维生素的测定 (3)讲稿.ppt

《维生素的测定 (3)讲稿.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《维生素的测定 (3)讲稿.ppt（111页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、关于维生素的测定(3)第一页，讲稿共一百一十一页哦Vitamin的一般知识l一、共同特点一、共同特点：l大多不能在体内合成（大多不能在体内合成（可少量合成）可少量合成）l大多不能大多不能大量大量储存于组织中储存于组织中l不构成组织的原料不构成组织的原料l不提供能量不提供能量l以辅酶或辅基形式参与以辅酶或辅基形式参与酶反应酶反应第二页，讲稿共一百一十一页哦第三页，讲稿共一百一十一页哦二、命名与分类l以以字母字母、化学结构或功能命名、化学结构或功能命名lVitamin A/视黄醇视黄醇/干眼病维生素干眼病维生素第四页，讲稿共一百一十一页哦分类：分类：脂溶性、水溶性脂溶性、水溶性第五页，讲稿共一百一

2、十一页哦三、维生素缺乏l临床缺乏临床缺乏l亚临床缺乏亚临床缺乏(marginal deficiency)l降低对疾病的抵抗力、降低工作效率和降低对疾病的抵抗力、降低工作效率和生活质量。生活质量。脂溶性维生素主要储存在肝脏中，摄取过多，脂溶性维生素主要储存在肝脏中，摄取过多，可能会引起中毒。摄取过少，可缓慢出现缺可能会引起中毒。摄取过少，可缓慢出现缺乏症状。乏症状。水溶性的呢？水溶性的呢？第六页，讲稿共一百一十一页哦第七页，讲稿共一百一十一页哦第一节第一节 概述概述l一、一、vitamin含量和测定意义含量和测定意义l1 含量分布含量分布：lVA 0.1-300mg/100g 鱼肝鱼肝l-胡萝卜

3、素胡萝卜素 0.1-12mg/100g 果蔬果蔬lVc 0.1-1000mg/100glVB的含量较低的含量较低第八页，讲稿共一百一十一页哦2 测定意义测定意义A 利用性：人体需要、合理膳食利用性：人体需要、合理膳食B 贮存贮存C 加工加工第九页，讲稿共一百一十一页哦二、维生素分析工作的特点二、维生素分析工作的特点1 个别测定。无所谓总量个别测定。无所谓总量2 稳定性差，光、热、氧、酶敏感稳定性差，光、热、氧、酶敏感3 干扰杂质多干扰杂质多4 结合态存在的问题结合态存在的问题第十页，讲稿共一百一十一页哦二、维生素分析的一般程序二、维生素分析的一般程序1 使游离出来使游离出来2 提取（选溶剂）提

4、取（选溶剂）3 纯化（根据待测纯化（根据待测vit与杂质的性质差异）与杂质的性质差异）4 测定测定第十一页，讲稿共一百一十一页哦维生素分析的方法有维生素分析的方法有l 化学法化学法(比色法、滴定法）比色法、滴定法）l 仪器法仪器法（紫外法、荧光法）（紫外法、荧光法）l 微生物法微生物法(水溶性维生素、水溶性维生素、B2）l 生物鉴定法生物鉴定法(VD)第十二页，讲稿共一百一十一页哦第二节第二节 水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定 l水溶性维生素的性质水溶性维生素的性质l样品预处理样品预处理第十三页，讲稿共一百一十一页哦第十四页，讲稿共一百一十一页哦维生素名称维生素名称一般使用的化学名一般使用

5、的化学名其他常用别称及说明其他常用别称及说明维生素维生素B1硫胺硫胺维生素维生素B2核黄素核黄素维生素维生素G维生素维生素B3烟酸烟酸维生素维生素PP、烟碱酸烟碱酸、尼古丁酸尼古丁酸维生素维生素B5泛酸泛酸遍多酸遍多酸维生素维生素B6吡哆醇吡哆醇类类包括包括吡哆醇吡哆醇、吡哆醛吡哆醛及及吡哆胺吡哆胺维生素维生素B7生物素生物素维生素维生素H、辅酶、辅酶R维生素维生素B9蝶酰谷氨酸蝶酰谷氨酸叶酸叶酸、维生素维生素M、叶精叶精维生素维生素B12钴胺素钴胺素氰钴胺氰钴胺、辅酶辅酶B12第十五页，讲稿共一百一十一页哦一、维生素一、维生素B2的测定的测定第十六页，讲稿共一百一十一页哦在食品中以游离形式或

6、磷酸酯等结合形式。在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式。是机体许多重要辅酶的组成成分，对机体内糖、是机体许多重要辅酶的组成成分，对机体内糖、蛋白质、脂肪代谢起着重要作用。蛋白质、脂肪代谢起着重要作用。主要来源是各种动物性食品，其中以肝、肾、主要来源是各种动物性食品，其中以肝、肾、心、蛋、奶含量最多，其次是植物性食品的豆心、蛋、奶含量最多，其次是植物性食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。类和新鲜绿叶蔬菜。第十七页，讲稿共一百一十一页哦1原理原理荧光计法荧光计法 核核黄黄素素在在440500 nm波波长长光光照照射射下下发发出出黄黄绿绿色荧光。色荧光。在在440nm激激发发波波长长，525nm发发射射波波长

7、长下下测测定定提提纯纯液液的的（黄黄绿绿色色）荧荧光光强强度度。之之后后，试试液液中中加加入入低低亚亚硫硫酸酸钠钠(Na2S2O4)，将将核核黄黄素素还还原原为为无无荧荧光光物物质质，再再测测定定残残余余杂杂质质的的荧荧光光强度，强度，荧光值之差荧光值之差与核黄素含量成正比。与核黄素含量成正比。第十八页，讲稿共一百一十一页哦第十九页，讲稿共一百一十一页哦3测定方法测定方法l(1)样品提取样品提取l(2)氧化去杂质氧化去杂质 l(3)核黄素的吸附和洗脱核黄素的吸附和洗脱l(4)荧光测定荧光测定 样样品品经经酸酸解解、酶酶解解处处理理使使核核黄黄素素游游离离出出来来，用用高高锰锰酸酸钾钾和和过过氧

8、氧化化氢氢氧氧化化其其它它色色素素和和杂杂质质，再再经经硅硅镁镁吸吸附附剂剂进进行行柱层析，吸附柱层析，吸附提纯提纯核黄素。核黄素。第二十页，讲稿共一百一十一页哦4 结果计算第二十一页，讲稿共一百一十一页哦5 说明说明l核核黄黄素素对对光光敏敏感感，整整个个操操作作应应在在暗暗室室中进行。中进行。l核核黄黄素素可可被被低低亚亚硫硫酸酸钠钠还还原原成成无无荧荧光光型型，但但摇摇动动后后很很快快就就被被空空气气氧氧化化成成有有荧荧光物质，所以要立即测定。光物质，所以要立即测定。第二十二页，讲稿共一百一十一页哦二、维生素二、维生素B1 比色法比色法硫色素荧光法硫色素荧光法液相色谱法液相色谱法以游离态

9、，或以焦磷酸酯形式存在于自以游离态，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。在酵母、米糠、麦胚、花生、黄然界。在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜和牛乳、蛋黄中含量较豆以及绿色蔬菜和牛乳、蛋黄中含量较为丰富。动物组织不如植物含量丰富。为丰富。动物组织不如植物含量丰富。第二十三页，讲稿共一百一十一页哦第二十四页，讲稿共一百一十一页哦荧光计法荧光计法1原理原理l硫胺素在硫胺素在碱性铁氰化钾碱性铁氰化钾溶液中，能被氧溶液中，能被氧化成化成硫色素硫色素，在紫外光照射下产生蓝色，在紫外光照射下产生蓝色荧光。如果不存在其它荧光物质干扰，荧光。如果不存在其它荧光物质干扰，荧光强度与硫色素含量成正比，即与溶荧光强

10、度与硫色素含量成正比，即与溶液中硫胺素含量成正比。液中硫胺素含量成正比。第二十五页，讲稿共一百一十一页哦第二十六页，讲稿共一百一十一页哦4操作方法操作方法(1)样品提取样品提取 水解水解 酶解酶解(2)净化净化(3)氧化氧化(4)荧光强度的测定荧光强度的测定 第二十七页，讲稿共一百一十一页哦5 结果计算第二十八页，讲稿共一百一十一页哦6说明说明l一一般般食食品品中中的的维维生生素素B1有有游游离离型型的的，也也有有结结合合型型的的，即即与与淀淀粉粉、蛋蛋白白质质等等结结合合在在一一起起的的，故故需需用用酸酸和和酶酶水水解解，使使结结合型合型B1成为游离型，再采用此法测定。成为游离型，再采用此法

11、测定。第二十九页，讲稿共一百一十一页哦l可可在在加加入入酸酸性性氯氯化化钾钾后后停停止止实实验验，因因为硫胺素在此溶液中比较稳定。为硫胺素在此溶液中比较稳定。第三十页，讲稿共一百一十一页哦l样样品品与与铁铁氰氰化化钾钾溶溶液液混混合合后后，所所呈呈现现的的黄黄色色应应至至少少保保持持15秒秒，否否则则应应再再滴滴加加铁氰化钾溶液铁氰化钾溶液12滴。滴。第三十一页，讲稿共一百一十一页哦l紫紫外外线线破破坏坏硫硫色色素素，所所以以硫硫色色素素形形成成后要迅速测定，并力求避光操作。后要迅速测定，并力求避光操作。第三十二页，讲稿共一百一十一页哦l氧氧化化是是操操作作的的关关键键步步骤骤，操操作作中中应

12、应保保持加试剂的迅速一致持加试剂的迅速一致第三十三页，讲稿共一百一十一页哦三、维生素三、维生素C的测定的测定l1 Vc的性质的性质l已糖醛基酸已糖醛基酸 l易溶于水、醇，不溶于易溶于水、醇，不溶于乙醚、氯仿等乙醚、氯仿等l干燥状态较稳定、酸性干燥状态较稳定、酸性介质中较稳定介质中较稳定l对光、氧、铜离子敏感对光、氧、铜离子敏感第三十四页，讲稿共一百一十一页哦第三十五页，讲稿共一百一十一页哦第三十六页，讲稿共一百一十一页哦2 测定方法测定方法(一一)2，4二硝基苯肼比色法二硝基苯肼比色法(二二)2，6二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法(三三)荧光法荧光法第三十七页，讲稿共一百一十一页哦(一一)2,4二

13、硝基苯肼比色法二硝基苯肼比色法1原理原理l 用用活活性性炭炭（其其中中吸吸附附的的氧氧）将将还还原原型型抗抗坏坏血血酸酸氧氧化化为为脱脱氢氢抗抗坏坏血血酸酸，然然后后与与2，4二二硝硝基基苯苯阱阱作作用用生生成成红红色色的的脎脎。在在浓浓硫硫酸酸的的脱脱水水作作用用下下，可可转转变变为为桔桔红红色色的的无无水水化化合合物物双双2，4二二硝硝基基苯苯。在在硫硫酸酸溶溶液液中中显显色色稳稳定定，最最大大吸吸收收波波长长为为500nm，吸光度与总抗坏血酸含量成正比，故可进行比色。吸光度与总抗坏血酸含量成正比，故可进行比色。第三十八页，讲稿共一百一十一页哦3测定步骤测定步骤l样品提取样品提取 l氧化氧

14、化 l显色反应显色反应 l85硫酸处理硫酸处理 l比色比色 l标准曲线的绘制标准曲线的绘制 第三十九页，讲稿共一百一十一页哦4 结果计算第四十页，讲稿共一百一十一页哦5、说明、说明l活活性性炭炭对对抗抗坏坏血血酸酸的的氧氧化化作作用用，是是基基于于其其表表面面吸吸附附的的氧氧进进行行界界面面反反应应，加加入入量量过过低低，氧氧化化不不充充分分，测测定定结结果果偏偏低低，加加入入量量过过高高，对对抗抗坏坏血血酸酸有有吸吸附附作作用用，使结果也偏低。使结果也偏低。第四十一页，讲稿共一百一十一页哦l对对无无色色或或已已脱脱色色样样品品，也也可可用用溴溴液液作作氧氧化化剂剂。还还可可用用2，6二二氯氯

15、靛靛酚酚作作氧氧化化剂。剂。第四十二页，讲稿共一百一十一页哦(二二)2,6二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法1、原理、原理 还还原原型型抗抗坏坏血血酸酸可可以以还还原原染染料料2，6二二氯氯靛靛酚酚。该该染染料料在在酸酸性性溶溶液液中中呈呈粉粉红红色色(在在中中性性或或碱碱性性溶溶液液中中呈呈蓝蓝色色)，被被还还原原后后颜颜色色消消失失。还还原原型型抗抗坏坏血血酸酸还还原原染染料料后后，本本身身被被氧氧化化成成脱脱氢氢抗抗坏坏血血酸酸。在在没没有有杂杂质质干干扰扰时时，一一定定量量的的样样品品提提取取液液还还原原标标准准染染料料液液的的量量，与样品中抗坏血酸含量成正比。与样品中抗坏血酸含量成正比。第

16、四十三页，讲稿共一百一十一页哦第四十四页，讲稿共一百一十一页哦3测定步骤测定步骤(1)提取提取l 鲜样制备鲜样制备l 干样制备干样制备 (2)滴定滴定 第四十五页，讲稿共一百一十一页哦4 结果计算第四十六页，讲稿共一百一十一页哦5说明说明所有试剂最好用重蒸馏水配制。所有试剂最好用重蒸馏水配制。样样品品采采取取后后，应应浸浸泡泡在在已已知知量量的的2草草酸酸溶溶液液中中，以以防防止止维维生生素素C氧氧化化损损失失。测测定定时时整整个个操操作作过过程程要要迅迅速速，防防止止抗抗坏坏血血酸酸被氧化。被氧化。第四十七页，讲稿共一百一十一页哦l若若测测动动物物性性样样品品，须须用用10三三氯氯醋醋酸酸代

17、代替替2草草酸溶液提取。酸溶液提取。l若若样样品品滤滤液液颜颜色色较较深深，影影响响滴滴定定终终点点观观察察，可可加入白陶土再过滤。白陶土使用前应测定回收率。加入白陶土再过滤。白陶土使用前应测定回收率。l若若样样品品中中含含有有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亚亚硫硫酸酸盐盐、硫硫化硫酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高。化硫酸盐等还原性杂质时，会使结果偏高。第四十八页，讲稿共一百一十一页哦第三节第三节 脂溶性维生素的测定脂溶性维生素的测定l维生素维生素A的测定的测定l胡萝卜素的测定胡萝卜素的测定l维生素维生素D的测定的测定l维生素维生素E的测定的测定第四十九页，讲稿共一百一十一页哦脂溶性维生素的理

18、化性质脂溶性维生素的理化性质l主要有下列方面：主要有下列方面：l1、溶解性、溶解性l2、耐酸、耐酸/碱性碱性l3、耐热性、耐氧化性、耐热性、耐氧化性第五十页，讲稿共一百一十一页哦l1、溶溶解解性性：脂脂溶溶性性维维生生素素不不溶溶于于水水，易易溶溶于于脂脂肪肪、乙乙醇醇、丙丙酮酮、氯氯仿仿、乙乙醚醚、苯等有机溶剂。苯等有机溶剂。第五十一页，讲稿共一百一十一页哦2、耐酸碱性：、耐酸碱性：l维维生生素素E对对碱碱不不稳稳定定，但但在在抗抗氧氧化化剂剂存存在在下下或或惰惰性气体保护下，也能经受碱的煮沸。性气体保护下，也能经受碱的煮沸。酸酸碱碱维生素维生素A、D不稳定不稳定稳定稳定维生素维生素E稳定稳

19、定不稳定不稳定第五十二页，讲稿共一百一十一页哦3、耐热性、耐氧化性：、耐热性、耐氧化性：耐热性耐热性耐氧化性耐氧化性维生素维生素A好，能经受煮沸好，能经受煮沸分子中有双链，分子中有双链，易被氧化，光、易被氧化，光、热促进其氧化热促进其氧化维生素维生素D好，能经受煮沸好，能经受煮沸不易被氧化不易被氧化维生素维生素E好，能经受煮沸好，能经受煮沸空空气气中中能能慢慢慢慢被被氧氧化化，光光、热热、碱碱能能促促进进其其氧氧化化作用。作用。第五十三页，讲稿共一百一十一页哦一、维生素一、维生素A的测定的测定l（一）概述（一）概述l（二）三氯化锑比色法（二）三氯化锑比色法l（三）紫外分光光度法（三）紫外分光光

20、度法l（四）高效液相色谱法（四）高效液相色谱法第五十四页，讲稿共一百一十一页哦概述概述第五十五页，讲稿共一百一十一页哦第五十六页，讲稿共一百一十一页哦第五十七页，讲稿共一百一十一页哦测定方法测定方法l三氯化锑比色法三氯化锑比色法l紫外分光光度法紫外分光光度法l荧光法荧光法l气相色谱法气相色谱法l高效液相色谱法高效液相色谱法第五十八页，讲稿共一百一十一页哦三氯化锑比色法（三氯化锑比色法（GB第二法）第二法）1原理原理l 在在氯氯仿仿溶溶液液中中，维维生生素素A与与三三氯氯化化锑锑可可生生成成蓝蓝色色可可溶溶性性络络合合物物，在在620nm波波长长处处有有最最大大吸吸收收峰峰，其其吸吸光光度度与与

21、维维生生素素A的的含含量量在在一一定定的的范范围围内内成成正正比比，故故可可比比色测定。色测定。第五十九页，讲稿共一百一十一页哦2适用范围及特点适用范围及特点本本法法适适用用于于维维生生素素A含含量量较较高高的的各各种种样样品品(高高于于5一一l0gg)，对对低低含含量量样样品品，因因受受其他脂溶性物质的干扰，不易比色测定。其他脂溶性物质的干扰，不易比色测定。第六十页，讲稿共一百一十一页哦3测定方法测定方法(1)样品处理样品处理 皂化皂化（氢氧化钾，乙醇）（氢氧化钾，乙醇）提取提取（乙醚）（乙醚）洗涤洗涤（水，氢氧化钾）（水，氢氧化钾）浓缩浓缩（无水硫酸钠，三氯甲烷）（无水硫酸钠，三氯甲烷）第

22、六十一页，讲稿共一百一十一页哦l(2)标准曲线的绘制标准曲线的绘制 l(3)样品测定样品测定 第六十二页，讲稿共一百一十一页哦结果计算第六十三页，讲稿共一百一十一页哦l所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。遇水会出现沉淀，干扰比色测定。故故在在每每m1氯氯仿仿中中应应加加入入乙乙酸酸酐酐1滴滴，以以保保证脱水。证脱水。说明与注意点说明与注意点第六十四页，讲稿共一百一十一页哦l维维生生素素A见见光光易易分分解解，整整个个实实验验应应在在暗暗处处进进行行，防防止止阳阳光光照照射射，或或采采用用棕棕色色玻玻璃璃避光避光。第六十五页，讲稿共一

23、百一十一页哦l测测定定结结果果也也可可以以每每100g食食品品中中所所含含维维生生素素A的的国国际际单单位位表表示示，每每国国际际单单位位维维生生素素A相当于相当于0.3g维生素维生素A。1g胡萝卜素胡萝卜素=0.167g视黄醇当量。以往视黄醇当量。以往VA的量常用国际单位的量常用国际单位（IU）表示。）表示。1IUVA=0.33gVA=0.33g视黄醇当量。视黄醇当量。第六十六页，讲稿共一百一十一页哦l三三氯氯化化锑锑腐腐蚀蚀性性强强，不不能能沾沾在在手手上上；三三氯氯化化锑锑遇遇水水生生成成白白色色沉沉淀淀，因因此此用用过过的的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。第

24、六十七页，讲稿共一百一十一页哦l比比色色法法除除用用三三氯氯化化锑锑作作显显色色剂剂外外，还还可可用用三三氟氟乙乙酸酸、三三氯氯乙乙酸酸作作显显色色剂剂。其其中中三三氟氟乙乙酸酸没没有有遇遇水水发发生生沉沉淀淀而而使使溶溶液液混混浊的缺点。浊的缺点。第六十八页，讲稿共一百一十一页哦(二二)紫外分光光度法紫外分光光度法1.原理原理 维维生生素素A的的异异丙丙醇醇溶溶液液在在325nm波波长长下下有有最最大大吸吸收收峰峰，其其吸吸光光度度与与维维生生素素A的的含量成正比。含量成正比。第六十九页，讲稿共一百一十一页哦2适用范围及特点适用范围及特点l 本本法法的的灵灵敏敏度度较较比比色色法法高高，可可

25、测测定定维维生生素素A含含量量低低于于5gg的的样样品品。主主要要缺缺点点是是在在维维生生素素A最最大大吸吸收收波波长长325nm附附近近许许多其他化合物也有吸收，干扰测定，多其他化合物也有吸收，干扰测定，第七十页，讲稿共一百一十一页哦l故故本本法法适适用用于于透透明明鱼鱼油油，维维生生素素A的的浓浓缩缩物物等等纯纯度度较较高高的的样样品品。对对于于一一般般样样品品，测测定定前前必必须须先先将将脂脂肪肪抽抽提提出出来来进进行行皂皂化化，萃萃取取其其不不皂皂化化部部分分，再再经经柱柱层层析析除除去去干干扰物。扰物。第七十一页，讲稿共一百一十一页哦（三）高效液相色谱法（三）高效液相色谱法l1、原理

26、（、原理（GB/T5009.82-2003第一法）第一法）皂皂化化、提提取取样样品品中中的的维维生生素素A和和维维生生素素E后后，用用高高效效液液相相色色谱谱法法C18反反相相柱柱将将两两者者分离，用紫外检测器检测，内标法定量。分离，用紫外检测器检测，内标法定量。第七十二页，讲稿共一百一十一页哦l 测定步骤测定步骤l（1）样品处理（皂化、提取、洗涤、浓缩）样品处理（皂化、提取、洗涤、浓缩）l（2）标准曲线的制备）标准曲线的制备第七十三页，讲稿共一百一十一页哦二、二、胡萝卜素的测定胡萝卜素的测定450nm波长处有最大吸收HPLC法（GB/T5009.83）纸层析、柱层析薄层层析法 l-胡萝卜素含

27、有两个维生素胡萝卜素含有两个维生素A1的结构，称为维的结构，称为维生素生素A原。原。第七十四页，讲稿共一百一十一页哦第七十五页，讲稿共一百一十一页哦一、高效液相色谱法一、高效液相色谱法1原理原理l试样中的试样中的-胡萝卜素，用石油醚胡萝卜素，用石油醚+丙酮丙酮(80+20)混合液提取，经三氧化二铝柱纯化，然后以混合液提取，经三氧化二铝柱纯化，然后以高效液相色谱法测定，以保留时间定性，峰高效液相色谱法测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。高或峰面积定量。第七十六页，讲稿共一百一十一页哦二、纸层析法二、纸层析法1原理：原理：以以丙丙酮酮和和石石油油醚醚提提取取食食物物中中的的胡胡萝萝卜卜素素及及

28、其其他他植植物物色色素素；以以石石油油醚醚为为展展开开剂剂进进行行纸纸层层析析。胡胡萝萝卜卜素素极极性性最最小小，移移动动速速度度最最快快，从从而而与与其其它它色色素素分分开开。剪剪下下含含胡胡萝萝卜卜素素的的区区带带，洗洗脱脱后后于于450nm波波长长下进行比色，测定。下进行比色，测定。第七十七页，讲稿共一百一十一页哦4、测定步骤、测定步骤l（1）样品提取与洗涤）样品提取与洗涤(石油醚）石油醚）l（2）浓缩与定容）浓缩与定容l（3）纸层析）纸层析l（4）比色测定）比色测定l（5）标准曲线的绘制）标准曲线的绘制第七十八页，讲稿共一百一十一页哦l点样：带状点样点样：带状点样l展开展开l洗洗脱脱：

29、剪剪下下位位于于展展开开剂剂前前沿沿的的胡胡萝萝卜卜素层析带，石油醚素层析带，石油醚第七十九页，讲稿共一百一十一页哦第八十页，讲稿共一百一十一页哦5、结果计算、结果计算第八十一页，讲稿共一百一十一页哦6说明与讨论说明与讨论l此此法法也也为为国国家家标标准准方方法法，方方法法简简便便，色带清晰，最小检出限为色带清晰，最小检出限为0.11g。l 样样品品和和标标准准液液的的提提取取一一定定要要注注意意避避免免丢失。丢失。第八十二页，讲稿共一百一十一页哦l浓浓缩缩提提取取液液时时，一一定定要要防防止止蒸蒸干干，避避免免胡胡萝萝卜卜素素在在空空气气中中氧氧化化或或因因高高温温、紫紫外外线线直直射射等等

30、破破坏坏。定定容容、点点样样、层层析析后后剪样点等操作环节一定要迅速。剪样点等操作环节一定要迅速。第八十三页，讲稿共一百一十一页哦三、维生素三、维生素D的测定的测定第八十四页，讲稿共一百一十一页哦第八十五页，讲稿共一百一十一页哦第八十六页，讲稿共一百一十一页哦7-脱氢胆固醇经光照可转变为脱氢胆固醇经光照可转变为VD3第八十七页，讲稿共一百一十一页哦第八十八页，讲稿共一百一十一页哦维生素维生素D的测定方法有：的测定方法有：l比色法、比色法、l紫外分光光度法、紫外分光光度法、l气相色谱法、气相色谱法、l液相色谱法液相色谱法l薄层层析法薄层层析法第八十九页，讲稿共一百一十一页哦（一）HPLC法l试样

31、经皂化后，用苯提取不皂化物，馏去苯后，试样经皂化后，用苯提取不皂化物，馏去苯后，使用第一阶段的分取型使用第一阶段的分取型HPLC，分取维生素，分取维生素D组分，以去除大部分干扰物质。得到的维生组分，以去除大部分干扰物质。得到的维生素素D组分，用于第二阶段分析型组分，用于第二阶段分析型HPLC，得，得样品色谱图，与按同样操作条件得到的维生素样品色谱图，与按同样操作条件得到的维生素D标准品的色谱图比较进行定量。标准品的色谱图比较进行定量。第九十页，讲稿共一百一十一页哦l本法对维生素本法对维生素D2和和D3不加区别，两者混合不加区别，两者混合存在时，以总维生素存在时，以总维生素D定量。定量。l按国际

32、单位，每按国际单位，每1IU相当于相当于0.025 g维生素维生素D。第九十一页，讲稿共一百一十一页哦(二二)三氯化锑比色法三氯化锑比色法1、原理、原理 在在三三氯氯甲甲烷烷溶溶液液中中，维维生生素素D与与三三氯氯化化锑锑结结合合生生成成一一种种橙橙黄黄色色化化合合物物，呈呈色色强强度度与维生素与维生素D的含量成正比。的含量成正比。第九十二页，讲稿共一百一十一页哦3、测定步骤、测定步骤 l(1)样品处理样品处理l(2)测定测定 第九十三页，讲稿共一百一十一页哦4 结果计算第九十四页，讲稿共一百一十一页哦5说明与讨论说明与讨论 食食品品中中维维生生素素D的的含含量量一一般般很很低低，而而维维生生

33、素素A、维维生生素素E、胆胆固固醇醇，甾甾醇醇等等成成分分的的含含量量往往往往都都大大大大超超过过维维生生素素D、严严重重干干扰扰维维生生素素D的的测测定定，因因此此测测定定前前必必须须经经过过层析除去这些干扰成分。层析除去这些干扰成分。第九十五页，讲稿共一百一十一页哦可参考柱层析图第九十六页，讲稿共一百一十一页哦l此法不能区分此法不能区分D2和和D3，测定值是两者的，测定值是两者的总量。总量。第九十七页，讲稿共一百一十一页哦四、维生素四、维生素E的测定的测定第九十八页，讲稿共一百一十一页哦第九十九页，讲稿共一百一十一页哦第一百页，讲稿共一百一十一页哦第一百零一页，讲稿共一百一十一页哦第一百零

34、二页，讲稿共一百一十一页哦测定方法l比色法l荧光法lGC法lHPLC法（VA、VE）第一百零三页，讲稿共一百一十一页哦（一）HPLC法（VE）l1原理原理试样中的维生素试样中的维生素E经皂化提取处理后，将其从经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱法液相色谱法C18反相柱将维生素反相柱将维生素E分离，经紫分离，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。外检测器检测，并用内标法定量测定。第一百零四页，讲稿共一百一十一页哦维生素维生素A和维生素和维生素E色谱图色谱图第一百零五页，讲稿共一百一十一页哦(二二)比色法比色法1原理原理 维维生生

35、素素E能能将将高高铁铁离离子子还还原原为为低低铁铁离离子子，低低铁铁离离子子与与，联联氮氮苯苯发发生生颜颜色色反反应应，可以进行比色测定。可以进行比色测定。500nm第一百零六页，讲稿共一百一十一页哦3、测定步骤、测定步骤l(1)样品处理样品处理 皂化皂化 纯化纯化 l(2)样品测定样品测定l(3)标准曲线的绘制标准曲线的绘制第一百零七页，讲稿共一百一十一页哦 5说明与讨论说明与讨论l维维生生素素E在在碱碱性性条条件件下下与与空空气气接接触触易易被被氧氧化化，因因此此在在皂皂化化时时，用用氮氮气气流流保保护护，也也可可加加入入焦焦性性没没食食子子酸酸作作为为抗抗氧氧化化剂剂，防止维生素防止维生素E的氧化。的氧化。第一百零八页，讲稿共一百一十一页哦l此此方方法法的的反反应应没没有有特特异异性性，当当有有其其他他还还原原性性物物质质存存在在时时，同同样样能能与与Fe+3反反应应生生成成Fe2+，使使测测定定结结果果偏偏高高，故故处处理理前前应应将将它们除去。它们除去。第一百零九页，讲稿共一百一十一页哦l由由于于光光能能促促进进维维生生素素E氧氧化化，因因此此尽尽可可能避光操作能避光操作第一百一十页，讲稿共一百一十一页哦感感谢谢大大家家观观看看第一百一十一页，讲稿共一百一十一页哦