DNA的粗提取和鉴定市级公开课.pptx

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1、一、基础知识一、基础知识（一）提取（一）提取DNADNA的方法的方法1.1.提取DNADNA的基本思路利用利用利用利用DNADNA与与与与RNARNA、蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质和和和和脂质脂质脂质脂质等等等等在物理和在物理和化学性质方面的差异化学性质方面的差异,提取提取提取提取DNADNA，去除其他成，去除其他成，去除其他成，去除其他成分分分分第1页/共12页（1 1）DNA的溶解性思考思考思考思考1 1 1 1：图中：图中：图中：图中DNADNADNADNA溶解度最小的浓度是多少溶解度最小的浓度是多少溶解度最小的浓度是多少溶解度最小的浓度是多少？2.DNA2.DNA的理化性质（2 2）DNA

2、不溶于酒精溶液DNADNADNADNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将于酒精。将于酒精。将于酒精。将DNADNADNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。思考思考思考思考2 2 2 2：如何控制浓度达到让：如何控制浓度达到让：如何控制浓度达到让：如何控制浓度达到让DNADNADNADNA析出的目的？析出的目的？析出的目的？析出的目的？0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L向向

3、向向NaClNaClNaClNaCl溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从溶液中加入蒸馏水，使其溶液浓度从2mol/L2mol/L2mol/L2mol/L下降到下降到下降到下降到0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L第2页/共12页（3 3）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶蛋白酶蛋白酶蛋白酶水解蛋白质，水解蛋白质，水解蛋白质，水解蛋白质，对对对对DNADNADNADNA没有影响没有影响没有影响没有影响 高高高高 温温温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受大多数蛋

4、白质不能忍受6060606080808080 而而而而DNADNADNADNA在在在在80808080以上才会变性以上才会变性以上才会变性以上才会变性 洗涤剂洗涤剂洗涤剂洗涤剂溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对但对但对但对DNADNADNADNA没有影响没有影响没有影响没有影响（4 4）特定的颜色反应）特定的颜色反应鉴定鉴定DNADNA沸水浴条件下，沸水浴条件下，沸水浴条件下，沸水浴条件下，DNADNADNADNA与二苯胺反应呈现与二苯胺反应呈现与二苯胺反应呈现与二苯胺反应呈现蓝色。蓝色。蓝色。蓝色。第3页/共

5、12页二、实验设计二、实验设计问题导学问题导学问题讨论问题讨论1 1：什么样的材料更适合提取：什么样的材料更适合提取DNADNA？对植物和动物细胞处理的方法是否相同？对植物和动物细胞处理的方法是否相同？问题讨论问题讨论2 2：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取DNADNA有有 哪几种方案，有什么不同？哪几种方案，有什么不同？问题讨论问题讨论3 3：DNADNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得 到白色丝状物？到白色丝状物？问题讨论问题讨论4 4：鉴定：鉴定DNADNA的具体方法是什么？在必修的具体方法是什么？在必修1 1教材

6、实教材实 验中还用到哪种试剂来观察验中还用到哪种试剂来观察DNADNA在细胞中的分布在细胞中的分布第4页/共12页二、问题导学二、问题导学问题讨论问题讨论1 1：什么样的材料更适合提取：什么样的材料更适合提取DNADNA？对植物和动物细胞处理的方法是否相同？对植物和动物细胞处理的方法是否相同？选用选用DNADNA含量相对较高的组织，易得易破裂如鸡血含量相对较高的组织，易得易破裂如鸡血(加柠檬加柠檬酸钠防止凝固酸钠防止凝固)；或植物细胞如菜花需要加洗涤剂和食盐并充分搅拌和研磨。或植物细胞如菜花需要加洗涤剂和食盐并充分搅拌和研磨。对应训练对应训练1 1：你认为下列提供的材料中哪些不适合提取DNA？

7、洋葱、猕猴桃、大肠杆菌、猪血、鸡血。答案：答案：大肠杆菌、猪血。大肠杆菌大肠杆菌1 1条条DNADNA，哺乳动物血红细胞不，哺乳动物血红细胞不含细胞核和从多细胞器，没有含细胞核和从多细胞器，没有DNADNA第5页/共12页问题讨论问题讨论2 2：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取：去除滤液中的杂质即初步纯化粗提取DNADNA有哪几种有哪几种方案，有什么不同？方案，有什么不同？方案一：向滤液中加入方案一：向滤液中加入2mol/l2mol/l的的NaCl,NaCl,充分溶解充分溶解DNADNA，过滤去除杂，过滤去除杂质，加入蒸馏水，使质，加入蒸馏水，使DNADNA析出直至析出物不再增加，过滤得到析出

8、直至析出物不再增加，过滤得到DNADNA析出物，去除溶液中的杂质。可反复多次溶解析出物，去除溶液中的杂质。可反复多次溶解DNADNA去除杂质。再去除杂质。再将析出物溶解到将析出物溶解到2mol/l2mol/l的的NaClNaCl，用纱布过滤去杂质后，再向滤液，用纱布过滤去杂质后，再向滤液中加入等体积的冷酒精进一步提纯中加入等体积的冷酒精进一步提纯方案二：直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中的蛋白质分解。方案二：直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中的蛋白质分解。方案二：直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将滤液中的蛋白质分解。方案二：直接向滤液中加入嫩肉粉，即木瓜蛋白酶，将

9、滤液中的蛋白质分解。方案三：将滤液放在方案三：将滤液放在方案三：将滤液放在方案三：将滤液放在6060606075757575度的恒温水浴箱中保温度的恒温水浴箱中保温度的恒温水浴箱中保温度的恒温水浴箱中保温1010101015min,15min,15min,15min,严格控制温度。严格控制温度。严格控制温度。严格控制温度。第6页/共12页问题讨论问题讨论3 3：DNADNA在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得在酒精中析出时注意哪些问题才能确保得到白色丝状物？到白色丝状物？问题讨论问题讨论4 4：鉴定：鉴定DNADNA的具体方法是什么？在必修的具体方法是什么？在必修1 1教材实教材实验中还用到什

10、么别的试剂用来鉴定验中还用到什么别的试剂用来鉴定DNADNA呢？呢？加入与滤液等体积、冷却的酒精，体积分数为加入与滤液等体积、冷却的酒精，体积分数为95%95%，用玻，用玻璃棒轻缓地沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物。璃棒轻缓地沿一个方向搅拌，卷起白色丝状物。先将丝状物溶解于先将丝状物溶解于2mol/l2mol/l的的NaClNaCl溶液中溶解，再加入溶液中溶解，再加入4ml4ml二苯胺试剂，沸水浴中加热，与空白对照组对照比较颜色二苯胺试剂，沸水浴中加热，与空白对照组对照比较颜色变化。变化。第7页/共12页三、书写三、书写DNADNA粗提取和鉴定的主要步骤粗提取和鉴定的主要步骤 要求：先写一句概括

11、性话语，具体细节要求：先写一句概括性话语，具体细节只写相关试剂和关键操作方法，要求写出此只写相关试剂和关键操作方法，要求写出此步骤中步骤中DNADNA在哪里？在哪里？1 1、材料的选择材料的选择 2 2、破碎细胞释放、破碎细胞释放DNADNA3 3、去除滤液中的杂质、去除滤液中的杂质4 4、DNADNA的析出的析出与鉴定与鉴定DNA含量丰富的细胞含核物质DNA的滤液DNA再溶解在2mol/lNaCl中向2mol/lNaCl 中加入冷酒精，让DNA析出物在沸水浴下与二苯胺反应显蓝色第8页/共12页1 1填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。提取鸡血细胞中核物质：溶解核内DNA：析出2mol/LN

12、aCl溶液中的DNA：DNA白色丝状物的析出：DNA的鉴定：四、典型例题四、典型例题 蒸馏水2mol/LNaCl加入蒸馏水95%冷酒精沸水浴中与二苯胺反应第9页/共12页2、某同学在做DNA的粗提取与鉴定实验中，加入二苯胺鉴定的结果是有DNA的试管中溶液颜色很淡，其原因不可能是（）A经蒸馏水处理的红细胞，在用玻璃棒搅拌时，时间偏少，使红细胞破裂数量少B未进行沸水浴或沸水浴时间短，导致DNA含量少，染色 时间不够C选择鸡血液时，选用鸡血细胞液，D用NaCl溶液进行盐析时，所配制的NaCl溶液浓度达不到 0.14moL/L，使析出的DNA少C第10页/共12页3、本实验中有三次过滤：过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液 过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl溶液以上三次过滤分别为了获得（）A A、含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液 B B、含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液 C C、含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布上的DNA D D、含较纯的DNA滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液A第11页/共12页感谢您的欣赏！第12页/共12页