剂转盘的通过试剂转盘的转动来选用不同转动来选用不同试剂。试剂。第10页，讲稿共139张，创作于星期一 试剂架式试剂室试剂架式试剂室：可放置容量为：可放置容量为250ml250ml500ml500ml的不同形状的试剂瓶，试剂瓶不能转动，但每个试剂的不同形状的试剂瓶，试剂瓶不能转动，但每个试剂瓶内引出一条瓶内引出一条试剂管路试剂管路及其喷嘴，即每种试剂均有专及其喷

9、嘴，即每种试剂均有专用的加试剂装置，因而不同试剂间无用的加试剂装置，因而不同试剂间无交叉污染交叉污染。但试剂管路较长使试剂存在一定的死体积，因而适但试剂管路较长使试剂存在一定的死体积，因而适宜用于使用频率高、消耗试剂量大的检测项目。宜用于使用频率高、消耗试剂量大的检测项目。第11页，讲稿共139张，创作于星期一 大型分析仪同时备有大型分析仪同时备有第一试剂室第一试剂室和和第二试剂室第二试剂室，即具备对同一检测项目添加两次试剂的功能，个即具备对同一检测项目添加两次试剂的功能，个别分析仪还具有加入第三试剂的功能。别分析仪还具有加入第三试剂的功能。对有条形码装置的仪器可将带条形码的试剂瓶放在对有条形

10、码装置的仪器可将带条形码的试剂瓶放在试剂室转盘试剂室转盘上的任意位置，仪上的任意位置，仪器能自动识别试剂器能自动识别试剂的种类、批号和有的种类、批号和有效期。试剂室均具效期。试剂室均具有有冷藏装置冷藏装置，可将，可将试剂保存在试剂保存在4 41010。第12页，讲稿共139张，创作于星期一（三）反应杯和反应盘（三）反应杯和反应盘 反应杯反应杯（reaction reaction cupcup）是样品与试剂进行化学）是样品与试剂进行化学反应的场所，同时用作比色反应的场所，同时用作比色杯。由透光特性好的硬塑料杯。由透光特性好的硬塑料或石英玻璃制成。比色杯光或石英玻璃制成。比色杯光径不同分析仪有径不

11、同分析仪有0.50.50.70.7厘厘米不等，大多数分析仪在计米不等，大多数分析仪在计算时将其折算为算时将其折算为1 1厘米光径。厘米光径。第13页，讲稿共139张，创作于星期一 反应盘反应盘（reaction discreaction disc）：）：100100只或更只或更多的反应杯围成一圈组成。在测定过程中反应多的反应杯围成一圈组成。在测定过程中反应盘作恒速的圆周运动，在静止时向反应杯中加盘作恒速的圆周运动，在静止时向反应杯中加入样品、试剂或进行搅拌混匀，当反应盘恒速入样品、试剂或进行搅拌混匀，当反应盘恒速圆周运动经过检测窗口的比色杯可进行吸光度圆周运动经过检测窗口的比色杯可进行吸光度检

12、测。检测。第14页，讲稿共139张，创作于星期一（四）取样和加试剂装置（四）取样和加试剂装置 1 1取样装置取样装置（sampling sampling assemblyassembly）：）：由取样针、取样臂、取样管路、取样注射器和由取样针、取样臂、取样管路、取样注射器和阀门组成，能定量阀门组成，能定量吸取样品并加入到反吸取样品并加入到反应杯。应杯。不同分析仪的取样不同分析仪的取样容量有不同的范围，容量有不同的范围，一般为一般为2 235l35l，步，步进进0.10.1微升不等。微升不等。第15页，讲稿共139张，创作于星期一 取样针设有电子取样针设有电子液液面感应器面感应器，取样针于样，取

13、样针于样品上方下降，一旦接触品上方下降，一旦接触到样品液面即停止下降到样品液面即停止下降而开始吸样。适用于不而开始吸样。适用于不同的采血试管上机测定。同的采血试管上机测定。第16页，讲稿共139张，创作于星期一 多数加样装置设有多数加样装置设有防撞功能防撞功能，遇到阻碍时，遇到阻碍时取样针立即停止运动并报警。某些取样针还取样针立即停止运动并报警。某些取样针还设有设有阻塞报警功能阻塞报警功能，当取样针被样品中的凝，当取样针被样品中的凝块、纤维蛋白等物质阻塞时，机器会自动块、纤维蛋白等物质阻塞时，机器会自动报警、冲洗取样针，并跳过当前样品，进报警、冲洗取样针，并跳过当前样品，进行下一个样品的取样检

14、测行下一个样品的取样检测。第17页，讲稿共139张，创作于星期一取样针防交叉污染（取样针防交叉污染（crossing contamination）措施）措施 绝大多数采用绝大多数采用水洗方式水洗方式（又有瀑布式和涌泉（又有瀑布式和涌泉式之分），在吸取另一个样品前对接触样品的样品式之分），在吸取另一个样品前对接触样品的样品针内外壁进行冲洗；针内外壁进行冲洗；也有采用也有采用化学惰性液化学惰性液（chemical inertiachemical inertiafluidfluid）膜的方式来隔绝样品与取样针内外壁之间的）膜的方式来隔绝样品与取样针内外壁之间的接触。接触。第18页，讲稿共139张，创

15、作于星期一2 2加试剂装置加试剂装置 加试剂装置用于定量吸取试剂加入反应杯，加试剂装置用于定量吸取试剂加入反应杯，可加入试剂容量一般为可加入试剂容量一般为2020350l350l。步进。步进1 15 5微微升不等，取样精度在升不等，取样精度在1 1微升左右。微升左右。注射器方式注射器方式：组成部件与取样装置类似，其液：组成部件与取样装置类似，其液面感应系统能检测并提示面感应系统能检测并提示试剂剩余量试剂剩余量。灌注式灌注式：具有许多条试剂管路及其喷嘴，每种试：具有许多条试剂管路及其喷嘴，每种试剂单独使用一条试剂管路和喷嘴，不存在各试剂间的剂单独使用一条试剂管路和喷嘴，不存在各试剂间的交叉污染。

16、交叉污染。第19页，讲稿共139张，创作于星期一 大型自动生化仪多具有两组加试剂装置，可大型自动生化仪多具有两组加试剂装置，可分别从两个试剂室吸取同一个检测项目的分别从两个试剂室吸取同一个检测项目的第一试第一试剂剂和和第二试剂第二试剂，大多数分析仪所有检测项目加入，大多数分析仪所有检测项目加入第二试剂的时间点统一固定为第二试剂的时间点统一固定为1 1个或个或2 2个点，也有个点，也有分析仪有分析仪有3 3个加入时间点可供选择。个加入时间点可供选择。第20页，讲稿共139张，创作于星期一（五）（五）混匀与混匀与搅拌装置搅拌装置 反应杯里的样品与试剂通过反应杯里的样品与试剂通过搅拌棒搅拌棒搅拌而充

17、搅拌而充分混匀，搅拌棒的形状为扁平棒状或扁平螺旋分混匀，搅拌棒的形状为扁平棒状或扁平螺旋状，表面的疏水材料能防止反应液被搅拌棒所状，表面的疏水材料能防止反应液被搅拌棒所携带。其工作方式大多为携带。其工作方式大多为旋转式搅拌旋转式搅拌，也有，也有震震动式搅拌动式搅拌方式。也设置了防止搅拌棒在不同反应液方式。也设置了防止搅拌棒在不同反应液之间携带交叉污染的清洗措施。之间携带交叉污染的清洗措施。第21页，讲稿共139张，创作于星期一（六）温控和定时系统（六）温控和定时系统 温控系统温控系统使反应杯浸浴在恒温环境：使反应杯浸浴在恒温环境：恒温恒温循环水浴方式循环水浴方式：温度传递速度快，保养要求：温度

18、传递速度快，保养要求较高。较高。恒温恒温空气浴方式空气浴方式：温度传递速度不如恒温水浴循：温度传递速度不如恒温水浴循环方式，保养简单。环方式，保养简单。温度控制器能使循环水或循环空气的温度控制在温度控制器能使循环水或循环空气的温度控制在规定温度规定温度0.10.1。规定温度可有。规定温度可有3737和和3030两种选两种选择，一般固定在择，一般固定在3737。第22页，讲稿共139张，创作于星期一 定时系统定时系统：不同分析仪对检测吸光度的不同分析仪对检测吸光度的间隔时间间隔时间有有不同的规定，不同的规定，反应时间反应时间应该设定为此间隔时应该设定为此间隔时间的倍数。总反应时间一般限制在间的倍

19、数。总反应时间一般限制在8.5-10min8.5-10min内，内，个别分析仪可以设定为个别分析仪可以设定为1515或或22min22min等。等。第23页，讲稿共139张，创作于星期一（七）光路和检测系统（七）光路和检测系统 自动生化分析仪以自动生化分析仪以紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法为其中心和主要的检测手段，与一般分光光度计为其中心和主要的检测手段，与一般分光光度计一样，其光路和检测系统由一样，其光路和检测系统由光源光源、单色器单色器和和检检测器测器组成。组成。第24页，讲稿共139张，创作于星期一1 1光源（光源（light source）一般为一般为卤素钨丝灯卤素钨丝灯（hal

20、ogenhalogentungsten filamenttungsten filamentlamplamp），也有采用长），也有采用长寿命的寿命的氙灯氙灯（xe lampxe lamp），要求在），要求在340340800nm800nm波长范围内能发射出稳定且较平坦的光能。波长范围内能发射出稳定且较平坦的光能。第25页，讲稿共139张，创作于星期一2 2单色器（单色器（monochromato）干涉滤光片干涉滤光片（interference filterinterference filter）分光系）分光系统：常带有统：常带有340340、380380、405405、500500、550550

21、、600600、660nm660nm等几种滤光片，各滤光片固定在转盘上，以等几种滤光片，各滤光片固定在转盘上，以转转盘旋转的方式来选择波长盘旋转的方式来选择波长。这种分光系统在半。这种分光系统在半自动和小型自动分析仪中常用，且不能同一时自动和小型自动分析仪中常用，且不能同一时刻进行多波长检测。刻进行多波长检测。光栅光栅（rasterraster）分光系统：常在）分光系统：常在340340（或（或293293）800nm800nm范围内选择范围内选择10101313种固定的单色光。种固定的单色光。第26页，讲稿共139张，创作于星期一前分光和后分光方式前分光和后分光方式 光栅分光有前分光和后分光

22、两种方式，光光栅分光有前分光和后分光两种方式，光源首先经过单色器分光，然后透射到比色溶液源首先经过单色器分光，然后透射到比色溶液的方式为的方式为前分光前分光。目前以后分光方式为多见，。目前以后分光方式为多见，其优点是单色器中没有转动部分，双波长在其优点是单色器中没有转动部分，双波长在同一时刻检测，因而提高了检测的精度和速同一时刻检测，因而提高了检测的精度和速度。度。第27页，讲稿共139张，创作于星期一 光源先透过比色杯中的反应液再照射到光光源先透过比色杯中的反应液再照射到光栅上，经色散后所有固定单色光同时通过各自栅上，经色散后所有固定单色光同时通过各自的光纤传输到对应的检测器，微处理器按该分

23、的光纤传输到对应的检测器，微处理器按该分析项目的分析参数，析项目的分析参数，后分光方式后分光方式 选择其中一选择其中一个或两个波长个或两个波长（双波长方式）（双波长方式）的吸光度值，用的吸光度值，用于分析结果的计于分析结果的计算。算。第28页，讲稿共139张，创作于星期一3 3检测器（检测器（detector）由光敏二极管及放大电路组成，可按设定的间隔由光敏二极管及放大电路组成，可按设定的间隔时间连续测定各反应杯的吸光度值。时间连续测定各反应杯的吸光度值。第29页，讲稿共139张，创作于星期一（八）数据处理系统（八）数据处理系统 具有多种数据处理功能。具有多种数据处理功能。计算测定结果计算测定

24、结果 判断结果准确性判断结果准确性 保存各种数据保存各种数据 自我诊断功能自我诊断功能 第30页，讲稿共139张，创作于星期一（九）清洗系统（九）清洗系统 反应杯反应杯清洗装置清洗装置：一个反应杯内的反应和检测：一个反应杯内的反应和检测结束后，该反应杯就被冲洗系统及时冲洗。结束后，该反应杯就被冲洗系统及时冲洗。清洗过程：由废液针吸取反应杯内废液，加入清洗过程：由废液针吸取反应杯内废液，加入清洗剂清洗剂（detergentdetergent）冲洗并抽干后，再经数次去离子）冲洗并抽干后，再经数次去离子水冲洗及抽干，然后做水冲洗及抽干，然后做杯空白杯空白的吸光度检查，若通过的吸光度检查，若通过检查则

25、此反应杯可继续循环使用；更高级的仪器带有检查则此反应杯可继续循环使用；更高级的仪器带有风干技术。如果不能通过，分析仪将提示该反应杯异风干技术。如果不能通过，分析仪将提示该反应杯异常，并跳过此反应杯使用下一个反应杯，或提示更换常，并跳过此反应杯使用下一个反应杯，或提示更换反应杯。反应杯。第31页，讲稿共139张，创作于星期一样品针、试剂针和搅拌棒清洗样品针、试剂针和搅拌棒清洗 一般在用于下一个样品、试剂或反应杯前即一般在用于下一个样品、试剂或反应杯前即清洗一次，此时多数为去离子水冲洗，在一批检清洗一次，此时多数为去离子水冲洗，在一批检测完成后，则自动进行清洗剂清洗。测完成后，则自动进行清洗剂清洗

26、。清洗剂可配有清洗剂可配有1 1至至3 3种可供选择，除一种常种可供选择，除一种常规清洗剂外，其它规清洗剂外，其它1 1至至2 2种可按设定对试剂针、样种可按设定对试剂针、样品针或反应杯进行补充清洗。品针或反应杯进行补充清洗。第32页，讲稿共139张，创作于星期一二、组合式自动分析仪二、组合式自动分析仪（一）（一）组合式自动生化分析仪组合式自动生化分析仪 将相同或不同的两台或两台以上的分析部分，即将相同或不同的两台或两台以上的分析部分，即分析模块分析模块进行组合连接，采用样品架方式使样品通过进行组合连接，采用样品架方式使样品通过传输线在不同分析模块间进行传递并检测。各分析模块传输线在不同分析模

27、块间进行传递并检测。各分析模块所分析项目的组合提高了分析效率，这些分析模块除了所分析项目的组合提高了分析效率，这些分析模块除了基于紫外基于紫外-可见光谱分析原理的分析模块外，还有基于可见光谱分析原理的分析模块外，还有基于离子离子选择电极选择电极的电解质分析模块，甚至还可组合建立在的电解质分析模块，甚至还可组合建立在免免疫发光疫发光分析原理的免疫分析模块。分析原理的免疫分析模块。第33页，讲稿共139张，创作于星期一组合式分析仪组合式分析仪i2000SRImmunoassay Modulec8000Clinical Chemistry Moduleci8200ImmunoChemistry In

28、tegration第34页，讲稿共139张，创作于星期一（二）实验室自动化系统（二）实验室自动化系统（laboratory automation systemlaboratory automation system，LASLASLASLAS）包括包括样品前处理系统样品前处理系统、样品输送系统样品输送系统和和各样品分析各样品分析系统系统。不同功能的各模块以同一标准来连接，通过计算。不同功能的各模块以同一标准来连接，通过计算机控制运行。随着检测样品量的增加，只需添加需要的机控制运行。随着检测样品量的增加，只需添加需要的新模块，将其安装连接，即可扩大处理能力。这样可避新模块，将其安装连接，即可扩大处

29、理能力。这样可避免同类硬件和功能的重复投资，节省占地面积所需的基免同类硬件和功能的重复投资，节省占地面积所需的基础投入。当一模块发生故障时，其余模块仍在运行，在础投入。当一模块发生故障时，其余模块仍在运行，在2424小时内任意时间对模块进行交替保养维护，不影响小时内任意时间对模块进行交替保养维护，不影响日常工作。日常工作。第35页，讲稿共139张，创作于星期一样品前处理系统样品前处理系统 能独立工作，由样品投入部、离心分离部、开能独立工作，由样品投入部、离心分离部、开栓部、在线分注部、非在线分注部、贴条码部、盖栓部、在线分注部、非在线分注部、贴条码部、盖栓部、样品分注收存部、样品接收部等模块构

30、成前栓部、样品分注收存部、样品接收部等模块构成前处理系统，每一模块既是系统的部分，又是独立的处理系统，每一模块既是系统的部分，又是独立的单元，可根据不同需要选择使用，具有灵活性和扩单元，可根据不同需要选择使用，具有灵活性和扩展性。展性。也可通过样品输送部分与样品分析系统连接，也可通过样品输送部分与样品分析系统连接，组成类似工业领域的生产流水线，从而实现了从采组成类似工业领域的生产流水线，从而实现了从采血到报告的实验室的全自动化。血到报告的实验室的全自动化。第36页，讲稿共139张，创作于星期一第二节第二节 生化自动化分析方法概要生化自动化分析方法概要 一、分析方法分类一、分析方法分类（一）（一

31、）终点法终点法（end assay）被测物质在反应过程中完全被转变为产物，到被测物质在反应过程中完全被转变为产物，到达反应终点，根据终点吸光度的大小求出被测物浓达反应终点，根据终点吸光度的大小求出被测物浓度，称为终点法。该法称为平衡法更为恰当。从度，称为终点法。该法称为平衡法更为恰当。从时时间间-吸光度曲线吸光度曲线来看，到达反应终点或平衡点时，来看，到达反应终点或平衡点时，吸光度将不再变化。终点法参数设置简单，反应吸光度将不再变化。终点法参数设置简单，反应时间一般较长，精密度较好。时间一般较长，精密度较好。第37页，讲稿共139张，创作于星期一终点时间的确定终点时间的确定根据时间根据时间-吸

32、光度曲线来确定，吸光度曲线来确定，根据被测物反应终点，结合干扰物的反根据被测物反应终点，结合干扰物的反应情况来确定。应情况来确定。第38页，讲稿共139张，创作于星期一1一点终点法一点终点法（one point end assayone point end assay）在反应到达终点，即在时间在反应到达终点，即在时间-吸光度曲线上吸光度曲线上吸光度不再改变时选择一个终点吸光度值，吸光度不再改变时选择一个终点吸光度值，用于计算结果。用于计算结果。结果计算公式：待测物浓度结果计算公式：待测物浓度C CU U=（待测吸光度（待测吸光度A AU U试剂空白吸光度试剂空白吸光度A AB B）KKK K为

33、校准系数为校准系数 第39页，讲稿共139张，创作于星期一图4-3一点终点法反应曲线一点终点法反应曲线 A单试剂一点终点法 B双试剂一点终点法第40页，讲稿共139张，创作于星期一2两点终点法两点终点法（two point end two point end assayassay）在被测物反应或指示反应尚未开始时，选择第在被测物反应或指示反应尚未开始时，选择第一个吸光度，在反应到达终点或平衡时选择第二一个吸光度，在反应到达终点或平衡时选择第二个吸光度，此两点吸光度之差用于计算结果。个吸光度，此两点吸光度之差用于计算结果。计算公式为：计算公式为：C CU U=（待测吸光度（待测吸光度A A2 2

34、待测吸光度待测吸光度A A1 1）KK。第41页，讲稿共139张，创作于星期一图图4-4两点终点法反应曲线两点终点法反应曲线 A单试剂两点终点法 B双试剂两点终点法 第42页，讲稿共139张，创作于星期一 该法能有效地消除该法能有效地消除溶血溶血(hemolysis)(hemolysis)、黄疸（黄疸（icterusicterus）和）和脂浊（脂浊（lipo-turbidlipo-turbid）等样品本身光吸收造成等样品本身光吸收造成的干扰。的干扰。图图4-5 4-5 血红蛋白、胆红素和脂浊的血红蛋白、胆红素和脂浊的光吸收曲线光吸收曲线 第43页，讲稿共139张，创作于星期一（二）固定时间法（

35、二）固定时间法（fixed-time assayfixed-time assay）指在时间指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，此吸光度曲线上选择两个测光点，此两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，这两两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，这两点的吸光度差值用于结果计算。有时也称此法为点的吸光度差值用于结果计算。有时也称此法为两点法两点法 。计算公式与两点终点法相同，计算公式与两点终点法相同，C CU U=(A=(A2 2-A-A1 1)K)K。第44页，讲稿共139张，创作于星期一图图4-6固定时间法反应曲线固定时间法反应曲线 A单试剂固定时间法 B双试剂固定时间法该分析方法有助于解决某些反

36、应的非特异性问题。该分析方法有助于解决某些反应的非特异性问题。第45页，讲稿共139张，创作于星期一（三）（三）连续监测法连续监测法（continuous monitoring assaycontinuous monitoring assay）又称又称速率法速率法（rate assayrate assay），是在测定酶），是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间间-吸光度曲线中线性期（各两点间吸光度差吸光度曲线中线性期（各两点间吸光度差值相等）的吸光度值，并以此线性期的单位吸值相等）的吸光度值，并以此线性期的单位吸光度变化值（光度变化值（A/mi

37、nA/min）计算结果。）计算结果。第46页，讲稿共139张，创作于星期一图图4-7连续监测法反应曲线连续监测法反应曲线 A单试剂连续监测法 B双试剂连续监测法 第47页，讲稿共139张，创作于星期一酶促反应的线性段酶促反应的线性段 1 1及及5 5值偏小，而值偏小，而2 23 34 4，故，故A A1 1点至点至A A4 4点属线性段点属线性段 第48页，讲稿共139张，创作于星期一连续监测法的优点连续监测法的优点 可以确定线性期并计算可以确定线性期并计算A/minA/min，根据此值再准，根据此值再准确地计算酶活性，因而使自动生化分析仪在酶活确地计算酶活性，因而使自动生化分析仪在酶活性测定

38、方面显著地优于手工法。连续监测法也可性测定方面显著地优于手工法。连续监测法也可用于测定呈线性反应的代谢物浓度，一般是某些用于测定呈线性反应的代谢物浓度，一般是某些基于酶法测定的代谢物。基于酶法测定的代谢物。酶活性（酶活性（U/LU/L）A/minA/min理论（或校准）理论（或校准）K K值。值。代谢物浓度代谢物浓度C CU U=A/min=A/min校准校准K K值。值。第49页，讲稿共139张，创作于星期一1 1理论理论K K值值 多用于酶活性测定中，因酶活性尚无公认多用于酶活性测定中，因酶活性尚无公认的校准品可用。根据酶活性的国际单位定义得的校准品可用。根据酶活性的国际单位定义得出酶活性

39、的计算公式为：出酶活性的计算公式为：酶活性酶活性 (U/L)=A/min(U/L)=A/min将此式中将此式中 以以K K来表示，即为：来表示，即为：理论理论K K值值-可作为分析参数输入到分析仪中。可作为分析参数输入到分析仪中。第50页，讲稿共139张，创作于星期一采用理论采用理论K K值的前提值的前提 应当是样品和试剂的加量准确、比色杯光径应当是样品和试剂的加量准确、比色杯光径准确、温度控制精确以及波长准确等。但事实准确、温度控制精确以及波长准确等。但事实上由于各型分析仪在注射器容积步进电机精度、上由于各型分析仪在注射器容积步进电机精度、滤光片带宽等方面的差异，可造成样品和试剂滤光片带宽等

40、方面的差异，可造成样品和试剂加量以及吸光度检测的偏差，温度的影响有时加量以及吸光度检测的偏差，温度的影响有时也非常大。也非常大。第51页，讲稿共139张，创作于星期一 由于由于摩尔吸光系数摩尔吸光系数受比色杯光径、波长等的受比色杯光径、波长等的影响，书本上或试剂厂家提供的理论摩尔吸光系数影响，书本上或试剂厂家提供的理论摩尔吸光系数可能与实际所用分析仪所测的不同，因而有必要获可能与实际所用分析仪所测的不同，因而有必要获得实际的摩尔吸光系数，然后来计算理论得实际的摩尔吸光系数，然后来计算理论K K值。值。第52页，讲稿共139张，创作于星期一（1）NADH（NADPH）“摩尔吸光系摩尔吸光系”数的

41、测定数的测定 NADH NADH（NADPHNADPH）没有标准纯制品，而）没有标准纯制品，而且配成溶液后稳定性又较差，不能直接且配成溶液后稳定性又较差，不能直接用用NADH NADH 或或NADPHNADPH标准液来校正仪器，须通标准液来校正仪器，须通过有过有NADNAD+(NADP(NADP+)参与的反应途径。参与的反应途径。第53页，讲稿共139张，创作于星期一用已糖激酶用已糖激酶 (HK)(HK)或葡萄糖脱氢酶或葡萄糖脱氢酶(GD)(GD)方法测定葡方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与萄糖时，葡萄糖的消耗与NADHNADH的生成呈等摩尔关的生成呈等摩尔关系。葡萄糖有标准纯制品。系。葡萄糖有

42、标准纯制品。根据公式根据公式A=bCA=bC，已知比色杯光径，已知比色杯光径b b和葡萄糖标准和葡萄糖标准液浓度，测得葡萄糖标准管的吸光度液浓度，测得葡萄糖标准管的吸光度A A后便可计后便可计算出算出NADHNADH（NADPHNADPH）的摩尔吸光系数）的摩尔吸光系数为为 A/bCA/bC。第54页，讲稿共139张，创作于星期一测定方法测定方法 葡萄糖标准液浓度为葡萄糖标准液浓度为1Ommo1/L(0.01mol/L)1Ommo1/L(0.01mol/L)，标准，标准液加入量为液加入量为3.5L3.5L，酶试剂加入量为，酶试剂加入量为335L335L，比色杯光，比色杯光径为径为0.7cm0.

43、7cm，在，在340nm340nm测得吸光度为测得吸光度为0.4650.465，则实测，则实测NADHNADH摩尔吸光系数摩尔吸光系数 64246424，即在此台分析仪上，即在此台分析仪上 340nm340nm波长处测得波长处测得NADHNADH（NADPHNADPH）的摩尔吸光系数为）的摩尔吸光系数为64246424，而理论上，而理论上NADHNADH（NADPHNADPH）的）的为为62206220。第55页，讲稿共139张，创作于星期一（2 2）“色素原色素原”酶促产物酶促产物在在405nm405nm波长摩尔吸光系数的测定波长摩尔吸光系数的测定 有许多酶底物为人工合成的有许多酶底物为人工

44、合成的“色素原色素原”底物，其本身无色，经酶作用后释放出有色底物，其本身无色，经酶作用后释放出有色的反应产物，在的反应产物，在405nm405nm波长具有吸收峰。波长具有吸收峰。ALPALP底物底物磷酸对硝基苯酚磷酸对硝基苯酚 (4-Nitrophenyl phosphate(4-Nitrophenyl phosphate，4-NPP)4-NPP)经酶作用后释放出黄色的对硝基苯酚经酶作用后释放出黄色的对硝基苯酚(4-Nitrophenol(4-Nitrophenol，4-NP)4-NP)GGTGGT底物底物-L-L-谷氨酰对硝基苯胺谷氨酰对硝基苯胺(-L-Glutamyl-p-nitroani

45、lide)(-L-Glutamyl-p-nitroanilide)或或-L-L-谷氨酰谷氨酰-3-3-羟基羟基-对硝基苯胺对硝基苯胺(-L-Glutamyl-3-carboxyl-p-nitroan)(-L-Glutamyl-3-carboxyl-p-nitroan)经酶作用后释放出黄色的对硝基苯胺经酶作用后释放出黄色的对硝基苯胺(p-Nitroaniline(p-Nitroaniline，4-NA)4-NA)或对硝基或对硝基-5-5-氨基苯甲酸氨基苯甲酸(2-amino-nitrobenzoicacid(2-amino-nitrobenzoicacid，ANBA)ANBA)。第56页，讲稿共

46、139张，创作于星期一以对硝基苯酚的摩尔吸光系数测定为例以对硝基苯酚的摩尔吸光系数测定为例试剂：试剂：4-NP4-NP标准储存液标准储存液(1Ommo1/L)(1Ommo1/L)4-NP 4-NP标准应用液标准应用液(2.5mmo1/L(2.5mmo1/L，以，以0.84mol/L AMP0.84mol/L AMP缓冲液稀释而成缓冲液稀释而成)底物缓冲液底物缓冲液(l5mmol/L 4-NPP(l5mmol/L 4-NPP配于配于0.84mol/L 0.84mol/L AMP-HCLAMP-HCL缓冲液中，缓冲液中，37,pH l0.0937,pH l0.09土土0.02)0.02)。第57页

47、，讲稿共139张，创作于星期一测定测定方法方法 4-NP4-NP标准液加入量为标准液加入量为5L5L，底物缓冲液加入，底物缓冲液加入量为量为350L350L，波长，波长405nm405nm，光径，光径0.7cm0.7cm，温度，温度3737，测定得吸光度为，测定得吸光度为A A1 1；另用蒸馏水代替；另用蒸馏水代替4-4-NPNP标准液，按上述方法测定其吸光度为标准液，按上述方法测定其吸光度为A A2 2，4-NP4-NP标准液吸光度标准液吸光度A=AA=A1 1-A-A2 2，若测得，若测得AA为为0.4600.460，则实测，则实测4-NP4-NP摩尔吸光系数摩尔吸光系数18662 186

48、62 第58页，讲稿共139张，创作于星期一2校准校准K K值值 酶活性校准品经校准操作后由分析仪自动计算酶活性校准品经校准操作后由分析仪自动计算得出。在进行酶学测定时，如果分析条件的变化如得出。在进行酶学测定时，如果分析条件的变化如温度、样品试剂加量和吸光度检测偏差可同等程度温度、样品试剂加量和吸光度检测偏差可同等程度地影响校准物和待测样品，则使用校准品能进行补地影响校准物和待测样品，则使用校准品能进行补偿。一般来说以使用偿。一般来说以使用校准校准K K值值为好，但必须有两个为好，但必须有两个先决条件：先决条件：必须使用配套的试剂；必须使用配套的试剂；必须使用必须使用配套的高质量的校准品，该

49、校准品应具有配套的高质量的校准品，该校准品应具有溯源性溯源性。第59页，讲稿共139张，创作于星期一（四）透射比浊法（四）透射比浊法 抗原与相应的抗体结合形成的抗原与相应的抗体结合形成的免疫复合物免疫复合物，在反应液中具有一定的浊度，可由一般分光光度法在反应液中具有一定的浊度，可由一般分光光度法进行进行透射比浊透射比浊（transmission turbidimetrytransmission turbidimetry）测定，可用于某些蛋白质和药物浓度等的测定。测定，可用于某些蛋白质和药物浓度等的测定。该法须做该法须做多点校准多点校准，再经，再经非线性回归非线性回归，求出抗原，求出抗原或抗体的

50、含量。或抗体的含量。第60页，讲稿共139张，创作于星期一二、常用生化检测项目分析方法举例二、常用生化检测项目分析方法举例 1 1终点法检测终点法检测 常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、常用的有总胆红素（氧化法或重氮法）、结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋结合胆红素（氧化法或重氮法）、血清总蛋白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）白（双缩脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化、总胆汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆酶法）、尿酸（尿酸酶法）、总胆固醇（胆固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸