荧光显微成像技术和应用讲稿.ppt

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1、关于荧光显微成像技关于荧光显微成像技术和应用术和应用第一页，讲稿共十六页哦原理 普通光学显微镜 通过普通光源的照明观察标本第二页，讲稿共十六页哦荧光显微镜(fluorescence microscope)：利用较短波长的光(激发光)照射样品，使样品受到高能量激发，产生较长波长的荧光(发射光)，用来观察和分辨样品中产生荧光的物质的成分和位置。第三页，讲稿共十六页哦荧光显微镜的种类荧光显微镜的种类透射式落射式落射式第四页，讲稿共十六页哦 目镜目镜目镜目镜吸收滤色镜吸收滤色镜吸收滤色镜吸收滤色镜 物镜物镜物镜物镜暗场聚光镜暗场聚光镜暗场聚光镜暗场聚光镜激发滤色镜激发滤色镜激发滤色镜激发滤色镜 汞灯汞

2、灯汞灯汞灯透射荧光显微镜原理图标本标本标本标本第五页，讲稿共十六页哦汞汞汞汞 灯灯灯灯激发滤色镜激发滤色镜激发滤色镜激发滤色镜分色镜分色镜分色镜分色镜吸收滤色镜吸收滤色镜吸收滤色镜吸收滤色镜物物物物 镜镜镜镜 标标标标 本本本本落射荧光显微镜原理图第六页，讲稿共十六页哦 透射式汞灯光源汞灯光源激发滤色镜激发滤色镜暗场聚光镜暗场聚光镜吸收滤色镜吸收滤色镜 落射式汞灯光源汞灯光源激发滤色镜激发滤色镜分色镜分色镜吸收滤色镜吸收滤色镜荧光显微镜的主要部件荧光显微镜的主要部件第七页，讲稿共十六页哦分色镜 反射激发光，透过荧光暗场聚光镜 来自下面光源的光线经过暗场聚光镜，形成了横过显微镜视野而不进入物镜的

3、强烈光束。因此视野是暗的 第八页，讲稿共十六页哦荧光图像的记录方法荧光显微镜所看到的荧光图像具有：形态学特征和荧光的颜色、亮度判断结果时，必须将二者结合起来综合判断 记录结果：主观指标（即工作者目力观察）客观指标（细胞分光光度计、图像分析仪等）第九页，讲稿共十六页哦荧光显微镜应用技术1.对细胞结构或组分的定性位、半定量研究 免疫荧光技术 用荧光标记的抗体或抗原与样品(细胞、组织或分离的物质等)中相应的抗原或抗体结合，以适当检测荧光的技术对其进行分析的方法。将抗原或抗体与荧光染料连接，用于检测相应特异性的抗体或抗原的方法称“直接免疫荧光技(directimmunofluorescent tech

4、nique)”。用荧光染料标记的第二、第三抗体等检测相应抗原抗体复合体的方法则称“间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescent technique)”。第十页，讲稿共十六页哦 由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位第十一页，讲稿共十六页哦2.作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。绿色荧光蛋白 绿色萤光蛋白(green fluorescent protein)，简称GFP，其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光，在生物学研究中绿色荧光蛋白具有广泛用途，包括有第十二页，讲稿共十六页哦 1.分子标记 利用绿色荧光的发光机制，可将GFP作为蛋白质标签(protein tagging)，即利用DNA重组技术，将目的基因与GFP基因构成融合基因，转染合适的细胞进行表达，然后借助荧光显微镜便可对标记的蛋白质进行细胞内活体观察第十三页，讲稿共十六页哦2.药物筛选 荧光探针分布是利用信号传导中信号分子的迁移功能，将一荧光蛋白与信号分子相偶联，根据荧光蛋白的分布情况即可推断信号分子的迁移状况，并推断该分子在迁移中的功能。由于GFP分子量小，在活细胞内可溶且对细胞毒性较小，因而常用作荧光探针 第十四页，讲稿共十六页哦第十五页，讲稿共十六页哦2023/4/8感感谢谢大大家家观观看看第十六页，讲稿共十六页哦