肾功能检查的方法评价课件.ppt

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1、肾功能检查的方法评价1第1页，此课件共27页哦一、概述一、概述肾病常用实验室检查肾病常用实验室检查尿液检查尿液检查肾活检病理检查肾活检病理检查肾功能检查肾功能检查 肾小球滤过功能肾小球滤过功能 肾小管功能肾小管功能2第2页，此课件共27页哦肾小球功能检查肾小球功能检查内生肌酐清除率内生肌酐清除率血清肌酐测定血清肌酐测定血清尿素测定血清尿素测定GFR测定测定血血2-微球蛋白测定微球蛋白测定肾小球功能检查肾小球功能检查3第3页，此课件共27页哦肾小管功能检查肾小管功能检查近端肾小管近端肾小管功能检测：功能检测：尿尿 2、1微微球蛋白球蛋白肾小管功能肾小管功能远端肾小管功能检测远端肾小管功能检测昼夜

2、尿比密昼夜尿比密尿渗量尿渗量自由水清除值（自由水清除值（CH2O）尿尿 N-乙酰乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶（NAG）4第4页，此课件共27页哦测定血液中非蛋白氮成份是衡量肾功测定血液中非蛋白氮成份是衡量肾功能的重要指标。能的重要指标。血液非蛋白成份：指除了蛋白以外的血液非蛋白成份：指除了蛋白以外的低分子量含氮化合物的总称，主要是低分子量含氮化合物的总称，主要是尿素尿素，约占，约占50%左右，其它尚有左右，其它尚有尿酸尿酸（UA）、）、肌酐肌酐（Cr）、）、氨基酸氨基酸(aa)、核苷酸、肽类及氨等。它们由蛋白分核苷酸、肽类及氨等。它们由蛋白分解而来，主要由肾脏排出。解而来，主要由肾脏

3、排出。5第5页，此课件共27页哦方法方法过去是测定过去是测定NPN（非蛋白氮，（非蛋白氮，non-protein nitrogen）的量，操作繁琐、结）的量，操作繁琐、结果分析复杂。果分析复杂。现在是测定尿素、现在是测定尿素、Cr等肾功指标。等肾功指标。6第6页，此课件共27页哦二、血清尿素（二、血清尿素（Urea）的测定）的测定1、早期的生化方法测定尿素是用氮定量的方法，、早期的生化方法测定尿素是用氮定量的方法，故临床上仍习惯将尿素测定称为尿素氮测定。故临床上仍习惯将尿素测定称为尿素氮测定。每每60克尿素含氮克尿素含氮28克克,1mmol/LBUN=1/2mmol/LUrea。2、尿素来源尿

4、素来源：是体内氨基酸分解的终产物之一，：是体内氨基酸分解的终产物之一，由氨基酸生成由氨基酸生成NH3和和CO2,主要在肝脏经鸟氨酸主要在肝脏经鸟氨酸循环的代谢过程而逐步合成，经血液运输至肾、循环的代谢过程而逐步合成，经血液运输至肾、由尿液排出体外。全血值较血清值低，临床上由尿液排出体外。全血值较血清值低，临床上常测常测血清标本血清标本。3、单位单位：WHO推荐用推荐用mmol/LUrea表示浓表示浓度。度。7第7页，此课件共27页哦血清尿素（血清尿素（Urea）测定的方法）测定的方法直接法直接法-二乙酰一肟法：二乙酰一肟法：WHO推荐的常规方法推荐的常规方法间接法间接法-尿素酶法（参考方法）尿

5、素酶法（参考方法）决定性方法决定性方法-ID-MS8第8页，此课件共27页哦（一）二乙酰一肟法（一）二乙酰一肟法1、原理原理：尿素与二乙酰一肟在强酸溶液，经加热生成：尿素与二乙酰一肟在强酸溶液，经加热生成红色二嗪衍生物，称为红色二嗪衍生物，称为Fearon氏反应，在氏反应，在540nm比色。比色。二乙酰一肟二乙酰一肟+H2O+H+双乙酰双乙酰+羟胺羟胺双乙酰双乙酰+尿素尿素+H+红色二嗪衍生物红色二嗪衍生物+2H2O加热加热9第9页，此课件共27页哦2、注意事项、注意事项羟胺是干扰物质羟胺是干扰物质，要用氧化剂除去，如过，要用氧化剂除去，如过硫酸盐、砷酸、过氯酸、氯胺硫酸盐、砷酸、过氯酸、氯胺

6、T以及一些以及一些阳离子。现在磷酸即做酸介质又作氧化剂。阳离子。现在磷酸即做酸介质又作氧化剂。加入氨基硫脲和加入氨基硫脲和Fe3+（有氧化作用可以消（有氧化作用可以消除羟胺的干扰）或除羟胺的干扰）或Cd2+（镉离子）可增加（镉离子）可增加呈色的稳定性，提高反应灵敏度。呈色的稳定性，提高反应灵敏度。在呈色反应时，在呈色反应时，A要逐渐降低，要逐渐降低，30分钟内分钟内降低降低6%，1h降低降低12%，2h降低降低15%，所，所以宜以宜在在30分钟内比色分钟内比色。10第10页，此课件共27页哦3、评价、评价优点优点WHO推荐的常规方法推荐的常规方法，简便快速精确，简便快速精确550nm波长比色最

7、灵敏，且可摒除蛋白干波长比色最灵敏，且可摒除蛋白干扰，故标本无需作去蛋白处理扰，故标本无需作去蛋白处理线性范围宽线性范围宽，达，达140mol/L干扰因素少干扰因素少：黄疸、溶血、：黄疸、溶血、BIL一般无影一般无影响响特异性较好特异性较好：少量鸟氨酸循环的中间产物：少量鸟氨酸循环的中间产物（瓜氨酸）等要干扰反应，但含量甚微，（瓜氨酸）等要干扰反应，但含量甚微，可认为无影响可认为无影响11第11页，此课件共27页哦缺点缺点特异性不如酶法特异性不如酶法强酸有刺激性、腐蚀性强酸有刺激性、腐蚀性反应期间有臭味反应期间有臭味12第12页，此课件共27页哦（二）尿素酶法（脲酶法）（二）尿素酶法（脲酶法）

8、1、原理：先用尿素酶特异性地水解尿素，生、原理：先用尿素酶特异性地水解尿素，生成氨和成氨和CO2，再用一些方法来定量。，再用一些方法来定量。尿素尿素+H2O2NH3+CO2进一步可用以下方法定量：进一步可用以下方法定量：尿素酶尿素酶13第13页，此课件共27页哦Berthelot氏反应（尿素酶氏反应（尿素酶-靛酚显色法、酚靛酚显色法、酚-次次氯酸显色法、氯酸显色法、脲酶波氏比色法脲酶波氏比色法）：原理：原理：NH4+NaClO+2酚吲哚酚酚吲哚酚+5NaCl+5H2O吲哚酚：蓝色解离型（吲哚酚：蓝色解离型（630nm）催化剂：亚硝基铁氰化钠催化剂：亚硝基铁氰化钠评价评价：简便，专一性好灵敏度高

9、、结果准确，批：简便，专一性好灵敏度高、结果准确，批内内CV2.7-3.9%，血清用量少（，血清用量少（10l即可），最即可），最终稀释度大，故不需要去蛋白。终稀释度大，故不需要去蛋白。参考值：参考值：2.86-8.2mmol/LOH-14第14页，此课件共27页哦尿素酶尿素酶-纳氏试剂显色法纳氏试剂显色法碳酸铵碳酸铵+纳氏试剂纳氏试剂+8NaOH 2Hg2ONH2I棕黄色沉淀棕黄色沉淀+8KI+6NaI+NaCO3+6H2O尿素酶尿素酶-谷氨酸脱氢酶法谷氨酸脱氢酶法:-酮戊二酸酮戊二酸+NH4+NAD(P)H+H+反应要消耗反应要消耗NAD(P)H，340nm测测A的减少，用终点法或的减少，

10、用终点法或速率法。速率法。电化学方法电化学方法尿素由非离子化状态尿素由非离子化状态NH4+，可用自动化电导仪测定导电，可用自动化电导仪测定导电率变化；或用率变化；或用NH4+ISE来测定电位变化。来测定电位变化。谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶NAD(P)+H2O+谷氨酸谷氨酸15第15页，此课件共27页哦2、评价、评价优点：特异性强、灵敏度高、准确性好优点：特异性强、灵敏度高、准确性好要求：要求：尿素酶是蛋白，故酸、碱、重金属均会尿素酶是蛋白，故酸、碱、重金属均会破坏或影响其活性。破坏或影响其活性。pH、温度、时间要严格掌握、温度、时间要严格掌握防止环境中的防止环境中的NH3污染。污染。(为酶促反应

11、的特点为酶促反应的特点)16第16页，此课件共27页哦三、肌酐三、肌酐(Cr)的测定的测定肌酐是肌酸的代谢产物，由肾脏排出。血液中也有少量的肌酐是肌酸的代谢产物，由肾脏排出。血液中也有少量的肌酐，一般与肌酐，一般与BUN同时测定，用以了解肾功，两者比值同时测定，用以了解肾功，两者比值(血清血清BUN mg/dl:血清血清Cr mg/ml)在正常情况下为在正常情况下为1220，计算比值可粗略判断肾性或肾外因素所致的氮，计算比值可粗略判断肾性或肾外因素所致的氮质血症，还可测血与尿中肌酐，以计算肾小球滤过率。质血症，还可测血与尿中肌酐，以计算肾小球滤过率。方法：方法：决定法方法决定法方法ID-MS、

12、离子交换层析法，、离子交换层析法，参考方法：参考方法：HPLC 常规方法常规方法：去蛋白苦味酸显色去蛋白苦味酸显色(Jaffe反应反应)法、法、不去蛋白不去蛋白Jaffe拟一级动力学法拟一级动力学法(速率法速率法)酶法酶法17第17页，此课件共27页哦(一一)、苦味酸法、苦味酸法(Jaffe氏反应氏反应)1、原理：、原理：Jaffe于于1886年报告的。肌酐与苦味酸在年报告的。肌酐与苦味酸在碱性介质中生成橙红色碱性介质中生成橙红色(510nm)的苦味酸肌酐复的苦味酸肌酐复合物。合物。2、消除假肌酐干扰的方法：消除假肌酐干扰的方法：假肌酐假肌酐：血浆中的葡萄糖、：血浆中的葡萄糖、VitC、丙酮酸

13、、蛋白质、丙酮酸、蛋白质、乙酰乙酸、丙酮等均能与碱性苦味酸作用，生成红色乙酰乙酸、丙酮等均能与碱性苦味酸作用，生成红色化合物。在化合物。在Jaffe氏反应中，约占总量的氏反应中，约占总量的1/4，RBC内更高，故测定肌酐时一般用血浆或血清标本。内更高，故测定肌酐时一般用血浆或血清标本。消除假干扰的方法：消除假干扰的方法：18第18页，此课件共27页哦制备无蛋白血滤液制备无蛋白血滤液或在反应体系中加或在反应体系中加入十二烷基硫酸钠入十二烷基硫酸钠(SDS)，与蛋白形成不，与蛋白形成不与苦味酸起反应的复合物，加入硼砂与与苦味酸起反应的复合物，加入硼砂与葡萄糖、葡萄糖、VitC形成非反应的复合物。形

14、成非反应的复合物。二次比色法二次比色法：特异性高，可用血清直：特异性高，可用血清直接测定。接测定。Jaffe氏反应后先进行第一次比氏反应后先进行第一次比色，测得真假肌酐的总色，测得真假肌酐的总A，再在反应体系，再在反应体系中加入肌酐酶或中加入肌酐酶或6N的醋酸，以分解真肌的醋酸，以分解真肌酐，再进行一次比色测假肌酐，二次酐，再进行一次比色测假肌酐，二次A值值之差即为真肌酐的之差即为真肌酐的A值值19第19页，此课件共27页哦用硅酸铝土或阳离子交换树脂等用硅酸铝土或阳离子交换树脂等吸附吸附真肌酐，真肌酐，再洗脱、再洗脱、Jaffe氏反应。方法繁杂、准确度受影响。氏反应。方法繁杂、准确度受影响。用

15、用控制控制pH值值的方法来消除干扰：的方法来消除干扰：在在pH12时，假肌酐的干扰很小。时，假肌酐的干扰很小。在在pH10时，作一个血清蛋白，减去空白和蛋白干时，作一个血清蛋白，减去空白和蛋白干扰纠正常数扰纠正常数速率法速率法：特异、快速，用于自动化分析仪：特异、快速，用于自动化分析仪在在Jaffe氏反应中，乙酰乙酸在最初氏反应中，乙酰乙酸在最初20秒与苦味酸秒与苦味酸形成复合物较快，在形成复合物较快，在2080秒间则主要是真肌酐起秒间则主要是真肌酐起起反应，起反应，80秒以后是其他干扰物。于是测定反应秒以后是其他干扰物。于是测定反应后后2060秒间秒间A20第20页，此课件共27页哦(二二)

16、、酶法、酶法评价：特异性高、快速、操作简便。但评价：特异性高、快速、操作简便。但酶试剂来源较困难、操作中温度、酶试剂来源较困难、操作中温度、pH值、值、保温时间均要控制。保温时间均要控制。方法：方法：部分酶法部分酶法:Jaffe氏反应后肌酐酶二次比氏反应后肌酐酶二次比色法、肌酐酶法色法、肌酐酶法 全酶法：全酶法：21第21页，此课件共27页哦1、肌酐亚氨基水解酶、肌酐亚氨基水解酶(肌酐酶肌酐酶)法法肌酐肌酐+H2ONH4+N-甲基乙内酰脲甲基乙内酰脲再对再对NH4+进行定量进行定量，方法如下：，方法如下：NH4+离子选择电极法离子选择电极法用指示剂用指示剂(溴酚蓝溴酚蓝)与铵染色定量与铵染色定

17、量偶联谷氨酸脱氢酶法偶联谷氨酸脱氢酶法：-酮戊二酸酮戊二酸+NH4+NAD(P)H+H+NAD(P)+H2O+谷氨酸谷氨酸(340nm测定测定A值变化值变化)注：以上方法测注：以上方法测NH4+要防止内源性氨、环境氨的污染要防止内源性氨、环境氨的污染肌酐酶肌酐酶谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶22第22页，此课件共27页哦2、肌酐酰氨基水解酶法、肌酐酰氨基水解酶法(全酶法全酶法)谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶肌酸肌酸肌酐肌酐+H2O评价：特异性高、可用终点法或速率法评价：特异性高、可用终点法或速率法肌酸激酶肌酸激酶磷酸肌酸磷酸肌酸ATPADP丙酮酸丙酮酸激酶激酶丙酮酸丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸N

18、AD(P)H+H+NAD+LDH测定测定340nmA值的变化值的变化23第23页，此课件共27页哦3、HPLC：参考方法：参考方法应用离子对技术，反向柱，于应用离子对技术，反向柱，于200nm波长定量波长定量评价：高度特异性，但要一定的技术条件评价：高度特异性，但要一定的技术条件24第24页，此课件共27页哦内生肌酐清除率测定(Ccr)外源性肌酐外源性肌酐肌酐肌酐内生性肌酐内生性肌酐 大部分从肾小球滤过，不被肾小管重吸收，排泌量大部分从肾小球滤过，不被肾小管重吸收，排泌量很少，其清除率基本代表很少，其清除率基本代表GFRGFR。25第25页，此课件共27页哦试验操作方法：试验操作方法：1.1.低蛋白饮食、禁肉食、避免剧烈运动低蛋白饮食、禁肉食、避免剧烈运动3 3天。天。2.2.收集收集24h24h或或4h4h尿液（甲苯防腐），同时取血尿液（甲苯防腐），同时取血23ml23ml3.3.测定血、尿中肌酐浓度、记录尿量测定血、尿中肌酐浓度、记录尿量4.4.计算计算参考范围：参考范围：8080120ml/min120ml/min（成人）（成人）26第26页，此课件共27页哦临床意义临床意义：判断肾小球损害的敏感指标判断肾小球损害的敏感指标评估肾功能损害程度评估肾功能损害程度指导临床治疗指导临床治疗27第27页，此课件共27页哦