可见紫外外分光光度法精选PPT.ppt

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1、关于可见紫外外分光光度法第1页，讲稿共29张，创作于星期日 颜色的产生白光白光(太阳光太阳光)：由各种单色光组成的复合光：由各种单色光组成的复合光吸光光度法的基本原理吸光光度法的基本原理第2页，讲稿共29张，创作于星期日 有色物质的不同颜色是由于吸收了不同波长的光所致。溶液能选择性地吸收某些波长的光，而让其他波长的光透过，这时溶液呈现出透过光的颜色。透过光的颜色是溶液吸收光的互补色。有色溶液对各种波长的光的吸收情况，常用光吸收曲线来描述。将不同波长的单色光依次通过一定的有色溶液，分别测出对各种波长的光的吸收程度（用字母A表示）。以波长为横坐标，吸光程度为纵坐标作图，所得的曲线称为吸收曲线或吸收

2、光谱曲线。第3页，讲稿共29张，创作于星期日能复合成白光的两种颜色的光叫能复合成白光的两种颜色的光叫互补互补色光色光。物质所显示的物质所显示的颜色是吸收光颜色是吸收光的互补色。的互补色。第4页，讲稿共29张，创作于星期日第5页，讲稿共29张，创作于星期日分光光度分析法是以物质对光的选择性吸收为基础的分析方法。根据物质所吸收光的波长范围不同紫外分光光度法可见分光光度法可见分光光度法红外分光光度法红外分光光度法第6页，讲稿共29张，创作于星期日 几乎所有的无机离子和许多有机化合物可以用分光光度法进行测定。如土壤中的氮、磷以及植物灰、动物体液中各种微量元素的测定。通常，待测物质的含量1105时，能够

3、用分光光度法准确测定。所以它主要用于测定微量组分。第7页，讲稿共29张，创作于星期日n 光分析法：光分析法：基于物质基于物质发射发射的电磁辐射或电的电磁辐射或电磁辐射能量与磁辐射能量与待测物质待测物质相互相互作用后作用后所产生所产生的的辐射信号辐射信号与物质与物质组成及结构组成及结构关系所建立关系所建立起来的分析方法起来的分析方法n吸光度吸光度,absorbance,是指光线通过溶液或是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度某一物质前的入射光强度 与该光线通过溶与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的以液或物质后的透射光强度比值的以10为底为底的对数（即的对数（即lg(Iin/Iout)，影

4、响它的因素有溶，影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等。剂、浓度、温度等等。简单的说，吸光度就是表示物质对光的吸收简单的说，吸光度就是表示物质对光的吸收程度程度第8页，讲稿共29张，创作于星期日（1）能源提供能量）能源提供能量；（2）能量与被测物之间的相互作用；）能量与被测物之间的相互作用；（3）产生信号。）产生信号。基本特点基本特点：（1）一般光分析法均包含三个基本过程；）一般光分析法均包含三个基本过程；（2）选择性测量，不涉及混合物分离（不同于色谱分）选择性测量，不涉及混合物分离（不同于色谱分析）；析）；（3）涉及大量光学元器件。）涉及大量光学元器件。三个基本过程第9页，讲稿共29张，创作于星

5、期日 溶液颜色与光吸收的关系 光波是一种电磁波。电磁波包括无线电波、微光波是一种电磁波。电磁波包括无线电波、微波、红外光、可见光、紫外光、波、红外光、可见光、紫外光、x x射线等。如果按射线等。如果按照其频率或波长的的大小排列，可见光只是电磁波照其频率或波长的的大小排列，可见光只是电磁波中一个很小的波段。见表中一个很小的波段。见表12121 1第10页，讲稿共29张，创作于星期日 在在光光谱谱分分析析中中，依依据据物物质质对对光光的的选选择择性性吸吸收收而而建建立立起起来来的的分分析析方法称为吸光光度法方法称为吸光光度法,主要有主要有:红红外外吸吸收收光光谱谱：分分子子振振动动光光谱谱，吸吸收

6、收光光波波长长范范围围2.5 1000 m,主要用于有机化合物结构鉴定。主要用于有机化合物结构鉴定。紫紫外外吸吸收收光光谱谱：电电子子跃跃迁迁光光谱谱，吸吸收收光光波波长长范范围围200 400 nm（近紫外区）（近紫外区），可用于结构鉴定和定量分析。，可用于结构鉴定和定量分析。可可见见吸吸收收光光谱谱：电电子子跃跃迁迁光光谱谱，吸吸收收光光波波长长范范围围400 750 nm，主要用于有色物质的定量分析。主要用于有色物质的定量分析。第11页，讲稿共29张，创作于星期日吸收曲线的讨论n （1）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。）同一种物质对不同波长光的吸光度不同。吸光度最大处对应的波长称为吸

7、光度最大处对应的波长称为最大吸收波长最大吸收波长maxn （2）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似）不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似max不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和不变。而对于不同物质，它们的吸收曲线形状和max则不同。则不同。n （3）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质定性分析的依据之一。）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质定性分析的依据之一。n （4）不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度 A 有差异，在有差异，在max处吸处吸光度光度A 的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据。的差异最大。此特

8、性可作为物质定量分析的依据。n （5）在在max处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸收曲线处吸光度随浓度变化的幅度最大，所以测定最灵敏。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。是定量分析中选择入射光波长的重要依据。第12页，讲稿共29张，创作于星期日KMnO4的颜色及吸收光谱第13页，讲稿共29张，创作于星期日叶绿素的结构和吸收光谱第14页，讲稿共29张，创作于星期日第二节 紫外可见分光光度计第15页，讲稿共29张，创作于星期日仪器仪器 紫外-可见分光光度计第16页，讲稿共29张，创作于星期日一、基本组成一、基本组成 general process1.1.光源光源 在整个紫外

9、光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在3202500 nm。紫外区：氢、氘灯。发射185400 nm的连续光谱。第17页，讲稿共29张，创作于星期日 2.2.单色器单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。长单色光的光学系统。入射狭缝入射狭缝：光源的光由此进入单色器；：光源的光由此进入单色器；准光装置准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；色散元件色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅

10、；：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅；聚焦装置聚焦装置：透镜或凹面：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝；色光聚焦至出射狭缝；出射狭缝出射狭缝。第18页，讲稿共29张，创作于星期日3.3.样品室样品室 样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英紫外区须采用石英池池，可见区一般用玻璃池。可见区一般用玻璃池。4.4.检测器检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。5.5.结果显示记录系统结果显示记录系统 检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处

11、理第19页，讲稿共29张，创作于星期日二、分光光度计的类型二、分光光度计的类型1.1.单光束单光束 简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度，一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。2.2.双光束双光束 自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，价格较高。第20页，讲稿共29张，创作于星期日3.3.双波长双波长 将不同波长的两束单色光(1、2)快束交替通过同一吸收池而后到达检测器。产生交流信号。无需参比池。=12nm。两波长同时扫描即可获得导数光谱。第21页，讲稿共29张，创作于星期日第22页，讲稿共29张

12、，创作于星期日A 原理第23页，讲稿共29张，创作于星期日光栅光栅和棱和棱镜分镜分光原光原理理第24页，讲稿共29张，创作于星期日第25页，讲稿共29张，创作于星期日双光束光度计动画示意动 画第26页，讲稿共29张，创作于星期日双波长光度计光路示意图第27页，讲稿共29张，创作于星期日医医疗疗器械器械产产品品对对紫外吸光度的要求紫外吸光度的要求GB 8368-2005、GB 8369-2005 n将将浸浸提提液液通通过过孔孔径径为为0.45m的的滤滤膜膜进进行行过过滤滤，以以避避免免漫漫射射光光干干扰扰。在在制制备备后后5h内内，将将该该溶溶液液放放人人1cm的的石石英英池池中中，空空白白液液放放入入参参比比池池中中，用用扫扫描描UV分分光光光光度度计计记记录录250 nm-320 nm波波长长范范围围内的光内的光谱谱。n以吸光度以吸光度对应对应波波长长的的记录图谱报记录图谱报告告结结果。果。n上上述述方方法法试试验验时时，浸浸提提液液的的吸吸光光度度应应不不大大于于0.1第28页，讲稿共29张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看第29页，讲稿共29张，创作于星期日